刘鹏娟
- 作品数：17 被引量：55H指数：5
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划国际科技合作与交流专项项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪伪狂犬病毒Fa株侵染对PK-15细胞microRNAs表达谱的影响
- 2016年
- 【目的】分析猪伪狂犬病毒Fa株(PRV-Fa)侵染对猪肾传代细胞PK-15 microRNAs(miRNAs)表达谱的影响。【方法】利用Illumina高通量测序技术,鉴定感染和非感染PRV-Fa的PK-15细胞的miRNAs;筛选并利用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)验证差异表达miRNAs;对差异miRNAs进行靶基因预测和Gene ontology(GO)分析。【结果】在感染和未感染PK-15细胞中分别检测到384个和405个miRNAs,其中感染PRV-Fa后差异表达的miRNAs共127个(60个上调,67个下调)。荧光定量结果显示差异miRNAs的表达趋势与高通量测序结果一致。GO分析显示,miRNAs广泛参与信号传导、细胞代谢、免疫反应、基因表达等生物学进程,其中miR-10b、miR-16、miR-18a、miR-19b、miR-20a、miR-145-5p、miR-146a、miR-181a、miR-499-5p等miRNAs与免疫相关。在靶基因调控网络图中,ssc-miR-30a-5p与ssc-miR-30d处于关键位置。研究鉴定出5个新的病毒编码miRNAs,其中PRV-miR-LLT2与PRV-miR-LLT4靶向PRV早期蛋白基因EPO。【结论】伪狂犬病毒Fa株感染对PK-15细胞编码miRNAs有显著影响。
- 刘鹏娟乔小改李萍黄剑波卓秀萍方和俊邓益超徐志文朱玲
- 关键词：猪伪狂犬病毒MICRORNASPK-15细胞
- 基于PoRV VP7与PEDV S基因二联DNA疫苗的构建及免疫效力评价
- 猪轮状病毒病是由猪轮状病毒(Porcine Rotavirus, PoRV)引起的一种腹泻性疾病,主要引起仔猪腹泻、呕吐、脱水等。猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea vi...
- 刘鹏娟
- 关键词：PEDVDNA疫苗佐剂
- 文献传递
- 猪呼肠病毒研究进展
- 2014年
- 猪呼肠病毒(Porcine reovirus)属于呼肠病毒科(Reoviridae)正呼肠病毒属(Orthoreovirus),基因组由10条分节段的dsRNA片段组成,编码11种多肽。猪感染呼肠病毒后多不表现明显的临床症状,但严重者可引起呼吸系统或胃肠道疾病。论文就近年来国内外对猪呼肠病毒形态特征、理化特性、培养特性、分子生物学、致病机制、病毒检测及防控措施等方面的研究进展进行综述,为猪呼肠病毒的深入研究提供参考。
- 刘鹏娟黄山朱玲周远成卓秀萍覃娟娟顾凡
- 关键词：呼肠病毒分子生物学病毒检测
- 猪伪狂犬病毒SC株的分离鉴定及生物信息学分析
- 引言猪伪狂犬病毒(PRV)可引起妊娠母猪繁殖功能障碍和初生仔猪神经症状,仔猪感染率和死亡率高达100%。自2011年以来,猪伪狂犬病的报道有增多趋势,出现了接种了疫苗不能提供完全保护的现象,涉及我国多个省、市、地区的猪场...
- 刘小琬周远成杨凡刘鹏娟卓秀萍朱玲徐志文
- 文献传递
- 人工感染猪流行性腹泻病毒的哺乳仔猪的病理学观察被引量：16
- 2015年
- 为观察猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的哺乳仔猪的病理学变化,选取60头健康的哺乳仔猪,随机均分为A、B两组。A组仔猪经口接种PEDV细胞毒,B组作为空白对照,观察不同发病阶段A组仔猪的临床症状、剖检变化、组织切片的病理学变化。结果显示,A组仔猪潜伏期表现比较正常,仅肠道有轻微的卡他性炎症,肠道上皮细胞肿胀。前驱期仔猪出现呕吐和腹泻,肠道和淋巴结充血严重。典型症状期仔猪出现严重的腹泻、脱水、粪便恶臭等猪流行性腹泻的典型症状,严重的陆续死亡;个别组织器官出现严重病变,如肠上皮细胞脱落、肺泡融合、脾白髓萎缩、肾出现蛋白管型等。耐过仔猪生长缓慢。结果表明,A组仔猪出现典型的猪流行性腹泻的病理学变化,且病理演变过程具有一定的规律性,其致病机理可能与对肠道、肺的组织嗜性和对淋巴结、脾的免疫抑制性有关。
- 卓秀萍朱玲乔小改陈正礼王英智刘鹏娟徐志文
- 关键词：哺乳仔猪猪流行性腹泻病毒病理学观察
- 四川地区某猪场腹泻仔猪中圆环病毒2型(PCV-2)的全基因克隆及生物信息学分析
- 引言近年全国范围内仔猪腹泻发病率高、死亡率高,造成较大经济损失,已成为影响我国养猪产业发展的一大障碍,圆环病毒(porcine eireovirus,PCV)被列为世界公认的当前危害养猪业发展的头号疫病,已引起世界各国的...
