程喆
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：厦门大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 多房棘球绦虫钙网蛋白的真核表达及其T、B细胞表位预测被引量：2
- 2020年
- 目的构建多房棘球绦虫钙网蛋白(EmCRT)的真核表达载体,鉴定重组EmCRT蛋白在Hela细胞中的表达,并对其进行T、B细胞表位预测等生物信息学分析。方法根据多房棘球绦虫钙网蛋白基因序列设计特异引物,以多房棘球绦虫原头蚴cDNA为模板,PCR扩增EmCRT基因片段。将此片段插入真核表达载体pcDNA3.3-HA,构建重组质粒pcDNA3.3-HA-EmCRT,并将PCR、酶切和测序鉴定正确的质粒转染Hela细胞,应用Western blot和细胞免疫荧光法检测重组EmCRT蛋白在细胞中的表达。利用ProtParam预测EmCRT的理化性质,SignalP 4.1 Server预测其信号肽序列,PSORT II Prediction预测其亚细胞定位,TMHMM 2.0预测其跨膜结构域,SOPMA和SWISS-MODEL预测其二、三级结构,DNAStar软件分析其亲水性、柔韧性、抗原指数以及表面可及性,并推测可能的B细胞表位;采用SYFPEUTHI的T细胞表位预测工具分别预测细胞毒性T细胞(CTL)和辅助T细胞(Th)表位。结果成功构建了EmCRT的真核表达载体,经Western blot和细胞免疫荧光检测EmCRT在Hela细胞中高效表达。EmCRT蛋白的相对分子质量为45.44×10^(3),等电点为4.47,预测该蛋白含有1个信号肽序列和1个跨膜区域,可能定位于细胞质,具有6个T、B细胞联合表位,分别为51-88 aa、112-154 aa、149-178 aa、185-198 aa、244-263 aa、280-309 aa。结论真核表达的重组多房棘球绦虫钙网蛋白相对分子质量为45.44×10^(3),预测含有T、B细胞表位,为高效抗多房棘球绦虫表位疫苗的研发奠定了基础。
- 陈路娟程喆王彦海赵利美
- 关键词：多房棘球绦虫钙网蛋白真核表达载体抗原表位预测
- 多房棘球绦虫钙网蛋白的原核表达及初步鉴定被引量：1
- 2022年
- 目的原核表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,并对其免疫学功能进行初步鉴定。方法以多房棘球绦虫囊cDNA为模板,PCR扩增目的基因,克隆至pGEX-4T-2载体,构建重组质粒pGEX-4T-2-EmCRT;PCR、酶切鉴定及测序正确后,转化至表达菌BL21(DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;运用10%SDS-PAGE电泳以及Western blot分析鉴定表达的重组蛋白rEmCRT。结果成功构建了重组质粒pGEX-4T-2-EmCRT,转化表达菌BL21后,经IPTG诱导表达及纯化,获得了纯度较高的可溶性重组蛋白rEmCRT,相对分子质量约为72 ku(含表达载体序列);通过Stains all染色,表明rEmCRT具有Ca^(2+)结合能力;免疫学特性鉴定表明rEmCRT具有较好的抗原特异性。结论成功表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,具有免疫反应性,可为包虫病诊断及其疫苗研发提供理论基础。
- 陈路娟咸思奇闫艳徐志坚程喆于桂霞王彦海赵利美
- 关键词：多房棘球绦虫钙网蛋白抗原性
- 牛蜱粗提物对家兔及人的抗凝血作用的实验研究
- 2005年
- 通过体外试验,观察牛蜱粗提物对家兔及人血浆的抗凝血效果.通过测定与比较加入牛蜱粗提物与未加牛蜱粗提物的兔血浆和人血浆的血浆复钙时间(RT)、凝血酶原时间(PT)、白陶土部分凝血酶激活时间(KPTT),发现牛蜱粗提物能使兔血浆及人血浆RT、PT、KPTT均显著延长,且其作用随着牛蜱粗提物用量的增大而增强.实验结果显示牛蜱粗提物具有明显的抗凝作用.
- 程喆杨玉荣王彦海
- 关键词：牛蜱凝血酶原时间纤维蛋白
- 鱊头槽绦虫在食蚊鱼中的感染实验被引量：1
- 2009年
- 摘要在实验室条件下对寄生于食蚊鱼肠道中的鱊头槽绦虫Bothriocephalus acheilognathi Yamaguti,1934生活史进行了研究。结果表明鱊头槽绦虫完成生活史只需要一个中间宿主。该虫种虫卵自孕节排出，在0．85％生理盐水中于23℃～26℃条件下经过20h形成六钩蚴；40—50h后，在周身纤毛的作用下，钩球蚴顶开卵盖从卵壳内孵出。在培养液中可以看到游动的钩毛蚴。用自由的钩毛蚴感染广布中剑水蚤。8天后，在剑水蚤体内可见有发育完全的原尾蚴（22℃～25℃）。原尾蚴在中间宿主体内可存活20天以上，此时用剑水蚤感染阴性食蚊鱼。本次实验中可以观察到在鱼体内发育57天的幼虫。
- 程喆李洪涛王彦海
- 关键词：生活史食蚊鱼
- 多房棘球绦虫钙网蛋白的表达及其与补体组分C1q的相互作用分析被引量：1
- 2021年
- 为表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,并对其进行初步鉴定及结构与补体结合功能分析。本研究以多房棘球绦虫囊cDNA为模板,通过PCR扩增目的基因,克隆至pcDNA3.3-Myc载体,构建重组质粒pcDNA3.3-Myc-EmCRT;PCR、酶切及测序鉴定其正确后,以脂质体转染法转染Hela细胞,运用Western blot、细胞免疫荧光方法检测重组蛋白在细胞中的表达情况;应用生物学软件分析EmCRT结构与功能特点。结果显示:成功构建了重组质粒pcDNA3.3-Myc-EmCRT,其在Hela细胞中可高效表达重组钙网蛋白,表达产物约为46 kDa;预测该蛋白N端含有1个18 aa的信号肽序列,与其他寄生虫CRT氨基酸序列同源性高达41%~56%,存在4个C1q潜在结合位点。本研究结果为抗包虫疫苗和新药的研制提供重要的理论基础。
- 陈路娟程喆王彦海赵利美
- 关键词：多房棘球绦虫钙网蛋白真核表达补体C1Q
