迟莹
- 作品数：32 被引量：52H指数：4
- 供职机构：江苏省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- H7N9亚型禽流感病毒核蛋白NP原核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建甲型H7N9禽流感病毒NP基因的原核表达载体,并表达其编码重组蛋白。方法 RT-PCR法扩增H7N9病毒NP基因,克隆至原核表达载体PET28a(+)中,构建表达载体PET28a(+)-NP质粒;经PCR、双酶切、测序鉴定后,将PET28a(+)-NP质粒转化表达菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达NP重组蛋白。应用western blot法鉴定NP蛋白的表达。结果成功构建NP基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达出分子量为56kD的NP重组蛋白。结论实现了禽流感病毒H7N9NP重组蛋白在原核系统中的高效表达,为禽流感诊断试剂及单抗的研发工作奠定了基础。
- 张文帅张黎温恬迟莹黄超彭海燕焦永军史智扬
- 关键词：原核表达
- 江苏省新型冠状病毒NSP1变异分析及其与临床分型的关系
- 2023年
- 目的探讨江苏省新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSPl)变异情况及其与临床分型的关系。方法收集2020—2022年间江苏省SARS-CoV-2感染病例的样本及基本临床信息。对样本进行高通量测序,测序后的数据以Wuhan-Hu-1(GenBank:MN908947.3)为参考基因分析NSP1序列变异情况及其与临床分型的关系。使用DynaMut在线服务器分析突变氨基酸对蛋白质稳定性及分子柔韧性的影响。结果共收集病例样本1241例,NSP1基因同义突变61例,错义突变及缺失共487例,存在氨基酸变异的患者以无症状感染者(75.4%)为主,且病例临床分型严重程度更轻(Z=-24.8,P<0.01)。共发现NSP1蛋白出现11个非同义突变和1个缺失。N端中出现了8个稳定突变及1个失稳突变,2个突变增加了分子柔韧性;Linker区S135R的突变使蛋白质失稳但增加了柔韧性;C端R171C突变使蛋白质稳定但降低了柔韧性。NSP1蛋白稳定性降低的患者临床分型症状更轻。结论NSP1部分氨基酸的改变使蛋白结构发生变化,可能降低病毒的致病力,导致较轻的临床症状。
- 吴涛朱小娟乔乔迟莹赵康辰朱立国吴斌葛以跃崔仑标
- 关键词：稳定性临床分型
- 禽流感病毒H5N1亚型NS1蛋白的真核表达及其在细胞中的分布
- 2011年
- 为构建禽流感病毒(AIV)H5N1亚型非结构蛋白NS1的真核表达载体,并鉴定其在哺乳动物细胞中的表达与分布,本研究采用RT-PCR技术,从甲型流感病毒的总RNA中扩增NS1全长基因,并将其克隆于pXJ40中,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1。将该重组质粒转染293T细胞,通过western blot方法鉴定表达的NS1蛋白;并以免疫荧光技术观察NS1在H1299细胞中的分布与定位。Western blot结果显示NS1基因编码蛋白获得表达,免疫荧光检测显示NS1蛋白主要存在于细胞核中。本研究为NS1蛋白功能和H5N1亚型AIV致病机制的研究奠定了基础。
- 卞倩张文帅迟莹李燕焦永军
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒NS1真核表达
- 甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体的构建与表达被引量：2
- 2011年
- 目的:构建甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏首例甲型H1N1流感病毒毒株(A/Nan jing/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-NS1质粒,双酶切pMD18-T-NS1与PXJ40-HA后,构建真核表达载体PXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。West-ern blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功克隆NS1全长基因,并构建了其真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究提供了材料。
- 张文帅卞倩温恬迟莹李燕焦永军
- 关键词：甲型H1N1流感病毒NS1真核表达免疫印迹
- 天然人源性单链抗体文库的构建及鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的构建天然人源性单链抗体(scFv)文库,并对文库质量进行鉴定。方法采集220份未经主动免疫健康人外周血,分离单个核细胞后提取总RNA,逆转录成cDNA,混匀,以此为模板PCR扩增人抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL,包括Vκ和Vλ),再经过overlap-PCR法,将VH基因和VL基因随机拼接成人scFv基因文库后,插入噬菌体载体pComb3XSS中,电转化大肠杆菌XL1-Blue制备scFv文库。通过菌落数量计算库容,并随机挑选100个单菌落验证scFv基因阳性克隆率,基因测序分析scFv文库基因的多样性。结果经过1次电转化得到容量为1.8×108的scFv文库,scFv基因阳性克隆率为96%,其中78%为正确插入,其scFv基因序列均不相同。结论成功构建了一种大容量、多样性高的天然人源性scFv文库,为进一步筛选特异性中和抗体提供了基础材料。
- 张文帅迟莹焦永军
- 关键词：噬菌体人源PCR库容量多样性
- H5N1亚型禽流感病毒聚合酶酸性蛋白真核表达载体的构建与表达被引量：4
- 2014年
- 目的构建甲型禽流感病毒H5N1亚型聚合酶酸性蛋白(PA)的真核表达载体,并表达其编码蛋白PA。方法采用RT-PCR法扩增PA基因,克隆至pMD18-T载体中构pMD18-T-PA质粒。双酶切pMD18-T-PA质粒与pXJ40-HA质粒后,胶回收并连接目的片段,构建真核表达载体pXJ40-HA-PA,鉴定后转染293T细胞。采用免疫印迹法(Western blot)鉴定重组PA蛋白的表达。结果成功构建了禽流感病毒H5N1亚型PA基因的真核表达载体,并在真核细胞中成功表达出分子量为75kD的重组蛋白。结论成功构建禽流感病毒H5N1亚型PA基因的真核表达载体,为后期进一步研究PA蛋白的功能奠定了基础。
- 单云峰李燕迟莹卞倩
- 关键词：H5N1禽流感病毒真核表达克隆
- IL-17在日本血吸虫感染中对抗体及Th应答影响的研究
- 已有大量文献报道血吸虫感染后可引起宿主体内高度的CD4T细胞反应,通过大量诱导产生Th1、Th2细胞显著增加体内相应的细胞因子分别介导细胞免疫和体液免疫。近两年来,研究发现血吸虫感染后还能特异地诱导Th17细胞通过分泌I...