- 刘小琬周远成杨凡刘鹏娟卓秀萍朱玲徐志文
- 文献传递
- 猪环曲病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用被引量：1
- 2015年
- 为建立快速检测猪环曲病毒(PToV)的RT-LAMP方法,根据GenBank中发表的N蛋白基因序列,设计合成4条特异性LAMP引物,通过敏感性试验和特异性试验,建立了PToV RT-LAMP检测方法,并对71份临床粪便进行了检测应用。结果显示,本试验建立的PToV RT-LAMP检测方法在65℃60min条件下可扩增出特异性梯状DNA条带,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、猪环曲病毒的核酸无交叉反应;检测极限为10copies/μL,比普通RT-PCR的灵敏度高10倍,表明该检测方法具有较强的特异性及灵敏性。用建立的RT-LAMP方法进行的样品检测结果显示,受检的71份样品中有17份检测结果为阳性,该结果与常规RTPCR检测结果吻合,总的阳性率为23.9%。
- 刘小琬蔡雨函周远成杨凡刘鹏娟黄剑波方和俊朱玲徐志文
- 关键词：RT-LAMP
- 荧光定量RT-PCR对猪流行性腹泻病毒在仔猪体内分布规律的研究被引量：5
- 2016年
- 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)在感染仔猪各主要器官中的增殖和分布情况,本研究根据PEDV N基因和宿主细胞GAPDH基因建立荧光定量RT-PCR法,并以该方法检测各个发病期的哺乳仔猪各器官内PEDV的病毒载量。结果表明,仔猪感染PEDV后,在49 h^72 h出现典型的猪流行性腹泻症状,肠、肠系膜淋巴结、肺等器官出现严重病变。利用本研究建立的检测方法在仔猪体内肠、肠系膜淋巴结、肺、脾、肾、心、肝这些器官中均可以检测到PEDV;其中肠、肠系膜淋巴结、肺中病毒载量最高,而且感染时间早、持续时间长。研究表明,PEDV的感染呈持续性、多脏器性,并对肠和肺有组织嗜性;结合本实验室前期的病理研究,推测其在消化器官、呼吸器官中增殖能够导致功能细胞的损伤,在免疫器官的增殖能够造成免疫抑制和混合感染。本研究为PEDV的感染特性、定植规律和致病机理的研究及分子生物学检测方法的建立奠定了基础。
- 卓秀萍朱玲刘鹏娟赵军李萍黄建波徐志文
- 关键词：哺乳仔猪
- 猪萨佩罗病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：6
- 2015年
- 为建立猪萨佩罗病毒（PSV）的检测方法,根据GenBank中PSV的5′端非编码区基因的保守序列设计并合成1对针对PSV的特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅡ检测PSV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能很好地将PSV与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪嵴病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒区分开,特异性强。检测下限为6.37×10^2 copies/μL,比普通PCR敏感100倍,敏感性高。扩增产物的熔解曲线分析只有1个单特异峰。所建立的实时荧光定量RTPCR的批内变异系数为0.44%～1.14%,批间变异系数为0.70%～1.32%,重复性较好。应用该方法对采集自四川省部分地区的58份有腹泻症状的猪粪便进行检测,实时荧光定量RT-PCR检测阳性率为56.9%,与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结果表明,本研究建立的实时荧光定量RT-PCR特异性较强、灵敏度高,可用于该病毒的临床检测、定量分析及流行病学调查。
- 郭博方和俊刘小琬杨凡刘鹏娟黄剑波李萍徐志文朱玲
- 关键词：SYBR实时荧光定量RT-PCR
- 胸膜肺炎放线杆菌血清7型菌株体外培养PalA基因表达规律的研究
- 2016年
- 为了解对机体免疫反应具有副作用的肽聚糖相关脂蛋白在胸膜肺炎放线杆菌(APP)体外培养中的表达规律,建立了一种SYBR GreenⅡ实时荧光定量PCR检测方法,对PalA基因在APP血清7型菌株体外培养不同生长阶段的表达情况进行了监测,并对比分析了菌株生长曲线与该基因的表达曲线。结果显示,成功建立了实时荧光定量PCR标准曲线y=-3.578x+48.982(E=90.3%,R^2=0.999),最低检测浓度为1.1×10~2copies/L,并具有较好的特异性与重复性。菌液生长到第6小时(D_(600)=0.834)进入稳定期,活菌含量最高,达2.38×109CFU/m L,此时PalA基因的表达量较低,为0.609 ng/L,约占总反转录cDNA的0.366‰。菌液生长至第8小时(D_(600)=0.835)达到PalA基因表达最高峰,为0.913 ng/L,约占总反转录cDNA的0.564‰。菌液生长到第6小时满足菌液活性大、活菌含量高且PalA蛋白含量低等特点。本试验为临床APP全菌疫苗的生产提供了一定借鉴。
- 李萍樊毅毛汐语卓秀萍刘鹏娟殷玥徐志文朱玲
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌实时荧光定量PCR
