周会娜
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国科学院植物研究所植物分子生理学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 缺失nifZ的棕色固氮菌突变株DJ194的钼铁蛋白研究
- 从棕色固氮菌DJ194菌株得到的固氮酶粗提液经DEAE-52、Sephacryl S-200及Q-Sepharose等柱厌氧层析,分离纯化得到nifZ基因缺失的固氮酶MoFe蛋白（ΔnifZ Av1）制备物。通过天然电泳...
- 周会娜
- 关键词：细菌铁蛋白纯化和特性
- 文献传递
- 缺失nifZ的棕色固氮菌突变株DJ194的钼铁蛋白研究——纯化、结晶及金属簇的组成与分布
- 从棕色固氮菌DJ194菌株得到的固氮酶粗提液经DEAE-52、SephacrylS-200及Q-Sepharose等柱厌氧层析，分离纯化得到nifZ基因缺失的固氮酶MoFe蛋白(ΔnifZAv1)制备物。通过天然电泳和S...
- 周会娜
- 关键词：棕色固氮菌突变种钼铁蛋白细菌铁蛋白固氮酶
- 文献传递
- 棕色固氮菌突变种UW3部分提纯的固氮酶CrFe蛋白溶液中残存细菌铁蛋白的晶体生长及鉴定被引量：2
- 2004年
- 从无钼、无氨而含铬的固氮培养基中生长的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种UW3中纯化得到了部分纯的CrFe蛋白。在试图培养CrFe蛋白大晶体时发现，棕色晶体和砖红色晶体可同时或单独出现。SDSPAGE和厌氧天然PAGE皆表明，棕色晶体主要由与固氮酶钼铁蛋白(Avl)类似大小的亚基(～60kD)组成，而砖红色晶体则由～20kD亚基组成。免疫分析表明只有～60kD的亚基可与固氮酶钼铁蛋白的抗体反应，而～20kD亚基则无这种反应。在部分纯的CrFe蛋白溶液中，～20kD的总蛋白含量远低于～60kD蛋白的含量，表明由这种小亚基组成的蛋白只是CrFe蛋白溶液中的一种污染蛋白。用3，5-二氨基苯甲酸染色的天然电泳表明，形成砖红色和棕色晶体的蛋白是迁移率不同的两种含铁蛋白。质谱分析表明砖红色晶体蛋白为棕色固氮菌的细菌铁蛋白。分辨率为2．34A的X射线衍射结果也表明，砖红色晶体属于H3空间群，晶胞参数为a=124．965A^°，b=124．965A^°和c=287．406A^°。即将发表的三维结构解析表明，此砖红色晶体确为24聚体的细菌铁蛋白。
- 赵剑峰刘合力周会娜汪志平赵颖边少敏李树兴毕汝昌黄巨富
- 关键词：细菌铁蛋白棕色固氮菌突变种
- 缺失nifH的棕色固氮菌突变种固氮酶钼铁蛋白的结晶被引量：1
- 2004年
- 从限氨固氮培养基中培养的缺失nifH的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种DJ54中，分离纯化出部分纯的缺失FeMoco的钼铁蛋白(△nifH Avl)。用相同纯化方法分别从DJ35和UW45突变种中纯化的△nifE Avl和NifB^-Avl的纯度明显高于△nifH Avl的纯度。在合适的结晶条件下，可得到这三种蛋白的深棕色短斜四棱柱晶体。△nifH Avl与NifB^-Avl一样，晶体形成所需的时间比△nifE Avl的长。而它结晶所需的沉淀剂和缓冲液最适浓度则与△nifE Avl的相同。SDS—PAGE鉴定表明，结晶的△nifH Avl与OP Avl的组成相似。这表明，在△nifH Avl溶液中形成的晶体可能就是该蛋白质的晶体。
- 边少敏赵剑峰吕玉兵赵颖周会娜王耀萍黄巨富
- 关键词：棕色固氮菌突变种固氮酶钼铁蛋白NIFH沉淀剂
- 棕色固氮菌nifE缺失突变株(DJ35)钼铁蛋白的特性被引量：1
- 2005年
- 从棕色固氮菌缺失nifE的突变株DJ35中纯化得到纯度约为80%的MoFe蛋白(△nifE Av1).与野生种OP中纯化出的MoFe蛋白(OP Av1)相比,△nifE Av1具有与之相同的亚基组成,并可与OP Av1的抗体发生免疫交叉反应,但在厌氧天然电泳中的迁移率略大于OP Av1.金属含量测定表明,△nifE Av1的Mo和Fe含量均显著下降.△nifE Av1单独与OP Fe蛋白互补时不具乙炔还原活性,但可被从OP Av1中抽提出的FeMo-co体外激活.△nifE Av1的圆二色谱450nm附近区域与OP Av1的相似,而电子顺磁共振谱中g≈3.7的信号则完全消失,g≈4.3和2.0处的信号也分别下降75%和50%左右.上述结果表明,从DJ35中纯化出的△nifE Av1是一种FeMo-co缺失而P-cluster正常的MoFe蛋白.
