刘双全
- 作品数：98 被引量：297H指数：10
- 供职机构：南华大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省教育厅重点项目湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学交通运输工程更多>>
- 梅毒苍白密螺旋体多表位抗原基因的构建、表达及免疫反应性的鉴定被引量：12
- 2008年
- 目的为梅毒检测试剂提供特异性强、灵敏度高的新型多表位重组抗原。方法PCR扩增Tp17和Tp0453基因的优势抗原表位,连接后插入pQE32质粒中构建多表位嵌合重组体pQE32/Tp0453-17,IPTG诱导表达,免疫印迹法检测表达产物的免疫反应性。结果成功构建了多表位嵌合重组质粒pQE32/Tp0453-17,经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Tp0453和Tp17基因,片段长约1180 bp,其测序结果与GenBank上登录序列完全一致;SDS-PAGE分析表达产物发现,融合基因表达的重组蛋白Mr约为52×103,表达产物占全菌总蛋白的19.3%,并且在细胞内主要以包涵体形式存在;用Western印迹法检测显示,该重组蛋白能与梅毒患者的阳性血清反应,具有良好的抗原性。结论成功表达了具有良好免疫反应性的多表位嵌合重组抗原,为新型梅毒快速诊断试剂盒的研究奠定了良好的实验基础。
- 张秋桂刘双全颜向军
- 关键词：苍白密螺旋体多表位重组蛋白
- 乙肝表面抗原弱反应性标本确认试验的初步应用
- 2010年
- 目的利用珠海丽珠试剂公司研发的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）确认试剂盒（中和试验法）对乙肝表面抗原弱反应性标本进行确认试验，以评价其应用价值。方法血清样本来源于本院门诊患者，经上海荣盛生物药业有限公司生产的HBsAg酶免试剂盒测定，取结果A值0．070～0．500的样本46份用于本试验。此46例样本确认试验参照丽珠试剂公司试制的HBsAg中和试剂盒说明书进行，并与用杭州艾康生物公司生产的金标试剂的检测结果比对。结果用荣盛生产的HBsAg ELISA检测，结果显示8例呈灰区阴性，26例呈灰区阳性，12例呈弱阳性。经艾康金标试剂比对检测，26例为阳性，20例为阴性。中和试验结果为阳性30例，阴性16例。在金标比对检测的20例阴性样本中，4例中和试验确认结果为阳性。结论丽珠试剂公司的HBsAg中和确认试剂盒具有良好的特异性和敏感性，能大大提高对国产HBsAg ELISA试剂测定结果为弱反应性样本或金标试剂测定阴性样本的检测结果的准确性，适用于临床推广使用，
- 匡艳华刘双全许金华陈健
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原
- 梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达被引量：3
- 2007年
- 随着基因工程技术的迅速发展和梅毒螺旋体（TP）全基因序列的解析，通过重组技术已制备多种重组Tp抗原，并被广泛应用于梅毒血清学检测的研究和试剂盒的开发，但对于哪一种Tp蛋白抗原亿临床各期梅毒的血清学诊断中具有更高的特异性和敏感性尚无一致观点。我们应用软件筛选分析，选取抗原性较啦的Tp外膜蛋白Gpd进行克隆表达。并以重组蛋白为包被抗原，建立间接ELISA法，评价其在悔毒血清学诊断中的应用价值。
- 严加林吴移谋赵飞骏刘双全
- 关键词：梅毒螺旋体间接ELISA法梅毒血清学检测血清学诊断全基因序列
- 糖尿病合并梅毒兔模型的建立及其肾损伤的研究
- 2015年
- 目的构建糖尿病合并梅毒兔感染模型，动态观察肾脏损伤情况及初步探讨其机制。方法采用四氧嘧啶诱导法构建单独糖尿病组（DM组），采用四氧嘧啶诱导糖尿病再接种梅毒螺旋体致其感染构建合并梅毒组（H组），另设单独梅毒组（T组）和正常对照组（C组），动态观察各组兔肾脏损伤改变情况并初步研究炎症相关硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin-interacting protein，TXNIP）的表达情况。结果成功构建了各组兔感染模型，自第8周起，与T组和DM组相比，H组兔随实验时间增长尿素氮及肌酐明显升高；与C组比较，各实验组肾脏组织有明显损伤，且H组损伤程度明显比单独疾病组T组和DM组严重；免疫组化结果显示，各实验组肾脏TXNIP表达均增加，但合并感染H组TXNIP表达量明显高于单独感染组T组和DM组。结论糖尿病合并梅毒兔模型能引起比单独疾病组更严重的肾脏损伤，其损伤机制可能与TXNIP的高表达有关。
- 刘双全刘炀朱雅玲曾丹易婷罗韬谢小平吴移谋
- 关键词：糖尿病梅毒兔模型肾损伤
- 梅毒螺旋体Tp0751黏附蛋白的表达、纯化及免疫活性研究
- 目的表达梅毒螺旋体黏附蛋白Tp0751,纯化表达产物并进行免疫活性分析,为探索Tp0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定基础。方法通过生物信息学分析,去除Tp0751信号肽序列,构建
- 刘双全赵飞骏张秋桂吴移谋
- 文献传递
- 梅毒螺旋体TP0993重组蛋白的表达、纯化及免疫活性分析被引量：4
- 2013年
