吴晓平
- 作品数：16 被引量：34H指数：4
- 供职机构：福建农林大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省科技重大专项福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学更多>>
- 基于高通量测序技术分析番鸭呼肠孤病毒感染雏番鸭肠道转录组学的变化被引量：4
- 2019年
- 番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)感染雏番鸭可导致肠道黏膜受损,造成肠黏膜免疫功能低下甚至丧失。为寻找番鸭呼肠孤病毒感染雏番鸭肠道组织免疫相关的差异表达基因,本研究建立番鸭呼肠孤病毒自然发病模型,在感染后3d、6d、21d采集同居感染组和对照组试验雏番鸭的空肠,对其进行高通量测序,对差异表达基因进行GO功能分类和KEGG数据库分析。结果显示,感染后3d、6d和21d分别筛选出2 297、5 860和3 721个差异表达基因;GO分子功能结果显示,免疫相关差异表达基因主要和免疫球蛋白的产生、T细胞活化和单核细胞趋化性等有关;KEGG通路富集结果显示,差异表达基因主要涉及在吞噬体、细胞溶质DNA传感途径、细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号通路、Jak-STAT信号通路和RIG-I受体信号通路;荧光定量RT-PCR对差异表达基因进行验证,其结果与转录组学结果基本一致。本研究为进一步阐明MDRV感染导致雏番鸭肠道损伤和黏膜免疫抑制的机制奠定基础。
- 李鸿文黄诗杭骆钰吴晓平王全溪王全溪黄一帆李健
- 关键词：黏膜免疫转录组
- 番鸭源传染性支气管炎病毒PTFY株的分离鉴定被引量：2
- 2016年
- 为弄清楚2009年7月某种番鸭养殖场产蛋高峰期番鸭产蛋率、孵化率降低,蛋质量下降的原因,选择无呼吸道症状,死亡率低,剖检可见卵巢肿大充血的番鸭。为确诊该病例,进行病原体的分离与鉴定。取病番鸭卵巢组织,通过鸡胚接种实验、脂溶剂敏感实验、新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）干扰试验、电镜观察和动物接种实验进行病毒分离和鉴定。结果表明：接种鸡胚可导致侏儒胚,该毒株对于脂溶剂敏感,胰酶处理后具血凝性,可干扰NDV复制,电镜下可见典型冠状病毒形态,接种雏鸡可致呼吸道症状,针对N基因部分序列的扩增与分析可见该毒株与传染性支气管炎病毒（Avian infectious bronchitis virus,IBV）参考毒株相应核苷酸序列同源性为84.7%~99%,鉴定所分离毒株PTFY株为IBV,证实IBV对番鸭具有致病性。
- 吴晓平潘书磊周五朵吴异健黄一帆吴宝成
- 关键词：传染性支气管炎病毒番鸭
- 预防兽医学四阶段实践教学体系的构建及效果分析被引量：2
- 2016年
- 实践教学是高等学校教学工作的重要组成部分,是培养高素质人才的关键环节。针对预防兽医学实践性强的学科特点,笔者构建了预防兽医学"基础训练、综合实习、技能测试和自主设计"四阶段阶梯式实践教学体系模式,融入到动物医学专业四个学年中分阶段实施,并对其实施效果进行分析,为满足社会需求和从事科学研究培养高素质动物医学专门人才提供思路。
- 曾显成吴异健吴晓平王松吴宝成
- 关键词：预防兽医学实践教学体系
- 番鸭呼肠孤病毒感染对雏番鸭肠黏膜组织结构及肠道免疫细胞的影响被引量：7
- 2018年
- 为探究番鸭呼肠孤病毒(MDRV)感染对雏番鸭肠黏膜免疫的影响,本研究将100只1日龄MDRV抗原抗体阴性雏番鸭随机分为二组:空白对照组(NCG)和MDRV同居感染组(CIG),利用人工感染发病的20只番鸭对GIC组番鸭进行同居感染。NCG和CIG组番鸭分别于后者同居感染1 d、3 d、6 d、10 d、15 d、21 d后采集其十二指肠、空肠、回肠样品进行肠道形态结构(绒毛高度、宽度、V/C值、肠壁厚度、绒毛表面积)的观察及免疫相关细胞(上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞)的检测。结果显示:与NCG相比,CIG番鸭肠道绒毛高度下降、宽度变窄,排列稀疏,V/C值降低,绒毛表面积下降,肠壁厚度变薄,上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞数量下降,尤其是同居感染6 d以后其各项检查指标均与NCG差异极显著(p<0.01)。表明MDRV可导致肠道消化吸收功能障碍和黏膜免疫抑制。该研究结果进一步充实MDRV感染的致病机制。