- 赵颖边少敏张纯喜周会娜王煌平赵剑峰黄巨富
- 关键词：棕色固氮菌电子顺磁共振NIFE缺失突变株钼铁蛋白
- 缺失nifZ棕色固氮菌突变株(DJ194)钼铁蛋白的金属原子簇的组成与分布被引量：1
- 2005年
- 经DEAE 52, Q-Sepharose和Sephacryl S-200柱的厌氧层析, 从缺失nifZ基因的棕色固氮菌突变株(DJ194)中纯化得到固氮酶钼铁蛋白(ΔnifZ Av1). 厌氧天然电泳后的Western blotting和SDS-变性凝胶电泳显示, ΔnifZ Av1的电泳迁移率、分子量和亚基组成等与野生种钼铁蛋白(OP Av1)相似; 而且ΔnifZ Av1的Mo含量、EPR信号(g ≈ 4.3, 3.65和2.01)及660 nm附近的圆二色摩尔消光系数(Δε)也都与OP Av1较相似, 表明ΔnifZ Av1除具有α2β2四聚体结构组成外, 还含有与OP Av1数量相当的、具有3/2自旋态的还原FeMoco. 然而, ΔnifZ Av1的Fe含量和对底物 (C2H2, H+和N2)的还原活性都较低, 分别约为OP Av1的74%和46%～50%, 而反映P-cluster状况的450 nm附近的Δε也明显低于OP Av1, 说明ΔnifZ Av1与OP Av1的差别在于P-cluster, 而不在于FeMoco, 而且是在于ΔnifZ Av1中P-cluster数目的减少(约50%), 而其组成或氧还状态并未改变. 据此推测ΔnifZ Av1(DJ194)的结构为: 一个αβ亚基对含有一个FeMoco和一个P-cluster, 而另一个αβ亚基对只含FeMoco, 无P-cluster. 由于nifZ基因的缺失只造成了钼铁蛋白中2个P-cluster中的一个不能组装, 因此推测P-cluster的组装可能不是受单一基因产物的影响并由此提出了NifZ的可能作用机理.
- 周会娜张纯喜赵颖赵颖边少敏王煌平任飞
- 关键词：棕色固氮菌钼铁蛋白突变株金属原子簇圆二色自旋态
- 固氮酶晶体学研究进展
- 2004年
- 生物大分子的功能取决于它的空间结构。X射线衍射分析是获得生物大分子结构信息的常用方法。本文对固氮酶晶体的生长及其X射线衍射分析的主要进展简要地进行了介绍和评论。最后展望了今后的发展及问题。
- 赵剑峰周会娜赵颖边少敏黄巨富
- 关键词：固氮酶晶体空间结构X射线衍射分析生物大分子
- Cr介质中生长的棕色固氮菌突变株UW3的固氮酶CrFe蛋白的特性
- 2006年
- 经DEAE-52,Q-Sepharose和Sephacry S-200柱厌氧层析,从在含Cr的培养基中生长良好的棕色固氮菌突变株UW3纯化得到CrFe蛋白制备物．与从野生型固氮菌OP的MoFe蛋白(OP Av1)相比,该制备物中-50％的蛋白具有与之相似的亚基组成,并可与OP Av1的抗体发生免疫交叉反应．该制备物还具有-40％的OP Av1 C2H2,H+和N2(以在氩气和氮气下放氢的差值表示)还原活性,并具与OP Av1相似的电子对比率．金属分析表明,此蛋白制备物含有Fe,Cr和Mo．与OP Av1相比,该制备物在450 nm的圆二色谱(CD)与之相似,但在3个相同g值处(g≈4．3,3．7和2．0)出现的EPR信号相对强度则不相同．根据EPR计算的结果表明,(i)CrFe蛋白制备物的Mo/Cr和Fe／(Cr+Mo)的比率分别为0．4和15．0,暗示在该制备物中的含Cr蛋白与MoFe蛋白之比约为2．5;(ii)该制备物活性与Fe及Cr的比率都分别接近于OP Av1活性与Fe和与Mo的比率;(iii)该制备物的上述3个g处的EPR信号强度与Cr含量的比率分别为Op Av1信号强度与Mo含量之比的-83％,0％和-40％．以上结果表明,CrFe蛋白也许是一种新的固氮酶组分Ⅰ蛋白,除以Cr代替Mo外,它的功能和包括金属原子簇在内的结构都可能与MoFe相似。
- 张志刚赵颖张纯喜边少敏周会娜王煌平殷红黄巨富
- 关键词：AZOTOBACTER金属原子簇
