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乙型肝炎病毒基因型的全球分布及相关研究进展被引量：3: 2011年; 乙型肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染引起的人类急性和/或慢性肝脏疾病。全世界大约20亿人已感染HBV,其中超过3.6亿人为慢性乙肝患者,并有罹患肝硬化和肝癌的高风险。; 袁静潘小霞张顺陈元鼎; 关键词：乙型肝炎病毒基因型地理分布

新发高致病性禽流感H5N1病毒的致病性、传播力研究及进化分析被引量：1: 2014年; 目的对2011年底导致香港红嘴鸥死亡、并与深圳死亡患者分离株高度同源的新发高致病性禽流感H5N1病毒的致病性及传播力进行预警,同时对其序列进行遗传进化分析。方法对新发H5N1病毒进行感染性评价,证实其是否确实具有在人类细胞中增殖的能力,并对新发毒株在细胞及小鼠中的感染性进行评价,并对其在小鼠群体中的传播力进行研究。同时,还基于HA蛋白序列对新发病毒进行遗传分析,确定其进化地位。结果新发H5N1病毒在体外对人源肺细胞具有一定程度的感染性,对小鼠的致病性相比目前毒力最强H5N1毒株及WHO推荐的禽流感疫苗制备株较弱,可在小鼠群体间进行有效传播,但诱发机体体液免疫保护程度较弱。结论新病毒进化地位属于Clade 2.3.2.1,为近年来的国内主流流行株,其进化的过程中暂未发生导致致病性增强的正向选择事件。; 袁静许黎黎鲍琳琳吕琦李枫棣于品秦川; 关键词：H5N1病毒传播力进化分析

痘苗病毒/T7 RNA聚合酶辅助的原核基因在真核细胞中的表达(英文): 2011年; 痘苗病毒/T7RNA聚合酶这一瞬时表达系统由于具有很多优于其他表达系统的特点而被广泛地应用于表达外源蛋白。TB-Chen株轮状病毒的VP6 DNA编码片段插入到原核质粒pETL的噬菌体T7启动子和终止子之间,获得重组表达质粒pET-VP6。构建好的重组表达质粒pET-VP6通过脂质体转染到真核细胞MA104中,用携带噬菌体T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF7-3再感染,可在细胞检测到目的蛋白VP6的表达。研究结果还显示,痘苗病毒vTF7-3感染后,细胞病变较快,严重影响了蛋白的表达量。结果提示,如果能降低痘苗病毒vTF7-3的致细胞病变作用而不影响其在细胞中合成T7 RNA聚合酶的能力,蛋白可能会得到高效表达。为进一步研究VP6基因的特性及更好地应用痘苗病毒/T7 RNA聚合酶这一瞬时表达系统提供理论基础。; 潘小霞张顺文喻玲袁静陈元鼎; 关键词：真核细胞 T7 RNA聚合酶

用液相芯片方法同时检测流感病毒H5N1和H7N9亚型被引量：5: 2015年; 基于液相芯片(Multi-analyte suspension array,MASA)技术建立一种同时对H5N1和H7N9亚型流感病毒进行快速检测的新方法。对国家生物技术信息中心(National center for biotechnology information,NCBI)和欧洲生物信息学中心(The european bioinformatics institute,EBI)核酸数据库中已有的H5、N1、H7和N9核酸片段进行比对分析,并参考世界卫生组织,美国疾病预防控制中心和中国疾病预防控制中心等的相关资料,设计简并引物和探针,将合成的探针与荧光编码微球进行偶联,建立检测方法。利用该方法检测H5N1和H7N9亚型流感病毒和其它常见亚型(H1N1、甲流H1N1、H5N2、BH3N2和H9N2)的标本。建立了一种快速的流感病毒分型方法。这种方法可以同时检测H5N1和H7N9,用已知基因型的样本对这种方法进行验证显示它的特异性很好。灵敏度分析实验也表明这种方法具有很高的灵敏度,可以对含有5个拷贝的样本进行有效的检测。利用液相芯片技术研制的H5N1和H7N9亚型流感病毒检测方法能够用于流感病毒H5N1和H7N9亚型的快速、灵敏、特异性的检测及鉴定。; 袁静鲍琳琳魏强秦川许黎黎; 关键词：液相芯片技术流感病毒 H5N1亚型

