刘玲玲
- 作品数：9 被引量：30H指数：4
- 供职机构：兰州大学更多>>
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- 慢性粒细胞白血病K562细胞适配子的筛选、鉴定与结构分析
- 目的:
利用SELEX技术筛选、鉴定出慢性粒细胞白血病K562细胞的寡核苷酸适配子,测定出ssDNA文库与K562细胞的结合率,并对克隆适配子进行一级结构同源性分析和二级结构预测,为白血病的基因诊断和靶向基因治疗奠...
- 刘玲玲
- 关键词：K562细胞SELEX适配子
- 文献传递
- Livin mRNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞株HepG-2体外增殖及凋亡的影响
- 2009年
- 目的探讨LivinmRNA反义寡核苷酸(ASODN)进行肿瘤基因治疗的可行性。方法设计合成嵌合骨架型ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体转染到HepG-2细胞(观察1组和观察2组),同时设未转染者为对照组。采用MTT法检测HepG-2细胞增殖抑制率(IR),电镜、流式细胞仪与吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)细胞染色法检测细胞凋亡水平和形态学变化。结果ASODN在终浓度200nmol/L作用72h时,观察1组HepG-2细胞IR及细胞凋亡数明显高于其他两组。结论以Livin为靶点的ASODN能够促使肿瘤细胞凋亡,具有靶特异性和低毒性,有可能成为抗肿瘤药物开发的新工具。
- 王春霞杨林西韩亚萍路艳刘玲玲
- 关键词：反义寡核苷酸凋亡抑制蛋白肝肿瘤肝癌
- 白细胞介素10基因多态性及幽门螺杆菌感染与胃癌的相关性研究被引量：5
- 2009年
- 目的探讨白细胞介素10（IL-10）启动子区1082位点的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNP）、不同类型幽门螺杆菌（Hp）感染与甘肃地区胃癌易感性之间的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态（PCR．RFLP）和PCR产物直接测序技术分别检测来自甘肃地区人群137例胃癌患者及与其配比的144例对照个体及131例胃癌癌前病变IL-10-1982A／G基因多态性；采用免疫印迹技术对Hp进行毒株分型。结果①对照人群IL-10．1082位，鼠的AA、AG、GG3种基因型分布频率分别为76．4％、22．2％和1．4％；Hp感染情况为HpI型16．0％、Hp11型31．9％、阴性52．1％。②癌前病变组IL-10-1082位点的AA、AG、GG3种基因型分布频率分别为63．4％、32．8％和3．8％。AG＋GG基因型携带频率高于正常对照组（P=0．018），携带IL-10-1082AG＋GG基因型个体癌前病变的发病风险增高到1．87倍。③胃癌组IL-10-1082位点的AA、AG、GG3种基因型分布频率分别为58．4％、35．8％和5．8％；胃癌组IL-10—1082AG＋GG基因型携带频率显著高于正常对照组（P=0．010），携带IL-10—1082AG＋GG基因型个体胃癌的发病风险增高到2．31倍。④以IL-10—1082AA基因型并Hp免疫印迹阴性组为对照，AG＋GG基因型并Hp免疫印迹阴性个体、AG＋GG基因型并Hp感染个体、AG＋GG基因型并HpI型感染个体胃癌患病风险增高，其中AG＋GG基因型并HpI型感染个体的患病风险显著增高，为对照组的9．73倍。结论IL-10-1082位点A／G多态性与胃癌的遗传易感性相关。
- 祝凯华李玉民刘玲玲张丹唐小凡赵军何文婷刘涛宋玉鑫
- 关键词：胃肿瘤白细胞介素10免疫印迹法
- 检测慢性粒细胞白血病的单链DNA适配子及其制备方法
- 本发明提供了一种检测慢性粒细胞白血病的单链DNA适配子及其制备方法，体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA文库，采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库，以正常人中性粒细胞为反筛细胞，利用SELEX技术筛选出与慢性粒细...
- 韩跃武刘玲玲姚海燕查成喜
- 文献传递
- 慢性髓细胞性白血病K562细胞适体的筛选与鉴定被引量：10
- 2009年
- 目的:筛选并鉴定出慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞的寡核苷酸适体.方法:体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA(ssDNA)文库,采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库,以正常人血液中提取的中性粒细胞为反筛细胞,利用指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选出与CMLK562细胞特异结合的适体.将筛选得到的适体回收纯化后连接pGEM-T质粒载体,经蓝白筛选后,随机挑选24个克隆子进行序列测定.采用荧光标记引物法检测ssDNA文库与K562细胞的亲和力,并用Clustal 2.05和DNA sis V2.5软件对适体序列进行一级结构同源性分析和二级结构预测.结果:经过13轮循环筛选,CML K562细胞适体的A值从0.12上升到1.25,至第13轮A值无明显增高.一级结构分析无同源序列,但可分为6个家族,其中5个家族各自具有保守序列,家族6无保守序列.二级结构分析表明,适体形成的茎环、凸环结构可能是与K562细胞特异性结合的结构基础.结论:利用SELEX技术成功筛选出高亲和性的CML K562细胞适体.
