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基于非洲猪瘟病毒p30与p54蛋白表位串联多肽的间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：2: 2022年; 旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的间接ELISA方法。本研究以两株纯化的ASFV p30与p54蛋白单克隆抗体(mAbs)为靶分子,利用噬菌体展示十二肽库进行四轮生物淘选,筛选多肽表位,以氨基酸GGG为接头设计合成表位串联多肽作为包被抗原,通过棋盘滴定法确定间接ELISA的最佳反应条件,利用不同类型血清样本对建立的方法进行特异性分析、敏感度分析、稳定性分析及符合性评价。噬菌体淘选试验结果表明^(146) PAEPYTT ^(152)为本实验室保存的mAb所识别的p54蛋白抗原表位核心序列。ELISA条件优化试验结果显示,以鸡卵白蛋白(OVA)作为N端偶联物的表位串联多肽抗原具有较低的非特异性血清反应背景,当多肽以碳酸盐缓冲液包被(2μg·mL^(-1)),血清以封闭液(1%明胶溶液)稀释100倍,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体以0.05%PBST溶液稀释5000倍时,反应效果最佳;以上述优化后的条件确定了血清抗体阳性临界值为0.339。方法评价试验结果显示,该方法与经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗体阳性血清均无交叉反应,能检测低至1600倍稀释的ASFV阳性血清,具有较好的重复性。用该方法与商品化的ASFV抗体检测试剂盒同时检测320份猪血清样本,两种方法的相对特异性和相对敏感性分别为97.6%与97.3%,总体符合率达97.5%(312/320)。综上表明,本研究建立的多肽间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性及重复性,具有发展为临床诊断试剂盒的潜在应用价值。; 马俊王志远梁杏玲郑泽中杨汉春杨汉春张桂红; 关键词：非洲猪瘟病毒间接ELISA

RNAi技术在动物病毒性疾病研究中的应用: 2010年; 使靶基因表达沉默的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,由于其独特的生物学作用,已经作为动物疫病防控领域的新手段在动物病毒性疾病研究中得到了广泛的应用。本文对RNAi技术在猪病、禽病及牛病研究中的应用进行简要综述。; 安玉甫王衡; 关键词：RNAI技术双链RNA

重视哲学思想在兽医病理学本科教学中的渗透被引量：1: 2012年; 兽医病理学在兽医本科教学体系中占有重要为的位置,它是连接基础兽医学和临床兽医学的桥梁。在学习与应用兽医病理学的过程中以及该门科学的发展过程中充分体现了实践与认识、对立与统一等哲学理论,可以说兽医病理学理论与唯物主义哲学理论密不可分。本文通过阐述质量转化规律、部分与整体的关系、因果交替等重要哲学思想在兽医病理学中的体现,进一步说明辩证唯物主义哲学理论在兽医病理学本科教学中以及科研实践中的重要性。; 王衡刘博奇宁章勇; 关键词：哲学兽医病理学本科教学

猪戊型肝炎病毒液相蛋白芯片检测方法的建立被引量：6: 2017年; 构建了ORF2蛋白原核表达体系Rosetta-pMAL-c5X-ORF2,经IPTG诱导表达后,对重组蛋白进行SDSPAGE和Western blot分析,并采用镍柱亲和层析法进行纯化,以该蛋白为抗原建立液相蛋白芯片检测方法。结果显示:本试验成功表达了可溶性ORF2蛋白,具有良好的抗原性。液相蛋白芯片检测方法对猪常见的其他疾病阳性血清无交叉反应,其批内、批间变异系数分别为5%和6.6%。对102份临床血清样本检测结果显示,该方法与商品化ELISA试剂盒符合率为93.1%,关联性卡方检验显示2个方法具有一致性(P<0.01)。本试验为临床HEV血清抗体的检测提供了一种特异、灵敏的新型快速检测技术,为建立猪病多重检测方法提供了基础。; 纪方晓陈济铛梁焕斌朱婉君古洪浪王衡王林川张桂红; 关键词：猪戊型肝炎病毒原核表达液相蛋白芯片

BALB/c小鼠Doppel蛋白的原核表达及其抗血清的制备: 2011年; 利用已克隆的BALB/c小鼠Doppel蛋白基因,将其成熟蛋白编码区亚克隆至表达载体pGEX-6P-1上,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-PRND。将重组蛋白表达载体转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE及Western blot分析结果表明,BALB/c小鼠Doppel蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达。对表达的蛋白进行提取和纯化并免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,初步建立了小鼠睾丸Doppel蛋白组织学分布的免疫组织化学方法。为进一步研究Doppel的结构、功能及其在TSEs发生发展中的作用提供基础材料和数据。; 程艳芬王衡宁章勇潘俊斌安玉甫吴新涛; 关键词：BALB/C小鼠原核表达多克隆抗体

