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刘杰: 作品数：34 被引量：76H指数：4; 供职机构：四川大学计算机学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术理学电子电信更多>>

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乙脑/登革4型嵌合病毒的构建及其小鼠神经毒力测定: 2019年; 目的构建以乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)疫苗株SA14-14-2为基因骨架的乙脑/登革4型嵌合病毒,并分析该嵌合病毒对小鼠的神经毒力。方法通过重叠PCR方法扩增含有登革病毒4型(DENV-4)H241株pr ME基因序列和乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的NS1蛋白前177个核苷酸的融合片段,用Nar I和Bgl II双酶切后替换乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2全长克隆中的相应区域,构建成乙脑/登革4型嵌合全长克隆,通过体外转录和转染BHK21细胞获得嵌合病毒(JEV/DENV-4 chimeric virus,JD4)。通过测定嵌合病毒JD4和2个母本株JEV SA14-14-2株及DENV-4 H241株蚀斑大小、小鼠脑内神经毒力和皮下感染入脑能力、乳鼠脑内神经毒力,比较JD4和母本株之间的差异。通过将JD4在原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞传代30次,分析传代后嵌合病毒的神经毒力是否减弱及减弱的程度。结果测序结果表明,构建的嵌合病毒JD4基因组序列和预期一致,没有产生新的位点突变。JD4蚀斑较SA14-14-2明显偏小,但和DENV-4 H241株没有明显区别。JD4对3周龄小鼠具有较强的脑内神经毒力,和母本株DENV-4 H241没有差异,对小鼠没有神经侵袭力。乳鼠实验结果表明,嵌合病毒JD4脑内神经毒力虽然略低于母本株DENV-4 H241,但两者之间没有明显差异,都明显强于乙脑疫苗株SA14-14-2。在PHK细胞传代30次后,小鼠神经毒力虽然有所减低,但并不明显。结论成功构建了嵌合病毒JD4,通过测定并比较JD4与母本株的蚀斑特征、小鼠及乳鼠神经毒力等试验,为分析登革疫苗候选株安全性研究奠定了基础。; 孙艳汪伟刘莉娜范凤鸣杨会强刘杰曾献武; 关键词：神经毒力

基于B/S架构的安全密码解决方案研究: 2010年; 目前基于B/S架构和C/S架构的主流应用是采用由字母、数字、特殊字符组合而成的字符串作为登录或认证密码,但这类字符串密码存在信息含量少、易被监听、遭受重放攻击、难以记忆等缺点,针对这些缺点我们提出了以任意文件作为密码同时利用移动存储设备进行认证绑定的密码安全解决方案。; 张瑞松郗家贞黄劲常丽忠刘杰何芳; 关键词：B/S架构密码

乙型脑炎病毒E264位点回复突变对疫苗安全性的影响被引量：1: 2018年; 目的通过反向遗传学技术,构建乙型脑炎病毒减毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白(envelope protein,E蛋白)第264位氨基酸的回复突变株,并分析该位点突变对疫苗株小鼠毒力的影响。方法通过融合PCR扩增含基因组第1 769核苷酸位点回复突变的基因片段(T→G),替换SA14-14-2相应区域,使得编码E264位点的氨基酸位点由SA14-14-2的组氨酸(H)回复突变成强毒株SA14的谷氨酰胺(Q),将该回复突变株命名为r JEV264(H→Q),通过测定蚀斑大小和一步生长曲线,分析r JEV264的增殖特征;通过测定该突变株的昆明种小鼠脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力,分析E264位点回复突变后对小鼠毒力的影响。结果成功构建了回复突变株r JEV264,该突变株蚀斑大小与SA14-14-2相似,在PHK细胞上的增殖特征与SA14-14-2没有明显差异。r JEV264对小鼠有可检测的脑内神经毒力,毒力为5.51 lg PFU/LD50,但无论是皮下注射还是腹腔注射,都没有使小鼠发病。结论在分子水平证明了E264位点是影响乙脑减毒活疫苗安全性的关键位点之一,E264位点的回复突变增强了SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力,但没有增强小鼠神经侵袭力。; 刘莉娜孙艳范凤鸣杨欢牟建超陈智刘俐刘杰曾献武杨会强; 关键词：乙型脑炎减毒活疫苗回复突变神经毒力

乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)的纯化: 2015年; 目的建立纯化乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)的方法。方法应用超滤浓缩和分子筛凝胶柱层析纯化乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2病毒液,检测其病毒滴度、原代地鼠肾细胞残留蛋白含量、牛血清白蛋白残留量、庆大霉素残留量,并进行小鼠脑内致病力试验、乳鼠传代返祖试验、异常毒性试验,制备纯化冻干疫苗,进行热稳定性试验。结果纯化后的JEV病毒滴度高于7.0 lg PFU/ml,平均回收率为23%;牛血清白蛋白残留量、庆大霉素残留量及安全性试验均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定,去除了约95%的原代地鼠肾细胞残留蛋白;制备的冻干疫苗及热稳定性试验中的病毒滴度均高于5.7 lg PFU/ml,且热稳定性试验中病毒滴度下降未超过1.0 lg,符合《中国药典》三部(2010版)规定。结论建立了乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)纯化工艺,但病毒回收率较低,不适宜规模化生产,对乙型脑炎病毒减毒活疫苗质量控制具有指导意义。; 刘杰孙艳刘辉康庄毛川成刘莉娜陈智牟建超赵宇刘俐杨会强李玉华; 关键词：乙型脑炎减毒活疫苗 SA14-14-2 纯化

