郑杰辉
- 作品数：6 被引量：6H指数：1
- 供职机构：福建医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学系更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠ADAM10条件性基因打靶载体的构建与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建小鼠ADAM10条件性基因打靶载体,为建立ADAM10条件性敲除小鼠模型奠定基础。方法以正常小鼠(129/Svj)基因组DNA为模板,采用长片段PCR方法,扩增小鼠ADAM10基因第2外显子及其侧翼序列。通过引入LoxP位点和TK基因等步骤,获得ADAM10条件性基因打靶载体。结果经限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的小鼠ADAM10基因条件性打靶载体符合设计要求。结沦成功构建了小鼠ADAM10条件性基因打靶载体,为建立ADAM10条件性基因敲除小鼠打下了基础。
- 林炤华杨丽华郑杰辉周常文
- 关键词：ADAM10同源重组
- 成年大脑神经细胞特异性ADAM10基因敲除小鼠模型的建立与鉴定
- 去整合素和金属蛋白酶10(ADAM10)是一种能够水解30余种跨膜蛋白质的"脱落酶"(sheddase),参与诸多生理过程和致病机制,如胚胎发育、细胞粘附、信号转导、免疫反应、癌症和阿尔茨海默病.迄今...
- 周常文刘军韦秋兰庄建龙林炤华郑杰辉
- 关键词：ADAM10转基因小鼠
- 实时荧光定量PCR检测转基因小鼠外源基因拷贝数方法的建立和应用被引量：4
- 2011年
- 目的建立实时荧光定量PCR方法检测CaMKⅡα-Cre转基因小鼠外源基因拷贝数的方法。方法以CaMKⅡα-Cre转基因首建鼠及其仔代阳性鼠为研究对象,利用绝对定量的实时荧光定量PCR法检测转基因小鼠的拷贝数,并筛选出纯合子小鼠再经遗传育种方法以确定为纯合子小鼠。结果绝对定量标准曲线公式为:△Ct=-2.402log5N(拷贝数)+8.654,相关系数为0.9999,扩增效率为95.4%。三只CaMKⅡα-Cre首建鼠的拷贝数分别为19、7、5;三个转基因小鼠品系均成功获得纯合子小鼠。结论成功建立了检测转基因小鼠外源基因拷贝数的实时荧光定量PCR方法,该方法可用于检测各种转基因小鼠中外源基因的拷贝数。
- 郑杰辉林炤华徐瑛刘军周常文
- 关键词：转基因小鼠拷贝数实时荧光定量PCRCT值
- CaMKⅡα-Cre转基因小鼠模型的建立
- 制备神经细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠,对于利用条件性基因敲除技术研究神经系统的基因功能至关重要。本研究采用分子生物学技术构建了前脑神经细胞特异性的CaMKⅡα-Cre基因表达载体(PCCEⅠ),经原核显微注射方...
- 周常文郑杰辉林炤华刘军韦秋兰庄建龙江一平
- 关键词：CRE重组酶转基因小鼠
- 文献传递
- 成年大脑神经细胞特异性ADAM10基因敲除小鼠模型的建立与鉴定被引量：1
- 2012年
- 去整合素和金属蛋白酶10(ADAM10)是一种能够水解30余种跨膜蛋白质的"脱落酶"(sheddase),参与诸多生理过程和致病机制,如胚胎发育、细胞粘附、信号转导、免疫反应、癌症和阿尔茨海默病。迄今,已报道的ADAMIO完全基因敲除小鼠和大脑神经前体细胞特异性ADAM10基因敲除小鼠分别于胚胎期或围产期死亡,致使无法研究成年小鼠大脑神经细胞ADAM10基因的功能。文章利用本研究小组建立的CaMKlla-Cre转基因小鼠与ADAM10loxP/loxP转基因小鼠杂交,获得了CaMKIIα-Cre/ADAM10loxP/loxP小鼠,并对其进行鉴定。利用PCR方法检测成年ADAM10cKO小鼠大脑基因组DNA表明,ADAM10基因缺失主要发生在前脑皮层和海马中。荧光定量PCR检测结果显示,ADAM10 mRNA的表达水平在前脑皮层和海马中分别降低55.7%和60.8%;使用Western blotting方法研究发现,ADAM10成熟蛋白质的含量在前脑皮层和海马中分别减少63%和84.8%。采用免疫组织化学方法检测表明,成年ADAM10cKO小鼠与野生型小鼠相比,其大脑皮层和海马神经细胞的ADAM10免疫染色明显减弱,而其它细胞如胶质细胞的免疫染色基本一致。总之,文章成功制备了首个存活至成年的大脑神经细胞特异性ADAM10基因敲除(cKO)小鼠,克服了小鼠因ADAM10缺失在胚胎期或围产期死亡的弊端,为研究成年小鼠大脑神经细胞ADAMIO基因的功能奠定了坚实的基础。
- 刘军周常文韦秋兰庄建龙林炤华郑杰辉
- 关键词：ADAM10转基因小鼠WESTERNBLOTTING
- CaMK Ⅱα-Cre转基因小鼠模型的建立
- Cre/LoxP系统介导的条件性基因敲除技术(conditional gene knockout)是目前基因功能研究中最重要的技术之一,它克服了传统基因敲除技术存在的诸多弊端。在神经系统研究方面,该技术的运用可使基因敲除...
- 郑杰辉
- 关键词：转基因动物模型阿尔茨海默病发病机制
- 文献传递