兽医临床犬肿瘤病例的统计分析被引量：10: 2013年; 近年来，我国的犬饲养量日益增加，犬的肿瘤性疾病在小动物临床上有日益增多的趋势，成为严重危害宠物犬和工作犬最主要的疾病之一。关于犬肿瘤性疾病的发生原因、肿瘤类型、治疗手段及发生趋势缺乏系统的统计学分析资料，决策部门制定犬肿瘤性疾病的防控策略时也缺乏相应的依据。; 于梦黄志强童双刘荣昌王衡宁章勇; 关键词：肿瘤性疾病兽医临床工作犬统计分析病例饲养量

兽医病理学本科教学新体系构建思路的探讨被引量：1: 2010年; 兽医病理学是兽医学科的一门基础学科,为提高兽医病理学课堂和实验教学效率,培养高素质兽医专业工作人员,切实提高教学质量,从教学指导思想、教学方法及教学方式等多个方面,对兽医病理学本科教学新体系构建思路进行了初步探讨。; 王衡于博潘俊斌; 关键词：兽医病理学计算机辅助教学临床病理讨论

牛白细胞介素2基因原核表达及多克隆抗体制备被引量：2: 2011年; 根据GenBank发表的牛白细胞介素2(BoIL-2)基因序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增出重组牛白细胞介素2(rBoIL-2)基因。将克隆片段与pMD18-T载体连接,并经过酶切及PCR鉴定,测序结果显示,克隆的BoIL-2基因与GenBank发表的BoIL-2基因序列同源性为98.7%。将测序正确的克隆片段与pET30a(+)载体连接,构建重组表达质粒pET30a(+-)rBoIL-2,通过双酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒进行序列测定后在大肠杆菌的表达,分子质量约为23.49ku;表达产物主要分布在包涵体中。Western blotting证实所得到的重组蛋白为BoIL-2重组蛋白。用镍离子亲和树脂对所得的BoIL-2重组蛋白进行纯化,并免疫新西兰兔成功制备兔抗rBoIL-2多克隆抗体,为下阶段的研究提供了重要的试验材料。; 盖仁华王衡郎跃深李广兴张瑞莉马德星张国庆杨贵君; 关键词：白细胞介素-2 原核表达多克隆抗体

一种猪H1N1亚型流感病毒血凝素重组蛋白的制备方法及该病毒抗体的液相芯片检测试剂盒: 本发明首先提供了猪流感病毒的血凝素重组蛋白的制备方法，通过去除HA的信号肽。根据HA序列设计一对带有HIS标签的引物，构建了带有6*His‑麦芽糖结合蛋白（MBP）组合标签的原核表达质粒。在大肠杆菌表达系统中成功获得以可...; 张桂红王衡记方晓孙彦阔冀池海曾梦; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7特异性抗体体外抑制病毒复制被引量：3: 2015年; 为进一步探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白7(Nsp7)在病毒复制过程中发挥的生物学作用,本研究在获得Nsp7可溶性重组蛋白的基础上,首先制备了抗Nsp7蛋白兔源多克隆抗体。确定抗体的免疫活性后,将其与PRRSV共同接种Marc-145细胞。孵育1h后弃掉混合物,加细胞维持液继续培养48h,应用TaqMan探针Real Time PCR方法对培养物中病毒拷贝数进行检查。结果显示,本研究制备的多克隆抗体可以和大肠杆菌表达的Nsp7α、Nsp7β重组蛋白发生特异性结合,并有效用于病毒感染Marc-145细胞后其Nsp7蛋白分布情况的原位检测;更为重要的是,与正常家兔血清相比,不同稀释倍数的抗Nsp7多克隆抗体均可对病毒的复制产生抑制作用,其中10-3倍稀释血清的抑制率可达88.4%。结果表明,Nsp7特异性抗体可有效用于PRRSV抑制试验的研究;Nsp7作为PRRSV复制酶多聚蛋白成员之一,在病毒复制过程中发挥着重要作用。; 刘荣昌张桂红崔进谢杰雄宁章勇王衡; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒抑制

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