CA16滴度微量检测方法的建立及其验证被引量：1: 2014年; 目的建立用Vero细胞检测柯萨奇病毒A组16型（CAl6）滴度的方法，并对其适用性进行初步验证。方法通过对细胞种类的选择、细胞接种浓度和细胞病变判定时间的优化，建立测定CAl6滴度的半数细胞感染剂量法（CCID50法），并对其进行初步验证。结果通过对病毒感染后细胞病变情况的观察，确定了以Vero细胞作为CAl6病毒滴度检定用细胞。Vero细胞的最佳接种浓度和结果判定时间分别为5×10^4-1×10^5细胞／mL（即96孔板内每孔加入的最终细胞量为5×10^3-1×10^4细胞）和7d。由4组人员对6批CAl6病毒液进行重复检测，实验结果表明不同实验人员测定结果的变异系数（CV）在1．739％-4．974％之间，说明该方法测定结果重复性好，准确度高。结论该法简便、稳定，可以灵敏、准确地检测CA16病毒的滴度，可用于相关疫苗生产过程中的质量控制。; 曾献武陈平李玫颖孙艳范凤鸣何敏刘杰; 关键词：柯萨奇病毒A组16型病毒滴度

一种访问远程注册表的方法: 2003年; 主要介绍了一种远程访问注册表,并且介绍了编辑远程计算机的注册表的方法,通过此方法可以获取远程计算机的注册表信息,从而方便网络管理和提高网络的安全性,同时也可以对计算机实施远程控制。; 陈淑敏方勇董凯宁李哲刘杰; 关键词：注册表远程

用静电自组装法制备的石墨烯薄膜特性研究被引量：4: 2014年; 本文采用静电自组装技术制备石墨烯薄膜,以带正电的聚乙烯亚胺作为粘结剂,将带负电的氧化石墨烯自组装在粘结剂上,形成多层氧化石墨烯/聚乙烯亚胺复合膜,然后在肼蒸汽下还原得到石墨烯薄膜样品,并利用石墨烯薄膜的紫外吸收光谱、椭圆偏振光谱、扫描电镜图谱及拉曼光谱对其层数、厚度、形貌及还原效果进行了研究。研究表明此方法制备的石墨烯薄膜具有杂质含量少、层数与膜厚微观可控且膜厚均匀等优点。通过调节组装材料种类、浓度和组装次数可制备出结构和功能自由控制的石墨烯薄膜,且此方法与微电子工艺兼容,易于制作石墨烯晶体管,因此在石墨烯晶体管领域具有广阔的应用前景。; 刘杰王彬石瑞英王婧刘沛波吴运熹翁志超; 关键词：静电自组装石墨烯紫外吸收光谱拉曼光谱

病毒感染复数对狂犬病毒PM株增殖的影响被引量：6: 2016年; 目的：探讨不同感染复数（Multiplicity of infection,MOI）的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞（2BS株）中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒后细胞的形态变化；培养3-5d后,第一次收获病毒液；更换培养液继续培养3-4d后,进行第二次收获。采用小鼠脑内滴定法测定狂犬病毒滴度,通过NIH法测定灭活病毒液的效价。结果当MOI为0.05-0.10时,细胞圆缩30%-40%,细胞能维持较好的生长形态,可收获病毒,病毒收获液的滴度较高（〉5.0 lgLD50/mL）,且灭活后病毒液的效价较高（〉4.0IU/mL）。结论确定狂犬病毒PM株在人二倍体2BS细胞增殖的适宜MOI,为人用狂犬病疫苗生产工艺的优化提供了依据。; 陈智孙艳牟建超刘莉娜刘宇刘辉刘杰; 关键词：2BS细胞病毒滴度效价

一种疫苗保护剂、狂犬病疫苗及其制备方法: 本发明提供了一种疫苗保护剂，它包含以下百分含量的成分：二糖50-80份、人血白蛋白20-30份、明胶10份、氨基酸1.5-1.65份。本发明还提供了一种狂犬病疫苗及其制备方法。本发明疫苗保护剂可有效增强狂犬病疫苗冻干剂的...; 李玉华吴永林毛川成刘杰赵宇吴曼萍牟建超刘蓉杨会强孙艳

寨卡病毒E蛋白第三结构域的可溶性表达及多克隆抗体的制备被引量：1: 2019年; 目的原核表达并纯化寨卡病毒(Zika virus)E蛋白第三结构域(ZK-EⅢ)重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增ZK-E Ⅲ序列,经双酶切后将其插入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-ZKE Ⅲ,转化至大肠埃希菌(E. coli)Rosetta2(DE3),经IPTG诱导,表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备ZK-E Ⅲ多克隆抗血清,进行Western blot鉴定后,ELISA法检测该抗血清效价。结果经PCR及测序鉴定证明原核表达质粒pET-ZKE Ⅲ构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约31 000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的60%;用纯化的重组蛋白免疫家兔后,获得的血清特异性良好,血清效价为1∶51 200。结论 ZKE Ⅲ蛋白在E. coli中以可溶性形式表达,制备的抗血清特异性好,效价高,具有用于寨卡病毒诊断和进行重组亚单位疫苗开发的潜力。; 何婷杨欢范凤鸣刘杰牟建超孙艳陈智代云见曾献武杨会强; 关键词：原核表达多克隆抗体

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