- 目的探讨梅毒螺旋体重组蛋白TP0993在梅毒血清学诊断中的应用价值。方法通过生物信息学分析，获取TP0993基因序列，构建原核载体进行诱导表达；Ni—NTA亲合层析柱纯化重组蛋白，Western印迹检测其免疫抗原性，用重组蛋白直接注射免疫新西兰家兔，评价其免疫原性。用纯化的TP0993重组蛋白包被微孔板，建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，检测临床梅毒患者血清和健康体检者正常血清，同时与梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）进行比较，根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况，评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值。结果成功构建PET-28a（＋）-0993原核表达载体，经表达、纯化后获得相对分子质量约为34000的重组蛋白；Western印迹检测显示该重组蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应；利用纯化的TP0993重组蛋白免疫新西兰兔，能诱导新西兰兔产生特异性免疫应答。以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法，对TPPA法检测的480份临床血清进行检测，与TPPA法比较ELISA法的灵敏度为88．3％，特异度为85．8％，ELISA法与TPPA法符合率为86．5％。结论重组表达的TP0993蛋白具有较好的免疫活性，可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一。
- 谢小平刘双全张秋桂吴移谋
- 关键词：密螺旋体苍白重组蛋白质类免疫活性
- 梅毒螺旋体膜蛋白研究进展被引量：1
- 2013年
- 梅毒螺旋体苍白亚种(Tp)引起的梅毒是一种严重危害人类健康的慢性性传播性疾病,其发病具有多阶段、进行性的特点。由于Tp尚不能体外培养,抗原获取困难,其致病机制研究尚不清楚。随着Tp全基因序列的解析,重组Tp膜蛋白的成功表达及蛋白功能结构日益明确,为Tp发病机制的研究及疫苗的研制奠定了良好的基础。对于Tp主要外膜蛋白的结构、功能研究进展进行了综述。
- 刘琼刘双全张秋桂
- 关键词：梅毒螺旋体膜蛋白致病机制疫苗
- 梅毒螺旋体重组蛋白Tp0663前炎症活性的研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨梅毒螺旋体(Tp)重组Tp0663蛋白(rTp0663)潜在的前炎症活性并初步探讨可能参与激活的信号分子,为阐明Tp的致病机制提供依据。方法体外以不同剂量rTp0663以不同时间刺激THP-1细胞源性人巨噬细胞,ELISA分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β和IL-6的水平;以rTp0663刺激经抗TLR2、抗CD14、抗TLR2与抗CD14联合、NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理后的巨噬细胞,检测其释放IL-1β和IL-6的水平。结果 rTp0663在一定范围内内以剂量和时间依赖方式显著诱导巨噬细胞产生IL-1β和IL-6,在3μg/mL刺激剂量和刺激24 h时达到高峰;Tp0663刺激经抗TLR2、抗CD14、抗TLR2与抗CD14联合、PDTC预处理后的巨噬细胞释放IL-1β水平分别下降至63.0%、69.0%、51.3%和15.8%,IL-6分别降至66.0%、71.0%、54.3%和18.7%。结论 rTp0663可通过TLR2和CD14激活NF-κB诱导THP-1源性人巨噬细胞产生前炎症细胞因子,Tp0663可能是Tp的一个重要的致病因子。
- 刘小军张跃军吴移谋赵飞骏刘双全姚玲曾铁兵
- 关键词：梅毒螺旋体前炎症细胞因子核因子KAPPA
- 梅毒螺旋体Tp0751黏附蛋白的表达、纯化及免疫活性研究
- 刘双全赵飞骏张秋桂吴移谋
- 梅毒螺旋体Tp0821基因的克隆、表达、纯化及免疫活性研究被引量：5
- 2010年
- 目的 构建梅毒螺旋体（Tp）膜脂蛋白Tp0821的重组质粒,表达、纯化其相应蛋白,研究其免疫活性.方法 构建重组质粒pQE32/Tp082l,诱导表达其相应蛋白,以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体并测定其效价.建立间接ELISA法,检测80份梅毒参比血清、临床经FTA-ABS确诊的阳性血清各150份.结果 成功构建重组质粒pQE32/Tp0821,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析重组蛋白分子量与预期结果相符.将亲和层析后所获高纯度重组蛋白免疫新西兰兔,制备的多克隆抗体效价达1：6400.间接ELISA法检测梅毒参比血清、临床梅毒患者血清,与间接免疫荧光螺旋体抗体吸附试验（FTA-ABS）法比较,其灵敏度、特异度分别为92.6%和98.6%,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 Tp0821重组蛋白具有较好的免疫活性,可用于梅毒血清学检测.
- 伍宁肖勇健顾伟鸣刘双全赵飞骏张跃军吴移谋
- 关键词：重组蛋白质类免疫活性梅毒