H7N9禽流感病毒与其他流感病毒对雪貂致病性与传播力的比较: 2014年; 目的针对2013年3月中国爆发的人感染H7N9禽流感病毒,在雪貂体内进行致病性及传播力的研究,并与甲型H1N1流感病毒、H5N1禽流感病毒进行比较。方法对新发H7N9毒株、甲型H1N1流感病毒、H5N1禽流感病毒感染雪貂后的临床症状、体征,呼吸道排毒情况,组织病理学变化等进行评价和比较,并对H7N9毒株在雪貂群体中的传播力进行研究。结果雪貂模型的临床症状、死亡率、病毒传播以及组织病理学分析显示:H7N9病毒的致病性低于H5N1,与2009年起源于北美的甲型H1N1流感病毒相当。新发H7N9禽流感病毒可以在雪貂的呼吸道、心脏、肝脏以及嗅球进行复制。值得注意的是H7N9禽流感可以通过飞沫在雪貂间进行低水平的传播,并且在传播过程中,病毒基因组内有多个位点的氨基酸发生了替换。结论 H7N9禽流感病毒对雪貂的致病性较H5N1禽流感病毒低,与甲型H1N1流感病毒对雪貂的致病性相当,H7N9禽流感病毒可在雪貂间进行传播。; 邓巍许黎黎鲍琳琳朱华陈霆吕琦李枫棣袁静向志光高凯徐艳峰黄澜李彦红姚艳丰于品; 关键词：传播力动物模型

季节性流感疫苗对小鼠感染H7N9禽流感病毒的保护效力被引量：1: 2014年; 目的评价季节性流感裂解疫苗对流感病毒H7N9的免疫保护效力.方法用我国2012～2013年度季节性流感裂解疫苗,以腹腔注射方式免疫BALB/c小鼠,并设PBS免疫模型组,末次免疫14 d后以5 LD50 A/Anhui/1（H7N9）进行攻试验.感染后观察记录小鼠临床表现,体重变化,并分别于第2天和第4天每组处死3只小鼠,取肺组织和鼻甲骨测病毒滴度和载量.结果感染后疫苗与模型组小鼠体重下降明显,疫苗组存活率为10%,模型组全部死亡.感染后第4天疫苗组鼻甲骨滴度显著低于模型组.血凝抑制试验及中和实验表明免疫小鼠血清无中和H7N9病毒抗体.结论季节性流感疫苗在小鼠中对于H7N9流感病毒感染无明显保护作用.; 吕琦鲍琳琳许黎黎邓巍李枫棣袁静于品姚艳丰秦川; 关键词：季节性流感疫苗免疫保护效力

以轮状病毒VP6为载体的RV/HBV嵌合蛋白的构建及抗原性研究(英文): 2012年; 目的构建轮状病毒(rotavirus,RV)VP6载体及携带乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)外源抗原表位的嵌合质粒,进一步探索研发携带HBV抗原表位的重组嵌合疫苗的技术。方法运用基因克隆和重组技术,构建轮状病毒VP6载体,同时将HBV编码中和抗原表位21个氨基酸的基因序列构建到VP6载体上相应酶切位点,在大肠杆菌中表达嵌合蛋白,并进行相关免疫学性质的研究。结果重组嵌合蛋白rVP6/Hs可在大肠杆菌系统中高效表达,表达的蛋白占菌体总蛋白的36.2%,纯度90%以上;ELISA结果显示,嵌合蛋白可与抗-HBs抗体反应;Western blot实验表明,嵌合蛋白可分别与抗VP6豚鼠血清抗体和乙型肝炎患者血清抗体特异性结合。结果表明所表达的嵌合蛋白具有较好的抗原反应性。结论成功构建载体质粒pETP6v及携带HBV外源抗原表位的嵌合质粒pETP6/Hs,对研究病毒抗原表位具有重要的价值;所构建和表达的携带HBV S抗原表位的重组嵌合蛋白在研发RV/HBV重组嵌合蛋白疫苗方面具有重要潜在应用前景。; 袁静吴绪伟郑红梅曹向红潘小霞滕玉梅李琦涵陈元鼎; 关键词：乙型肝炎病毒

