聂芳芳
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中山大学生命科学学院寄生生物研究中心更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶3基因的克隆、表达与免疫原性分析被引量：1
- 2009年
- 目的研究小鼠对阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)半胱氨酸蛋白酶3(TvCP3)重组蛋白的免疫应答。方法用PCR方法从阴道毛滴虫基因组DNA扩增TvCP3基因编码序列,分别用编码前体酶和成熟酶的基因片段构建重组表达质粒pET28b-TvCP3和pET28b-TvCP3C,转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)后进行诱导表达,通过金属螯合层析法(im-mobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化表达产物重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠。BALB/c小鼠分为TvCP3免疫组、TvCP3C免疫组和对照组3组,每组6只,分别用TvCP3重组蛋白、TvCP3C和PBS免疫小鼠。第1次25μg/只,福氏完全佐剂乳化;第2次25μg/只,福氏不完全佐剂乳化;第3次与第4次12.5μg/只,水剂。前3次免疫间隔2周,第4次间隔1周。末次免疫后1周用ELISA测定血清抗体滴度。采集高滴度小鼠血清制备免疫血清,通过蛋白质印迹(Western blotting)分析抗体所识别的阴道毛滴虫虫体或其分泌物中的特异性抗原组分。结果重组表达质粒pET28b-TvCP3和pET28b-TvCP3C均能在E.coli BL21(DE3)中高效表达,重组蛋白占菌体总蛋白的25%以上;ELISA结果显示,纯化的重组蛋白TvCP3和TvCP3C免疫小鼠4次后血清抗体效价分别达1︰204800和1︰102400;Western blotting分析显示,小鼠免疫血清能特异性识别表达产物中的目的蛋白,以及阴道毛滴虫虫体或分泌物中的特异性抗原组分。结论重组表达质粒pET28b-Tvcp3和pET28b-Tvcp3C可在E.coli BL21(DE3)中高效表达,纯化的表达产物具有良好的免疫原性。
- 贾万忠李志赵亮聂芳芳伦照荣
- 关键词：阴道毛滴虫半胱氨酸蛋白酶3重组抗原酶联免疫吸附试验BALB/C小鼠
