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王宏伟: 作品数：10 被引量：6H指数：1; 供职机构：解放军农牧大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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在重组痘苗病毒中共表达HIV-1env与hIL-6基因: 2000年; 本实验以 HIV- 1env与 h IL - 6基因在重组痘苗病毒中的共表达研究为目的 ,将痘苗病毒复制非必需区血凝素(HA )基因作为侧翼 ,把编码人白细胞介素 6 (h IL - 6 )的基因片段克隆到真核表达质粒 p J38env的下游 ,构建成含有 HIV- 1env与 h IL - 6两种外源基因的重组表达质粒 PJ38E- IL 6 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选 ,获得了重组痘苗病毒 v J38E- IL 6。经间接免疫荧光试验、Dot- EL ISA和 Western bolt等检测证明 ,重组病毒能同时表达 env蛋白和 IL - 6蛋白 ,表达产物的分子量分别为 98k Da、2 6 k; 王玉红金宁一李体远王宏伟刘素寰王弘郡李萍安汝国殷震; 关键词：重组痘苗病毒艾滋病

HIV-1结构蛋白在重组痘苗病毒中的高效表达研究: 1997年; HIV-1粒子中含有3类结构蛋白,即核心蛋白(Gag)、聚合酶(pol)和外膜蛋白(Env)。Gag蛋白既具有诱导体液免疫和细胞免疫的抗原决定簇。; 金宁一毛春生王秀清王秀清田梅郭志儒李钟洙王宏伟李体远; 关键词：重组痘苗病毒 HIV-1 结构蛋白 GAG基因抗原决定簇 GAG蛋白

HIV-1核心蛋白的表达与纯化: 2000年; 将编码人I型免疫缺陷病毒(HIV1)核心蛋白p24gag的基因序列克隆到原核表达载体pET28(b)中,高效表达了N,C端融合His·Tagp24蛋白,所表达的重组p24蛋白占菌体总蛋白的46%。在变性条件下,使用NiNTA亲和层析法纯化了p24蛋白,纯度为94%。菌体中及纯化、复性后的目的蛋白均能与抗HIV1p24单克隆抗体发生特异性反应。用纯化的p24蛋白免疫小鼠,4周时小鼠血清抗p24抗体效价达1∶400。实验结果表明:大肠杆菌表达的HIV1p24蛋白纯化后可用作HIV1检测试剂的原料。; 金宁一李体远刘晓明王玉红王宏伟郭志儒安汝国殷震; 关键词：大肠杆菌纯化基因表达核心蛋白

HIV-1 Gag p^(17-)p^(24)在痘苗病毒中的表达及性质研究: 2000年; 研究了重组痘苗病毒表达的HIV1核心蛋白(Gag)p17p24蛋白的一些生物学及免疫学特点。间接免疫荧光、DotELISA及Westernblot结果表明,构建的两株重组病毒分别表达了HIV1Gagp24及p17p24融合蛋白。电镜观察证实,Gagp24及p1724重组蛋白均可形成病毒样粒子。重组病毒可诱导小鼠产生抗HIV1Gagp24抗体。重组病毒感染BHK21细胞后,可见由于细胞凋亡而致的染色体DNA断裂“梯子”电泳图。; 李体远金宁一王宏伟郭志儒方厚华安汝国殷震; 关键词：HIV-1 痘苗病毒核心蛋白疫苗

HIV-1 Gag蛋白的高效表达调控研究: 1997年; LTR位于HIV前病毒同DNA基因组的两末端,Gag基因位于5′端LTR的下游。LTR对转录的调控作用主要是由5′端LTR进行的。LTR具有启动子的作用,在结构上具有真核启动子的典型特征。另外,HIV-1 Gag蛋白还有能够自我装配成病毒样粒子(virus like particle,VLP)并从细胞中释放出来的重要特性。我们利用痘苗病毒表达系统。; 毛春生金宁一郭志儒郭志儒马奉龙王宏伟李萍殷震; 关键词：GAG蛋白重组痘苗病毒 HIV-1 启动子 GAG基因重组病毒