轮状病毒结构蛋白VP6的原核表达及其作为检测抗原在病毒检测中的应用被引量：2: 2012年; 目的原核表达轮状病毒(Rotavirus,RV)结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测。方法提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组表达质粒pET-VP6,转化E.coli BL21(DE3),表达rVP6。表达的rVP6经纯化后,与TB-Chen株(G2P[4]型)、Wa株(G1P[8]型)和SA11株(G3P[2]型)RV分别免疫豚鼠,制备血清抗体,以SA11株血清抗体,经Western blot鉴定纯化的rVP6,以纯化的rVP6为检测抗原,采用ELISA法检测不同型RV免疫血清抗体。结果重组表达质粒pET-VP6经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的rVP6相对分子质量约为45 000,表达量占菌体总蛋白的34.7%;纯化的rVP6纯度达90%以上,蛋白浓度为8.304μg/μl,可与豚鼠抗RV SA11株血清抗体发生特异性反应;以纯化的rVP6为检测抗原,可检测TB-Chen、Wa、SA11株和抗rVP6的豚鼠免疫血清抗体。结论成功地在大肠杆菌中表达了rVP6,以具有共同组/亚组抗原特异性的rVP6作为检测抗原,可检测同一组/亚组内不同型的RV血清抗体,为研制以VP6为检测抗原检测RV感染的ELISA试剂盒奠定了基础。; 袁静潘小霞滕玉梅姬秋彦文喻玲陈元鼎; 关键词：轮状病毒属酶联免疫吸附测定

BALB/c小鼠和雪貂感染H7N9禽流感病毒后的肺组织动态病理学变化被引量：7: 2014年; 目的了解用H7N9禽流感病毒分别感染BALB/c小鼠和雪貂后,其肺部动态病理改变,为临床诊断、治疗、预防及机制研究提供帮助.方法 BALB/c小鼠经鼻腔接种106EID50（50 μL）H7N9禽流感病毒后第1、2、3、5、7、14、28天分别安乐死2～3只小鼠;雪貂经鼻腔吸入接种106EID50（500 μL）H7N9禽流感病毒后第3、7、14、28天分别安乐死1只雪貂,分别观察动物的临床特征改变,肺组织的大体组织形态学变化,HE染色观察动态病理改变,免疫组化染色观察病毒分布及肺组织各种炎细胞的浸润情况.结果感染病毒后的小鼠出现竖毛、嗜睡、死亡等表现,雪貂表现为打喷嚏、鼻腔分泌物、稀便、嗜睡等;大体观察小鼠与雪貂肺组织均可见到暗红色病灶;光镜观察小鼠与雪貂的肺组织均呈现坏死性支气管炎和渗出性间质性肺炎、肺泡炎.感染第2天开始出现炎性病变,7～9 d炎症病变最严重,14 d后逐渐修复吸收,28 d基本完全吸收; T、B淋巴细胞,巨噬细胞不同程度的表达增多,以T细胞增多为主,尤其是CD8＋ T细胞两种动物均大量表达.结论 H7N9禽流感病毒感染可引起BALB/c小鼠和雪貂肺组织急性支气管炎和肺炎,感染后7～9 d肺部炎症的组织病理学变化最严重,CD8＋T细胞明显增多,14 d后病灶逐渐吸收.该研究可为临床诊断、治疗、预防该病及进行疾病机制研究提供帮助.; 邓巍李彦红朱华徐艳峰陈霆李枫棣鲍琳琳许黎黎黄澜吕琦袁静向志光高凯姚艳丰于品; 关键词：BALB C小鼠肺组织病理学变化

新型H7N9病毒在同居小鼠中的传播途径被引量：1: 2014年; 目的进一步了解新型H7N9流感病毒的致病性、传播能力以及通过何种途径进行传播。方法 H7N9病毒感染小鼠后与同居小鼠合笼,研究同居小鼠的临床变化指征、病毒复制情况、病毒在组织中的分布以及病理变化。以同居小鼠分泌物接种其他小鼠,观察同居小鼠通过何种途径传播病毒。结果 H7N9病毒可以在肺组织、肠组织和脑组织中复制,并可以在同居小鼠中传播。H7N9病毒感染小鼠其咽、眼分泌物以及粪便均具有感染性,其中尤以咽拭子的传播风险最高。结论 H7N9病毒可以不通过适应就感染小鼠,并引起小鼠间传播。被感染小鼠分泌物具有感染性。; 鲍琳琳朱华邓巍许黎黎陈霆吕琦李枫棣袁静徐艳峰黄澜李彦红刘江宁姚艳丰于品秦川; 关键词：小鼠黏膜

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袁静

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