范军
- 作品数：57 被引量：192H指数：8
- 供职机构：安徽农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 一种新型筛选标记玉米丝氨酸消旋酶基因应用于烟草转化技术
- 本发明涉及一种新型筛选标记玉米丝氨酸消旋酶基因应用于烟草转化技术。本发明以玉米自交系B73三叶期的cDNA为模板克隆得到玉米丝氨酸消旋酶基因序列(ZmSR)，将该基因替换双元表达载体pCAMBIA1301上的GUS标记基...
- 范军项艳赵华琳王蕾蕾董庆李媛
- 文献传递
- 一种无基因型限制的玉米基因编辑诱导系的创制方法及其应用
- 本发明涉及一种无基因型限制的玉米基因编辑诱导系的创制方法及其应用，属于基因工程和转基因技术领域，本发明通过将颜色或荧光筛选标记性状和单倍体诱导性状导入具有高效遗传转化能力的自交系中，利用分子标记、颜色或荧光标记及单倍体诱...
- 程备久王子萌范军顾龙江马庆李晓玉武建东王玉蔡荣号江海洋
- 表达大肠杆菌分子伴侣GroEL、GroES和GrpE载体的构建及其应用被引量：2
- 2012年
- 大肠杆菌(Escherichia coli)共表达系统常要求质粒具有不同抗生素抗性以及不同的复制子。利用粘性末端PCR技术,以含有大肠杆菌分子伴侣基因GroEL、GroES和GrpE的pR-GESP质粒为模板,设计两对引物,通过两次独立的PCR反应扩增3个基因的多顺反子,将形成粘性末端的PCR产物插入NcoI和XhoI酶切的pACYCDuet-1质粒,构建的pA-GESP质粒具有p15A复制子及氯霉素抗性,和具有ColE1复制子及卡那霉素抗性表达载体pET28b相容。SDS-PACE显示含有pA-GESP质粒的大肠杆菌细胞中3个分子伴侣蛋白的表达水平和含有pR-GESP质粒的大肠杆菌细胞没有明显差异,它们对玉米丝氨酸消旋酶的可溶性表达有部分促进作用,但对N端含有组氨酸标签的玉米铁氧还蛋白还原酶的表达没有作用,在三个含有不同抗生素基因的质粒中共表达分子伴侣、5-氨基乙酰丙酸合酶和尿卟啉原Ⅲ甲基化酶,两个酶连续催化的荧光产物在细胞内积累量为562.13±3.17/OD_(600),而没有分子伴侣的积累量为457.66±4.98/OD_(600),表明分子伴侣改善部分蛋白在大肠杆菌的可溶性表达和催化功能。
- 许鹏王蕾蕾程备久范军
- 关键词：分子伴侣大肠杆菌
- 表达浑球红细菌hemA基因生产5-氨基乙酰丙酸的研究
- 2010年
- 5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinate acid,ALA)在农业,工业,医药业具有广泛的应用。ALA由5-氨基乙酰丙酸合酶(5-aminolevulinate acid synthase,ALAS)催化产生,其生物合成受终产物血红素的反馈抑制。本研究克隆一种浑球红细菌的hemA基因,序列分析其与已报道的基因具有96%的同源性,蛋白质编码区域也发生改变,并利用生物信息学软件进行同源关系的分析。采用大肠杆菌重组技术,构建表达载体pET28a-hemA,表达了有活性的浑球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)的ALAS,研究了IPTG诱导和PH对研究ALAS的影响,同时分析了重组菌株合成ALA的能力,测定胞外产量。结果表明,在PH 6.5,30 mmol/L琥珀酸和60 mmol/L甘氨酸培养条件下,胞外ALA的最大合成量达到669 mg/mg/L。
- 刘艳江海洋马伟范军程备久朱苏文
- 关键词：HEMA浑球红细菌5-氨基乙酰丙酸同源分析
- 玉米FAD2基因RNA干涉表达载体的构建及转化被引量：4
- 2006年
- 根据已克隆的ZmFAD2基因(GenBank登陆号:DQ496227)设计引物,通过RT-PCR扩增得到120 bp的特异性基因片段作为hpRNA干涉片段。利用pUCCRNA i与pUb i.cas为中间载体,成功构建了含Ub iqu itin启动子和hpRNA i片段的干涉表达载体p1 300+UFIFN。以自主选育的高油玉米自交系幼胚为材料,诱导、继代出胚性愈伤组织,利用携带p1 300+UFIFN质粒的根癌农杆菌LBA4404对其进行遗传转化。对抗性植株进行PCR检测,共获得6株转基因阳性株。
- 陶芳韩国民项艳朱苏文范军程备久
- 关键词：玉米FAD2基因RNA干涉表达载体构建
- 一种无基因型限制的玉米基因编辑诱导系的创制方法及其应用
- 本发明涉及一种无基因型限制的玉米基因编辑诱导系的创制方法及其应用，属于基因工程和转基因技术领域，本发明通过将颜色或荧光筛选标记性状和单倍体诱导性状导入具有高效遗传转化能力的自交系中，利用分子标记、颜色或荧光标记及单倍体诱...