- 温小云迟莹贺蕾周莎朱继峰张萃刘丰苏川
- 文献传递
- H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2013年
- 目的:构建甲型H7N9亚型禽流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并转染293T细胞以表达其编码的蛋白。方法:从南京分离株H7N9流感病毒[A/Nanjing/1/2013(H7N9)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T载体中构建pMD18-T-NS1质粒,以pMD18-T-NS1质粒为模板扩增NS1基因。双酶切NS1基因PCR产物与PXJ40-MYC后,连接构建真核表达载体PXJ40-MYC-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。Western blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功构建了H7N9非结构蛋白NS1真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究奠定基础。
- 温恬迟莹张黎张文帅彭海燕史智扬
- 关键词：NS1真核表达免疫印迹
- 甲型H1N1流感病毒血凝素HA1蛋白的真核表达与纯化
- 2011年
- 目的构建甲型SWH1N1流感病毒血凝素HA1蛋白的杆状病毒真核表达载体,转染sf9细胞表达并纯化其编码蛋白。方法从江苏甲型H1N1流感病毒毒株[A/Jiangsu/1/2009(H1N1)]提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增HA1基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T/HA1质粒,双酶切pMD18-T/HA1与p-fast后,连接构建真核表达载体p-fast-HA1,转化DH10Bac细胞,转座构建杆状病毒HA1-Bacmid,经酶切及测序鉴定后将HA1-Bacmid转染到sf9细胞中,通过免疫印迹法鉴定HA1蛋白的表达,采用亲和层析法纯化HA1蛋白。结果经双酶切、测序鉴定证实HA1基因的真核表达载体构建成功;免疫印迹法证实HA1基因的表达;纯化获得了高纯度的HA1蛋白。结论成功克隆了HA1基因,并构建了其杆状病毒真核表达载体,该表达载体的构建为后期的流感快速检测以及基因工程疫苗制备奠定了良好的基础。
- 李燕迟莹卞倩温恬张文帅焦永军
- 关键词：HA1基因克隆蛋白纯化
- 不同肠道病毒诱导SH-SY5Y细胞焦亡研究
- 2019年
- 目的探讨不同肠道病毒诱导人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y焦亡的现象及其之间的差异。方法选取9株肠道病毒包括肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-A71)、柯萨奇病毒A组(Coxsackievirus A,CA)、柯萨奇病毒B组(Coxsackievirus B,CB)和埃可病毒(Echovirus,Echo),分别感染SH-SY5Y细胞48 h后,观察不同感染组和对照组的细胞形态,并利用流式细胞仪检测Caspase-1活性。结果EV-A71感染组细胞的Caspase-1活性高于正常对照组(P<0.001),且分离自重症病例的EV-A71诱导细胞的Caspase-1活性显著高于分离自普通病例的EV-A71(P<0.001);CA感染诱导细胞Caspase-1活性能力较低;CB和Echo感染诱导细胞Caspase-1活性均显著高于对照组细胞与EV-A71感染组(P<0.001);感染组在镜下的细胞病变程度与Caspase-1活性检测结果相关。结论EV-A71、CB、Echo均可诱导SH-SY5Y细胞发生Caspase-1介导的焦亡,而CA诱导细胞焦亡能力较低,为进一步研究肠道病毒引起的神经细胞病变机制奠定了基础。
- 乔乔吴涛朱小娟迟莹葛以跃樊欢戚宇华郭喜玲崔仑标
- 关键词：肠道病毒CASPASE-1
