许璐
- 作品数：3 被引量：10H指数：1
- 供职机构：新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新疆株HPV-16 L1在真核细胞中表达水平的初探被引量：1
- 2008年
- 以密码子优化的人乳头瘤病毒16型(HPV-16)主要衣壳蛋白基因L1作为对照研究新疆株HPV-16L1在真核细胞中的表达水平。将新疆株HPV-16L1与密码子优化的HPV-16L1分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1;重组质粒通过水动力转染技术注入小鼠体内或采用脂质体法转染293T细胞,RT-PCR检测HPV-16L1在小鼠肝脏及293T细胞中的转录;Western印迹检测HPV-16L1在293T细胞中表达的蛋白质。结果显示新疆株及密码子优化的HPV-16L1在小鼠肝脏及293T细胞中均发生转录,但新疆株L1的表达水平显著低于密码子优化L1的表达水平。
- 许璐刘立鸿李轶杰张富春马正海
- 关键词：人乳头状瘤病毒16型密码子优化
- 地高辛标记探针Southern印迹杂交技术要点及改进被引量：9
- 2008年
- Southern印迹杂交技术是检测特定DNA片段的常规方法之一,其操作程序繁琐,对基因组DNA的提取、纯化、酶切等均有较高要求,要获得理想杂交结果需要反复摸索。总结地高辛标记探针Southern印迹杂交的技术要点,并结合具体操作提出改良方案。
- 刘立鸿许璐汪凯张富春马正海
- 关键词：地高辛SOUTHERN杂交
- 密码子优化HPV16衣壳基因真核共表达载体的构建及细胞转染
- 2008年
- 目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2;通过水动力转染技术(hydrodynamics-based transfection)和脂质体细胞转染法(liposome-mediated transfection of cells),检测衣壳基因的体内、外转录情况;重组质粒转染后293T细胞后观察其形态变化,用Western blot方法检测293T细胞中L1衣壳蛋白的表达。结果:酶切和测序结果表明真核共表达载体pcD-NA3.1-L1-IRES-L2构建正确。重组质粒中的L1和L2基因在小鼠肝脏、293T细胞中均发生转录。重组质粒转染293T细胞后出现CPE(cytopathic effect)现象,表明衣壳基因在细胞中已表达。Western blot方法检测发现L1蛋白在293T细胞中表达。结论:成功地构建了pcDNA3.1-L1-IRES-L2共表达真核载体,为进一步研究HPV16感染机制奠定基础。
- 刘立鸿许璐李轶杰张富春马正海
- 关键词：密码子优化细胞转染
