尹恒
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- E.coli野生株F18菌毛蛋白粘附亚单位基因的克隆、表达及免疫原性研究
- 根据Z26520中fedF序列设计1对引物,从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因,经纯化、连接、转化,将其克隆到pMD18-T中,所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列...
- 罗维余兴龙白霞李润成侯强红尹恒
- 关键词：免疫原性
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究被引量：6
- 2007年
- 为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a(+)中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切切下Cap基因3’末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3’末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验。结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别。攻毒后,所有小鼠临床表现正常。用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-21。PCV-2 Cap基因3’端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 侯强红余兴龙李微李润成罗维刘浩尹恒刘忠华
- 关键词：猪圆环病毒2型免疫原性
- 大肠杆菌LTB-FedF的融合表达及LTB-FedF，FedF蛋白初步免疫试验
- 经酶切、连接，转化将pBV220FedF中fedF成熟肽基因片段插入到重组质粒pETLTB中LTB成熟肽基因的3末端，获得含LTB-fedF融合基因的质粒pETLTBFedF。SDS-PAGE与Western-blott...
- 罗维葛猛侯强红尹恒刘浩李润成余兴龙
- 关键词：大肠杆菌免疫保护试验
- 文献传递
- 大肠杆菌野生株F18菌毛蛋白粘附亚单位基因的克隆与表达被引量：4
- 2007年
- 根据Z26520中fedF序列设计1对引物,从发病仔猪的腹泻粪便分离获得的大肠杆菌中扩增得到fedF基因,经纯化、连接、转化,将其成功克隆到pMD18-T中,所克隆fedF基因序列与GenBank中收录的其他fedF基因序列的同源性达97.8%～99.2%.另设计1对引物,利用基因工程方法将所克隆的fedF的编码序列亚克隆到表达载体pBV220中,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达重组菌.测序结果表明,插入编码序列与预期序列一致.SDS-PAGE电泳及Western-blotting分析表明,重组菌在诱导后可以表达特异性的相对分子质量为30 100的FedF蛋白.
- 罗维余兴龙白霞李润成侯强红尹恒
- 关键词：大肠杆菌克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征的诊断和防制被引量：1
- 2008年
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起猪的一种高度传染性疾病,主要表现为妊娠母猪早期流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔等繁殖障碍以及各年龄阶段猪发生呼吸道疾病,仔猪感染后成活率降低,对养猪业造成了巨大的经济损失,国际兽医局(0TE)将其列为B类疫病,我国列为二类疫病。为了加强检疫以及防止该病的传播,主要是通过提高对该病的诊断和防制水平,文章就有关该病的主要诊断手段与基本防制方法进行了综述。
- 尹恒
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征
