目的：探讨乙肝病毒S蛋白（HBs）诱导人精子凋亡的分子机制。方法：人精子与不同浓度（0、25、50、100μg/m L）HBs共孵育3 h后,应用Annexin V-FITC/PI双染法检测HBs对精子早期凋亡指标磷脂酰丝氨酸外翻情况,用流式细胞术检测精子细胞内半胱氨酸蛋白酶-3、-8、-9（Caspase-3、-8、-9）活化,用TUNEL结合流式细胞术检测精子DNA的损伤。结果：人精子与25~100μg/m L HBs共孵育3 h后,Annexin V-FITC＋/PI-精子,Caspase-3、-8、-9阳性精子,TUNEL阳性精子的比率均显著高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,且均呈剂量依赖趋势。结论：25~100μg/m L HBs可诱发人精子胞膜磷脂酰丝氨酸外翻,胞内Caspase-3、-8、-9激活和DNA损伤,从而致使人精子凋亡以影响精子的功能。
目的利用非基因整合方法建立无精症患者的诱导多能干细胞系(iPSCs)。方法采用目前商品化的无血清完全培养基(TeSR?2)和胚胎干细胞培养基(Stem Adhere? Defined Matrix)限定培养体系,利用非基因整合的仙台病毒感染无精症患者外周血单个核细胞,建立了无精症患者的i PSCs系,应用免疫荧光、核型分析、拟胚体和畸胎瘤实验对iPSCs系的多能性、核型及分化能力进行鉴定。结果建立的iPSCs系具有人胚胎干细胞的特征。免疫荧光显示,干细胞多能性标志基因表达的八聚体结合转录因子4(OCT4)、性别决定基因相关蛋白2(SOX2)以及干细胞特异表面抗原阶段特异性胚胎抗原-4(SSEA-4)、肿瘤排斥抗原-1-60(TRA-1-60)均阳性;核型分析显示其具有正常的核型;拟胚体和畸胎瘤实验显示其在体外和体内具有向3个胚层分化的能力。结论利用非基因整合方法成功构建了无精症患者的诱导多能干细胞系。
目的:探讨乙肝病毒S蛋白(HBs)与人精子体外共孵育不同时间后人精子胞膜完整性及功能的变化情况。方法:人精子与25μg/m L HBs共孵育0、1、2、3、4 h后,酶标仪检测精子细胞内丙二醛(MDA)含量;Annexin V-FITC/PI双染法检测HBs对精子早期凋亡指标磷脂酰丝氨酸外翻情况,流式细胞术检测精子细胞内活性氧(ROS)、半胱氨酸蛋白酶-3,-8,-9(Caspase-3,-8,-9)活化,TUNEL结合流式细胞术检测精子DNA的损伤。结果:人精子与25μg/m L HBs共孵育后,MDA水平、ROS阳性精子、Annexin V+/PI-精子、Caspase-3,-8,-9阳性精子比率、TUNEL阳性精子比率显著升高,且Annexin V+/PI-精子、Caspase-8,-9阳性精子比率、TUNEL阳性精子比率的升高与HBs呈时间依赖趋势。结论:HBs蛋白与人精子共孵育时间增长可加剧对人精子功能的损伤。