- 吴异健姜慧慧姜慧慧黄丽娜周五朵王全溪王全溪李健吴晓平黄一帆
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒肠道形态结构黏膜免疫相关细胞肠黏膜免疫
- 番鸭呼肠孤病毒σNS蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：7
- 2015年
- 为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV)YB株σNS蛋白的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了σNS基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-YB-σNS。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功高效表达出分子质量约为58ku的融合蛋白。该融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在,表达时的最佳诱导时间、IPTG诱导浓度、诱导温度分别为4h、1mmol/L和37℃。通过对包涵体和可溶性蛋白进行尿素洗涤纯化和(或)Ni 2+柱亲和层析纯化,得到了高纯度的重组蛋白。分别对纯化前、后的重组蛋白进行Western-blot分析,结果显示两者均可以与MDRV阳性血清发生特异性反应,表明它们具备良好的反应原性。将纯化后的可溶性σNS蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶32 000。上述研究结果为后续MDRVσNS蛋白功能研究奠定了基础。
- 朱二鹏崔龙萍吕小婷余深翼周五朵吴异健吴晓平吴宝成
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒原核表达纯化多克隆抗体
- 鸡传染性支气管炎病毒HQ P_(10)毒株非编码区序列分析
- 2015年
- 研究旨在探讨鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的遗传变异情况,为鸡传染性支气管炎的防控提供基础数据.通过对IBV HQ毒株第10代鸡胚培养病毒的5＇端非编码区（5＇UTR）和3＇UTR序列进行cDNA末端快速扩增（RACE）和序列分析.结果表明：HQP10的5＇UTR长度为525 nt,相较于Beaudette毒株,序列中发生4个位点的碱基缺失突变,1个位点的碱基插入突变,导致其SL1-SL4茎环结构有所改变,与参考毒株的相应序列同源性在94％～99％之间;而3＇UTR长度为363 nt,与参考毒株相应序列的同源性在45％～98％之间,与H120的同源性在93.3％,而与H52株、M41株的同源性则较低,分别为46.4％和45.9％.UTR对病毒RNA的合成具有重要作用,HQP10毒株UTR中的突变对病毒复制效率的影响还有待进一步研究.
- 韩绪春何锡栋黄宝钦罗忠宝吴晓平李文迹吴宝成
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒UTR突变
- CNTFRα在ALV自然重组FJ15HT0株感染宿主过程中的表达
- 2021年
- 本团队之前分离到一株天然重组禽白血病病毒(ALV)毒株FJ15HT0,经RNA-seq分析发现该毒株感染会引起鸡胸腺组织中睫状神经营养因子受体α(CNTFRα)基因表达量上调。为进一步探究CNTFRα在ALV FJ15HT0株感染过程中的表达及作用,本研究在构建ALV先天感染模型的基础上,通过RT-qPCR和免疫组织化学染色(IHC)探究不同时间点CNTFRα在感染鸡肝脏和胸腺中的表达量变化;以RT-qPCR和Western Blot检验病毒的复制水平对DF-1细胞CNTFRα在转录水平和蛋白表达水平的影响。结果表明,感染组与空白组相比,鸡胚出壳率明显降低,鸡只体重极显著降低(P<0.01);RT-qPCR和IHC结果显示同一时间点感染组胸腺和肝脏组织中CNTFRα转录水平及蛋白表达量均极显著高于空白组(P<0.01),胸腺组织中CNTFRα基因相对表达量与病毒gp85基因相对表达量呈极显著正相关关系(r=0.633,P<0.01);14 d、21 d感染组鸡只血清CNTF含量显著高于空白组(P<0.05)。RT-qPCR和Western Blot检测结果表明84 h感染组DF-1细胞CNTFRα表达量随病毒复制水平增加而显著提高(P<0.05),CNTFRα基因与病毒gp85基因相对表达量呈极显著正相关关系(r=0.73,P<0.01),CNTFRα蛋白与p27蛋白的表达量呈极显著正相关关系(r=0.973,P<0.01)。研究表明CNTFRα可能参与ALV FJ15HT0株致病过程。
