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耐辐射奇球菌PprM蛋白靶DNA的筛选与鉴定: 背景与目的：耐辐射奇球菌（Deinococcus radiodurans, DR）是地球上已知的耐受电离辐射最强的生物之一，能够高度耐受电离辐射、紫外线、H2O2、干燥以及其他DNA理化损伤剂的损伤。pprM基因是 DR...; 付亮; 关键词：耐辐射奇球菌免疫沉淀

耐辐射奇球菌pprM基因回补株的构建与鉴定被引量：1: 2016年; 目的构建耐辐射奇球菌prM基因缺失回补菌株,为进一步研究PprM蛋白的功能奠定实验基础.方法设计并合成HA-pprM基因（HA为流感病毒血凝素）全长的引物,以无突变的pGEX-6p-1-pprM载体为模板,PCR扩增出携带NdeⅠ酶切位点的HA-pprM基因全长,经NdeⅠ酶切后,与pRADK载体连接并转化大肠杆菌,经培养、提取质粒及纯化后,采用酶切鉴定以及基因测序方法确认插入序列的正确性;采用CaC12法将构建好的重组质粒pRADK-HA-pprM转化到耐辐射奇球菌pprM基因缺失的菌株中,通过Western blot验证HA-PprM融合蛋白的表达.结果构建的重组质粒pRADK-HA-pprM经NdeⅠ酶切鉴定结果符合目的条带大小（438 bp）,测序结果显示插入的寡核苷酸序列及方向与预期的一致,Western blot结果显示HA-PprM融合蛋白的相对分子质量约为13 000.结论笔者成功构建了重组质粒pRADK-HA-pprM,为进一步研究与PprM蛋白相互作用的靶DNA的筛选奠定了良好的基础.; 付亮何淑雅潘宝平曾洋肖方竹田帅卢先州黄波马云

FXR1真核表达载体的构建与表达及其对神经节苷脂浓度的影响被引量：1: 2014年; 目的:构建脆性X相关基因1(FXR1)的真核表达载体并检测其对神经节苷脂(GM1)浓度的影响。方法:以pYESTrp3-FXR1为模板,利用PCR扩增FXR1基因,PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切后插入真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得的阳性克隆进一步酶切及测序鉴定;将构建成功的pcDNA3.1(-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,采用Western blot检测FXR1的表达情况,同时采用ELISA试剂盒检测细胞内GM1的浓度。结果:PCR扩增产物为1.9 Kb的片段,与FXR1基因大小相符,阳性克隆经双酶切后获得两条分别为5.4 Kb和1.9 Kb的片段,测序结果与GeneBank中序列相同。构建成功的重组质粒pcDNA3.1(-)-FXR1转染SH-SY5Y细胞后,细胞中FXR1的表达增加,同时有效提高了细胞内GM1的浓度(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-FXR1,FXR1的表达增加可以提高SH-SY5Y细胞中的GM1浓度,这些为后续深入研究FXR1基因在神经组织发育中的调控功能及其在脆性X综合征(FXS)中的作用机制奠定了基础。; 马云王昌博李斌元秦凌雪付亮董晓何淑雅; 关键词：真核表达神经节苷脂

耐辐射奇球菌中PprM蛋白与pprI基因相互作用的研究: [目的]耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans,DR)中总开关因子PprI通过其金属蛋白酶活性对负调控因子DdrO进行切割作用,从而激活其下游多个参与辐射抗性基因(pprA、ddrD、gyrA等)的...; 潘宝平肖方竹付亮马云王五洲贺特何淑雅; 关键词：耐辐射奇球菌 PPRI

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付亮