HIV-2 Gag蛋白的表达研究: 1997年; HIV-2是引起艾滋病的主要病原之一,与HIV-1相比,其致病性弱,感染的潜伏期长,有的甚至不发展成艾滋病。但HIV-2的易感宿主较HIV-1广,除人和猩猩之外,HIV-2还能感染猴等灵长类动物,这将为艾滋病疫苗和实验动物模型的研究提供有利条件。我们应用原核高效表达载体pBV220在大肠杆菌中分别表达了HIV-2gag全部和部分蛋白(去掉与pol重叠序列)。在此基础上我们又将gag全部和部分序列置于痘苗病毒P7.; 王秀清金宁一田梅郭志儒郭志儒方厚华王宏伟马奉龙司兴奎殷震; 关键词：GAG蛋白 HIV-2 重组痘苗病毒高效表达载体大肠杆菌中表达

分离型痘苗病毒表达载体的构建及HIV-1 gag p17-24的表达被引量：1: 1999年; 目的:探索荧光蛋白作为报告基因以及His·Tag作为纯化标签在重组痘苗病毒表达系统中的应用.方法:将N-端融合His·Tag基因序列,插入痘苗病毒表达载体pSFJ2-16,并在其多克隆位点下游装入带有巨细胞病毒(CMV)启动子的突变型荧光蛋白基因(GFP),构建成N-端融合His·Tag并带有荧光蛋白报告基因的分离型痘苗病毒表达载体.再从pET-28中切出C-端融合His·Tag及多克隆位点序列,并与CMV-FP基因一同装入pSFJ2-16,构建成C-端融合His·Tag的分离型痘苗病毒表达载体.将人免疫缺陷病毒-1型(HIV-1)核心蛋白(gag)p17-24基因分别插入上述载体,并筛选出重组病毒.结果:实验表明,重组病毒表达了gag蛋白.结论:将His-Tag的纯化标签加入到通用型痘苗病毒表达载体中用于纯化表达的目的蛋白,该方法是可行的.荧光蛋白基因作为一个筛选标记基因应用于痘苗病毒载体系统还有待进行进一步研究.; 金宁一王宏伟殷震李体远王玉红罗坤安汝国; 关键词：痘苗病毒荧光蛋白 HIV-1

HIV-1基质蛋白P17的原核表达与纯化被引量：1: 2001年; 目的 :HIV- 1p17基因在大肠杆菌中高效表达并纯化目的蛋白。方法 :1PCR法扩增的 HIV-1p17基因片段克隆至 p ET2 8c质粒 ;2重组质粒分别在大肠杆菌 BL 2 1、BL 2 1(DE3)、BL 2 1(DE3) plys S及 HMS174 (DE3)中表达 ;3用 Ni- NTA金属树脂层析法纯化目的蛋白 ;4用酶联免疫法和免疫印迹法检测纯化蛋白的特异性。结果 :重组质粒在 BL (DE3)中表达量最高 ,目的蛋白表达量占全菌体裂解物的32 % ,纯化后其纯度达 95% ,纯化蛋白可与 p17Mc Ab和 HIV- 1阳性血清发生特异反应。结论 :带有HIV- 1p17片段的重组质粒 p ET2 8c在大肠杆菌 BL2 1(DE3)中获得高效表达 ,蛋白表达量可满足其免疫、生物活性的进一步研究 ;用 Ni- NTA金属树脂层析法纯化蛋白 ,方法简便 ,蛋白丢失少 ,纯度高 ;纯化的重组蛋白 HIV- 1p17可用来临床早期诊断 HIV- 1感染者 ,同时可预测患者的临床进程。; 李钟洙金宁一王宏伟郭志儒李萍杨翰仪殷震; 关键词：纯化 HIV-1 酶联免疫法免疫印迹法

HIV-1Gag p24的高效表达: 1999年; 将编码人免疫缺陷病毒I型 (HIV 1)核心蛋白p2 4的基因序列克隆到原核表达载体pET2 8(b)中 ,并转化不同的受体菌后 ,用IPTG诱导表达。SDS PAGE分析表明 ,受体菌BL2 1(DE3)plysS表达量最高 ,表达的重组p2 4蛋白占菌体总蛋白的 46 %。目的蛋白可与抗HIV 1p2 4单克隆抗体发生特异性反应。; 李体远金宁一王玉红王宏伟方厚华安汝国殷震; 关键词：HIV-1 核心蛋白大肠杆菌

抗HIV核心蛋白p24单克隆抗体的研制及鉴定被引量：4: 1998年; 抗ＨＩＶ核心蛋白ｐ２４单克隆抗体的研制及鉴定王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震（解放军农牧大学研究所病毒室，长春１３００６２）人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）是导致人获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的主要病原［１］。对ＨＩＶ１感染的诊断，常...; 王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震; 关键词：抗HIV 单克隆抗体