- 龚祖新吴滨滨林建平吴异健吴晓平
- 关键词：致病机理蛋白表达量基因表达量
- 福建地方鸡B亚群禽白血病病毒的分离鉴定被引量：3
- 2016年
- 在对福建某地方鸡群进行禽白血病流行病学调查的基础上,对疑似病例进行p27抗原检测,取阳性血清接种DF-1细胞分离病毒。采用PCR及间接免疫荧光试验鉴定其亚群并对其gp85基因进行序列分析。结果显示,分离株FJ15HT0的B亚群特异性PCR检测呈阳性;IFA显示感染该毒株的DF1细胞中可检测到p27抗原,而未检测到J亚群特异性囊膜蛋白的表达;对该毒株gp85序列进行分析,发现与多株ALV-B参考毒株氨基酸序列的同源性为91.6%～98.8%,其中与GX10LS01株同源性最高为98.8%,与A、C、D、E亚群同源性在69.4%～84.2%,与J亚群同源性仅为36%～38%。该研究首次分离并鉴定河田鸡群中ALV-B,为后续的研究奠定了基础。
- 赵金荣曾宇坤朱二鹏周五朵吴异健胡万荣吴宝成吴晓平
- 番鸭呼肠孤病毒YB株σB蛋白的基因序列分析及其原核表达被引量：2
- 2013年
- 番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,DRV)是造成雏番鸭高死亡率的重要病原体,深入其检测与免疫研究对于防控DRV感染意义重大。利用RT-PCR和测序技术,对3株福建DRV分离株的S3基因进行序列分析,发现DRV-YH、YJL株与禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)遗传距离较近,同源性高达94.6%～98.9%,而DRV-YB株与ARV同源性仅为60.6%～61.7%。构建和鉴定DRV YB株重组原核表达质粒pET-30a-S3,并转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE表明,表达的目的蛋白分子量约为42ku,IPTG最适诱导浓度为0.1mM,最适诱导时间为5h,最适诱导温度为37℃,以包涵体形式存在。薄层扫描显示重组DRVσB蛋白占菌体总量的67.7%。以Ni 2+柱亲和层析纯化蛋白,纯化后的目的蛋白纯度为93%,质量浓度为0.86g/L。Western blot分析该融合蛋白能与抗DRV阳性血清发生特异性反应,表明重组DRVσB蛋白具有良好的免疫反应性。
- 吴晓平张红星吴异健韩典霖王劭吴宝成黄一帆
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒原核表达
- 禽白血病重组毒FJ15TH0株不同感染方式对SPF鸡感染状态及组织病毒载量的影响
- 2017年
- 为揭示禽白血病病毒(ALV)自然重组毒FJ15TH0感染SPF鸡群的不同方式对其感染状态和病毒组织分布的影响,本研究设计动物试验分别模拟垂直传播和生长早中期水平传播,动态检测各组病毒血症、泄殖腔排毒、抗体反应及不同内脏组织病毒载量,为制定地方鸡群中ALV感染的防控和净化措施提供可靠的流行病学依据。结果表明胚内接种模拟垂直传播组除2只实验鸡外均产生免疫耐受,持续带毒排毒而无抗体产生;1日龄和D组均未表现泄殖腔排毒,在接触病毒后2~3w后C组63.6%实验动物表现一过性病毒血症,D组未表现病毒血症,暴露后5~11w期间C组9.1%~25%鸡出现一过性血清抗体,D组在暴露后3~5w期间14.3%~42.8%实验鸡产生一过性血清抗体。11w时剖杀实验鸡,荧光定量RT-PCR检测各组各实验鸡不同组织的gp85mRNA及病毒粒子的基因组RNA含量,结果显示垂直感染组表现泄殖腔排毒者gp85检测均为阳性,该分离株对肾脏和法氏囊的组织亲嗜性最强,而对肝脏和脾脏的亲嗜性较低;而同居感染组实验鸡均表现为gp85mRNA检测阴性,表明该重组毒水平感染能力较弱。
- 曾宇坤安亚娟卢荣彬赵金荣余深翼吴异健吴晓平
- 关键词：排毒病毒血症抗体水平
