胡明宇
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：昆明医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：云南省卫生科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、优化表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建能够表达分泌性人纤溶酶原krinle5(K5)的大肠杆菌工程菌,优化表达并鉴定其抗人血管内皮细胞(ECV)304的生物活性。方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,RT-PCR扩增K5基因,构建原核表达载体pGEX-5X-1/K5,运用工程菌表达蛋白。带谷胱甘肽(GST)标签琼脂糖4B亲和柱层析、纯化蛋白,CellTiter96AQueous细胞增殖检测法(MTS)检测K5对ECV304增殖影响。结果 PCR扩增得到282bp片段,并成功插入pGEX-5X-1质粒,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下工程菌表达了特异性融合蛋白,经凝血酶酶切后得到分子量约为12kD的K5蛋白;K5蛋白能特异性抑制ECV304增殖,抑制率最高蛋白浓度为5ng/L。结论含重组质粒pGEX-5X-1/K5大肠杆菌表达产物量多且易纯化,为包括肿瘤在内的病理性血管增生疾病抗血管生成药物开发做了积极的尝试。
- 柯昌兴王剑松胡明宇毕城伟陈慧诚刘龙丁颜汝平詹辉
- 关键词：纤溶酶原融合蛋白
- Kringle5基因的表达、纯化及其抗膀胱肿瘤作用的初步研究
- 2010年
- 目的获得高纯度并且有活性的K5蛋白.方法继构建了重组质粒pGEX-5X-1-K5的基础上,转化感受态细胞BL-21、DH-5α、Top10,并优化了表达条件,经过裂解、洗涤、溶解包涵体后,用带GST标签的谷胱甘肽琼脂糖4B亲和柱进行纯化,Bradford法测蛋白浓度,分别用ECV304细胞和裸鼠皮下移植瘤模型对蛋白进行了活性测定.结果获得了表达量最高的条件:BL21感受态细胞,诱导时间:6 h,纯化后的K5蛋白纯度达到95%以上,K5浓度为5μg/mL时抑制率最高.裸鼠模型上,K5组肿瘤的生长速度明显慢于PBS对照.结论含有GST的融合蛋白表达载体,表达量多、易于纯化、成本低、蛋白纯度高,并能有效的抑制ECV304细胞,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,为K5的工业化大规模生产奠定了基础.
- 胡明宇王剑松柯昌兴韦海荣赵献张启波
- 关键词：KRINGLE5蛋白纯化膀胱肿瘤
- 膀胱癌组织Kringle5基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定
- 2010年
- Krigle 5（K5）是纤溶酶原裂解片段，生物活性高于内皮抑素和血管抑素，其相对分子质量小、穿透力强，是更有研究前途的内源性血管生成抑制因子。本研究旨在对膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定。
- 柯昌兴王剑松胡明宇毕城伟陈慧诚刘龙丁颜汝平詹辉
- 关键词：膀胱癌组织活性鉴定内源性血管生成抑制因子纯化相对分子质量
- Kringle5基因的克隆、原核表达载体构建和蛋白表达被引量：1
- 2010年
- 目的寻求一条高效且快速获得kingle5蛋白的途径.方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增出kringle5基因,构建出原核表达载体pGEX-5X-1/kringle5,运用工程菌表达蛋白.结果测序表明kringle5基因与GenBank上报道的基因序列相同,并成功表达出kringle5融合蛋白.结论成功构建了人原核表达载体(pGEX-5X-1/kringle5),为获得抗肿瘤药物kringle5提供了一种切实可行的途径,为实体瘤的抗血管生成治疗研究奠定了初步基础.
- 毕城伟柯昌兴王剑松胡明宇管莹刘龙丁
- 关键词：KRINGLE5原核表达载体融合蛋白
- 内皮抑素/人纤溶酶原融合基因与肿瘤治疗
- 2009年
- Endok5作为Endostatin和Kringle5的融合基因,能联合应用两种基因不同的作用机制,从不同途径阻断血管生成.两种基因的协同作用比单纯治疗手段明显抑制了肿瘤细胞的生长,有效降低了肿瘤细胞的细胞毒性.就其分子生物学特征及其在肿瘤治疗中的研究现状作一综述.
- 胡明宇张启波柯昌兴王剑松
- 关键词：融合基因肿瘤治疗基因治疗