- 程备久王子萌范军顾龙江马庆李晓玉武建东王玉蔡荣号江海洋
- 枯草杆菌ylnF基因编码蛋白产物性质的研究
- 2006年
- 将枯草杆菌ylnF基因经PCR扩增,酶切后插入表达质粒pET15b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,金属螯合亲和层析一步纯化,酶活性测定。结果表明:ylnF基因编码产物是依赖于NAD+的前咕啉-2氧化酶,一个西罗血红素生物合成末端的酶。SDS-PAGE显示YlnF亚基分子量约22kD,全酶分子量约25kD,显示酶为单体酶。将Asp102定点突变Ala102,酶活丧失,表明Asp102在催化中起重要作用。
- 范军陈小峰朱娟程备久
- 关键词：枯草杆菌定点突变
- 银杏叶总黄酮提取测定方法研究被引量：42
- 1998年
- 本文采用回流提取及分光光度法对银杏叶总黄酮进行了定量分析，探讨了总黄酮的提取及测定方法。结果表明：采摘１０月份银杏叶，用７０％乙醇水溶液６０℃回流提取６小时，过滤后采用分光光度法测定银杏叶中总黄酮切实可行。
- 李纯范军郭宁
- 关键词：银杏叶芦丁总黄酮分光光度法
- 表达大肠杆菌谷氨酸-1-半醛氨基转移酶对红色荧光报告蛋白尿卟啉原Ⅲ甲基化酶的影响
- 2010年
- 谷氨酸-1-半醛氨基转移酶(Glutamate-1-semiadhyde aminotransferase,GSAT)是尿卟啉原Ⅲ生物合成上游途径的一个酶,尿卟啉原Ⅲ是红色荧光报告蛋白尿卟啉原Ⅲ甲基化酶(Uroporphyrinogen Ⅲ methyltransferase,UPMT)的底物。为了探明大肠杆菌共表达GSAT对UPMT荧光强度的影响,通过PCR扩增玉米upmt基因,将其插入pETDuet-1质粒中第2个顺反子中,构建的载体命名为pETU,表达UPMT的N端含有组氨酸标签;通过PCR扩增大肠杆菌编码GSAT的hemL基因,定点突变去除hemL基因中NcoⅠ序列,亚克隆至pET-51b质粒,再将获得的hemL基因插入pETU质粒的第一个顺反子中,构建pETeGU载体。表达GSAT的N端含有Strep标签。和单独表达upmt基因相比,表达2个基因后,蛋白印迹分析表明没有明显改变UPMT表达量,光谱扫描分析显示没有改变荧光物质的组成,但是增强了重组细胞的红色荧光物质三甲基咕啉的含量,该物质在354nm有特异吸收。用2mmol/L的GSAT抑制剂3-氨基-2,3二羟基苯甲酸处理后,表达两种酶的菌落荧光消失,表明重组GSAT可能增加内源尿卟啉原Ⅲ水平,从而增强重组UPMT催化产生的红色荧光。
- 叶爱华张宽亮陈宗梅荣亮汪苗范军
- 关键词：大肠杆菌
- 一种黄曲霉菌遗传转化表达载体的构建方法
- 本发明构建了一种适合于黄曲霉菌遗传转化的表达载体，它包括以下两个步骤：一）含筛选标记基因和红色荧光报告基因的融合基因表达盒的供体质粒的构建：1）选择合适的供体骨架载体，2）设计引物，3）基因融合，4）构建含融合基因表达盒...
- 陶芳范军储韬张心雨魏洪璇
- 文献传递