- 刘玲玲韩跃武祝凯华李真真韩亚萍路艳王春霞
- 关键词：白血病髓样K562细胞SELEX适体
- 中国甘肃地区汉族IL-10基因多态性与胃癌关系被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨白细胞介素10(IL-10)启动子区-592位点的单核苷酸多态性(SNP)、及幽门螺旋杆菌(Hp)感染与甘肃地区胃癌之间易感性的关系.方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)技术分别对来自甘肃地区人群137例胃癌患者及与其配比的144例对照个体IL-10-592A/C基因多态性进行检测;采用免疫印迹(Immunoblot-ting)技术对幽门螺旋杆菌进行检测.结果:①对照人群IL-10基因-592位点AA,AC,CC3种基因型分布频率分别为29.9%,47.9%,22.2%;②胃癌组IL-10CC基因型携带频率为32.1%显著高于正常对照组22.2%(P<0.05),携带IL-10CC基因型个体胃癌的发病风险增高到2.19倍;③以IL-10AA基因型并血清幽门螺杆菌免疫印迹阴性的个体为对照,CC基因型并HP感染阳性及CC基因型并HpCagA阳性患病风险显著增高,分别为对照组的3.75倍,4.51倍.结论:IL-10基因-592位点A/C多态性与胃癌的遗传易感性相关;IL-10A/C基因多态性和Hp感染在胃癌发生发展过程存在加乘交互作用.
- 祝凯华李玉民刘玲玲张丹唐小凡何文婷陈应泰赵军
- 关键词：基因多态性白介素10胃肿瘤幽门螺杆菌免疫印迹CAGA
- 抗白念珠菌人源性单链抗体库的构建及筛选被引量：4
- 2009年
- 目的构建多样性良好的抗白念珠菌人源性单链抗体库,筛选抗白念珠菌特异性的噬菌体抗体。方法从20份人外周血淋巴细胞(包括正常成年人5份、新生儿5份和白念珠菌感染恢复期患者10份)中提取总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,以重叠延伸PCR法将VH和VL拼接成scFv基因,克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建人源抗白念珠菌天然噬菌体抗体库,并从中筛选阳性克隆抗体。结果构建的人源性抗白念珠菌天然噬菌体抗体库库容为2.8×109,多样性良好。共筛选出18个阳性克隆。结论已成功构建了1个多样性良好的抗白念珠菌人源性噬菌体抗体库,为筛选有效治疗白念珠菌和耐药性白念珠菌感染的药物提供了条件。
- 路艳韩跃武韩亚萍刘玲玲王春霞李真真
- 关键词：白念珠菌单链抗体
- SELEX法体外筛选胃癌细胞适配子方法的建立被引量：11
- 2009年
- 目的:建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法,并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子。方法:体外合成全长88bp中间含52bp随机序列的ssDNA文库,通过优化PCR扩增条件,利用地高辛-抗地高辛抗体-碱性磷酸酶系统测定亲和力,经SELEX反复筛选获得胃癌SGC-7901细胞的特异性适配子。将最后一轮筛选产物克隆、测序并用相关软件分析适配子序列的一级结构和二级结构。结果:经12轮SELEX筛选,ssDNA文库与SGC-7901细胞的亲和力由0.16上升至1.14,表明特异性适配子得到逐步富集。22个克隆子测序,有4个序列完全一致,二级结构预测茎环可能是适配子与胃癌细胞作用的结构基础。结论:成功建立了SELEX技术体外筛选胃癌细胞SGC-7901高亲和性适配子的方法。
- 李真真韩跃武刘玲玲韩亚萍路艳王春霞
- 关键词：胃癌细胞SELEX适配子
- 人源性胃癌单链抗体库的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:构建人源天然库容量大、多样性好的核糖体展示单链抗体(scFv)库。方法:采集人新鲜外周血分离淋巴细胞,提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体VH和VL基因,同时扩增作为间隔区的人抗体CK基因;采用重叠延伸PCR(简称SOEPCR)技术连接VH-VL-CK基因,同时引入T7启动子和核糖体结合位点序列,体外构建核糖体展示scFv库模板,连接T-Vector转化E.coliDH5α大肠杆菌,蓝白筛选,挑取阳性克隆测序以鉴定scFv组装。结果:成功构建了库容量达3.1×1013的人源性胃癌核糖体展示scFv库。结论:构建的大容量人源性胃癌核糖体展示抗体库可以成为进一步筛选多种特异性人源抗体的实验平台,为开发治疗性人源抗体奠定了很好的实验基础。
- 韩亚萍韩跃武路艳王春霞刘玲玲李真真
- 关键词：核糖体展示技术胃癌
