丛喆 作品数:128 被引量:263 H指数:9 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 中国国际公共关系协会项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 环境科学与工程 更多>>
SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立 被引量:31 2006年 目的建立SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。方法巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNAgag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEMT载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒。该质粒经限制性内切酶NotⅠ酶切后,进行体外转录,转录出的RNA产物(RS)纯化后10倍系列稀释,作出标准曲线,作为SIV病毒RNA荧光定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100 copies/μL。结论制备的RS外标准品纯度高,SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。 丛喆 李兆忠 魏强 许琰 蒋虹 佟巍 卢圣栋 涂新明关键词:SIV 实时荧光定量RT-PCR SYBR 重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV病毒的作用效果试验 [目的]评价重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂对预防治疗SARS—CoV病毒感染恒河猴的作用。[方法]10 只恒河猴随机分为2组,每组5只。分别为试验组(重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂)和对照组(空白干扰素)。分别在攻毒前19h... 高虹 魏强 涂新明 朱华 张扬清 鲍琳琳 邓巍 张兵林 孔琪 黄阑 蒋虹 丛喆 佟巍 刘亚莉 段招军 候云德 秦川关键词:实验动物 SARS 重组人干扰素Α2B 文献传递 RT-PCR方法在实验小鼠肝炎病毒检测中的应用 被引量:2 2004年 实验应用RT-PCR方法对来自不同单位、6个品系、不同等级的84只小鼠进行了MHV检测。结果显示:MHV阳性小鼠35只,阳性率为41.67%;其中普通级小鼠29只,阳性18只,阳性率为62.07%;SPF级小鼠55只,MHV阳性小鼠17只,阳性率为30.91%。 赖国旗 何明忠 谭毅 王胜 潘永全 韦克 何伏秋 蒋虹 佟巍 丛喆关键词:RT-PCR 小鼠肝炎病毒 健康中国恒河猴各淋巴组织中T淋巴细胞表型及分布 被引量:4 2012年 试验旨在明确T淋巴细胞在中国恒河猴各组织中的表型与分布,为疾病模型研究提供基础数据。取外周血、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结及肠道组织,从中分离出淋巴细胞。使用流式细胞术检测分析各种表型的淋巴细胞在组织间的分布。结果表明,淋巴结中CD4+/CD8+T细胞比值高于外周血,肠道固有层中最低,三者差异显著。记忆性T细胞在外周血和肠道固有层T细胞中比重较大,而淋巴结中主要为幼稚T细胞。CD4+T细胞中中心记忆T细胞Tcm为主要亚群,而CD8+T细胞主要为效应记忆细胞Tem。外周血与肠道固有层中增殖T细胞比例相当,而淋巴结中T细胞增殖水平相对较低。各组织中CXCR4受体表达量普遍高于CCR5受体,其中肠道固有层CCR5受体表达水平最高。值得注意的是,有一小群表型CD3+CD4+CD8low的细胞仅在肠道固有层中存在,经分析其功能活性应高于肠道CD4单阳性T细胞。因此,测定了健康中国恒河猴各表型T淋巴细胞在多种淋巴组织中的基础数值,为相关模型研究奠定基础。 熊竞 刘克剑 吴芳新 丛喆 王卫 陈霆 魏强关键词:中国恒河猴 记忆T细胞 KI67 CCR5 SHIV-XJ02170病毒感染中国恒河猴的实验研究 SHIV病毒艾滋病动物模型是目前国外艾滋病模型研究的趋势,被认为是比现阶段普遍应用的SIV模型针对性更强、更有意义的动物模型。为了尽早开展国内此项研究,尤其是选定毒力较强的SHIV毒株,成功建立SHIV感染动物模型,在前... 丛喆关键词:恒河猴 病毒载量 实时荧光定量 病毒感染 艾滋病 文献传递 非人灵长类动物胃镜检测技术的建立 目的建立非人灵长类动物胃镜检测技术。方法复方氯胺酮麻醉动物,将内镜经口腔、咽依次进入食管、胃、十二指肠,观察黏膜状况后在胃、十二指肠分别取材,术后清洗消毒内镜,动物即时苏醒。结果内镜顺利进入食管、胃及十二指肠,进镜深度分... 代小伟 朱华 刘颖 丛喆 蒋虹 秦川关键词:非人灵长类动物 文献传递 猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)恒河猴适应株耐9-(2-磷酸甲氧丙基)腺嘌呤(PMPA)突变位点筛查 2013年 目的初步明确猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)耐9-(2-磷酸甲氧丙基)腺嘌呤(PMPA)突变基因位点,指导SIV/恒河猴模型在药物评价中的应用。方法 SIVmac239恒河猴适应株感染恒河猴,之后进行PMPA治疗,测定不同时间点血浆病毒载量和外周血CD4+T细胞数;使用CEMx174细胞进行药物敏感实验。单拷贝PCR测定病毒rt基因变异情况。结果 PMPA治疗不能有效降低感染猴血浆病毒载量,且对血CD4+T细胞数没有显著影响;细胞水平药物敏感实验证实该病毒株对PMPA不敏感。序列比对发现S205L和M502I可能影响到病毒对PMPA的药物敏感性。结论本研究为SIV/恒河猴模型的合理使用及HIV-1的临床治疗提供了信息。 王卫 鞠斌 丛喆 董志会 陈霆 杜文达 蒋虹 魏强关键词:SIVMAC239 空斑实验法和免疫荧光法测定HSV-1及猴B病毒相关抗体比较研究 目的以人单纯疱疹病毒(HSV-1)做为抗原,利用空斑法和IFA法比较猴BV和人HSV-1阳性血清两种不同血清的中和能力的差异,建立一种实用、准确、可靠的病毒毒力的检测方法。方法首先,将HSV-1病毒悬液作连续的10倍稀释... 乔红伟 佟巍 丛喆 王卫 蒋虹 涂新明 魏强关键词:免疫荧光 文献传递 猴D型反转录病毒巢式PCR检测方法的建立 被引量:2 2006年 目的建立SRV-1巢式PCR检测方法并进行初步应用。方法针对SRV-1env基因的保守区序列,设计特异性引物,以感染SRV-1 Raji细胞提取出的含有前病毒DNA的基因组DNA为模板,进行巢式PCR反应。扩增产物测序后与GenBank报道的序列进行同源比对。将DNA样本进行10倍梯度稀释,以检测巢式PCR反应的灵敏度。使用该方法对正常Raji细胞以及感染SIV、STLV的外周血淋巴细胞DNA样本进行扩增,检测该方法的特异性。用建立的巢式PCR方法检测40份储存猴血标本。结果使用巢式PCR扩增出的特异片段经测序分析,结果证实与GenBank报道的序列一致。所建立的巢式PCR检测法检测限度可达1.5×10-3ng/μL,而且方法特异。用此方法检测40份猴血标本,未检测到阳性标本。结论初步建立SRV-1的巢式PCR检测方法,该方法灵敏、特异,为SRV-1的检测提供了一个快速、有效的手段。 孙敏 涂新明 丛喆 蒋虹 佟巍 于浩 魏强关键词:聚合酶链反应 实时荧光定量PCR的研究进展及应用 被引量:24 2007年 实时定量PCR(real-time PCR)的应用范围非常广泛,包括mRNA表达的研究、DNA拷贝数的检测、单核苷酸多态性(SNPs)的测定等。由于传统的PCR技术不能准确定量,使其在实际应用方面受到很大限制,因此,对PCR产物进行准确定量,尤其是病毒性病原的动态监控,成为迫切需要。 许琰 丛喆 魏强关键词:聚合酶链反应 核酸扩增技术 病毒