张亚妮 作品数:100 被引量:172 H指数:7 供职机构: 扬州大学动物科学与技术学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 江苏高校优势学科建设工程资助项目 更多>> 相关领域: 农业科学 文化科学 生物学 医药卫生 更多>>
鸡TBX6过表达和干扰载体构建及干扰载体效率检测 2023年 研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体,为后续研究TXB6在精原干细胞(Sper⁃matogonial stem cells,SSCs)形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和SSCs的表达水平,根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列,设计引物扩增目的片段,将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copG⁃FP-T2A-Puro上,构建TBX6的过表达载体;同时,根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点,在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上,并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系(DF-1),观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示,TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05),测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体;干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白,且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明,TBX6过表达及干扰载体构建成功,且经定量检测后确定shRNA2-TBX6的干扰效果最好。 武嵘峰 陈欣雨 胡菜 耿晴晴 程富富 席一凡 左其生 张亚妮miRNA-31通过靶向Stra8调控鸡SSC减数分裂 Stra8是在哺乳动物生殖细胞中有丝分裂转变为减数分裂时表达的特异性基因,在哺乳动物和鸟类的减数分裂发生中起关键作用.因此,cSSCs(鸡精原干细胞)中Stra8通路的研究可以更深入地了解鸟-类精子发生.miRNA也是S... 王颖洁 左其生 张文慧 何娜娜 孙长花 张亚妮 李碧春关键词:精原干细胞 减数分裂 卵泡刺激素诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究 被引量:4 2014年 文章探讨了卵泡刺激素(FSH)诱导鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先对FSH的适宜诱导浓度进行筛选,再将传至2代的ESCs,在RA和支持细胞诱导的基础上添加适宜浓度的FSH进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。筛选出适宜的FSH浓度为25 ng/mL。单独使用FSH诱导,未出现类SSCs样细胞;FSH与支持细胞诱导至第6天出现类胚体,至第12天,出现少量精原样细胞;FSH联合支持细胞和维甲酸(RA)进行诱导,至第2天出现类胚体,第12天出现类SSC样细胞。实时荧光定量PCR结果显示,FSH+支持细胞组、FSH+支持细胞+RA组中,Stra8、integrinβ1、Dazl表达量都持续上调,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下调趋势。添加FSH的诱导组中Stra8的表达量相对于各对照组上调显著。FSH单独诱导不能引起ESCs向雄性生殖细胞分化,但具有促进支持细胞和RA诱导ESCs向雄性生殖细胞分化的作用效果,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。 蒋一秀 许厚强 左其生 张蕾 李东 施青青 张亚妮 李碧春关键词:鸡胚胎干细胞 雄性生殖细胞 分化 卵泡刺激素 BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究 被引量:7 2013年 旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式,分别采用10、20、30和40ng·mL-1 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞,通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。根据细胞形态变化和差异基因表达量变化,确定了BMP4的适宜诱导浓度为40ng·mL-1。在适宜浓度诱导过程中,诱导4d类胚体开始出现,6~8d类胚体逐渐增大,数量增多,10d部分类胚体开始散开,变为小的圆形细胞,12d在散开后的类胚体周围可观察到少量生殖样细胞,14d生殖样细胞数目增多,且呈聚团生长的趋势。诱导过程中相应基因表达量也发生变化:胚胎干细胞标记基因Nanog、Sox2表达量显著下降(P〈O.01),生殖细胞特异基因Stra8、Dazl、integrina6、c-kit表达量均呈显著上升趋势(P〈O.01)。BMP4可以引起生殖细胞相应基因的表达,促进雄性鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞方向分化,结果为雄性生殖细胞的体外诱导研究提供试验参考,为进一步研究雄性生殖细胞发生和调控机制提供理论基础。 施青青 张振韬 李鹏程 郑蒙蒙 王丹 黄晓梅 张亚妮 李碧春关键词:鸡胚胎干细胞 雄性生殖细胞 分化 BMP4 绵羊高繁殖力候选基因类固醇21-羟化酶(CYP21)的研究 被引量:1 2013年 通过采取PCR-SSCP和限制性内切酶酶切的方法检测类固醇21-羟化酶(steroid 21-hydroxylase,CYP21)基因的10个外显子在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊)、中等繁殖力品种(湖羊)和低繁殖力品种(多赛特羊和特克塞尔羊)间的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果显示,在所设计的10对引物中,仅引物P8扩增的片段存在多态性。对于P8扩增得到的片段,经HinPⅠ1酶切后,可在小尾寒羊、湖羊和多赛特羊中检测到AA和AB型,而在特克塞尔羊中只检测到AA型;经BcnⅠ酶切后,在小尾寒羊、湖羊、多赛特和特克塞尔羊中均检测到CC和CD型。测序结果显示AB型与AA型相比在2340位发生了A→G突变,但并未引起所编码的氨基酸发生改变;CD型与CC型相比在2376位发生了G→A突变,也未引起所编码氨基酸的变化。AB型小尾寒羊产羔数最小二乘均值比AA型的多0.96只(P<0.05),CC型和CD型小尾寒羊产羔数差异不显著(P>0.05)。研究结果初步表明CYP21基因的B等位基因是提高绵羊产羔数的一个候选DNA标记。 杨志敏 查丽莎 储明星 陈宏权 李碧春 张亚妮 狄冉 刘秋月关键词:绵羊 高繁殖力 多态性 鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立 目的:本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培... 赵瑞丰 靳锴 张晨 金晶 王颖洁 左其生 张亚妮 李碧春关键词:鸡胚成纤维细胞 鸡性别分化候选基因功能的研究 引言性别分化一直以来都是遗传学、发育生物学和畜牧学等多领域的研究热点,尤其是动物的性别与某些经济性状有着直接或间接的关系,了解和掌握性别分化机制具有重要的经济意义.目前鸟类关于性别分化方面的研究鲜有报道,禽类的性别分化机... 靳锴 左其生 张亚妮 李碧春关键词:性别分化 基因表达 高通量测序 如皋黄鸡miR-1458与TBX6靶向关系验证 2023年 研究旨在探究miR-1458与TBX6的靶向调控关系。试验基于前期建立视黄酸(Retinoic acid,RA)体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向精原干细胞(SSCs)的分化模型,通过RNA-seq测序结果发现ESCs向SSCs分化过程中差异表达的miR-1458,采用miRNA定量检测miR-1458在ESCs/SSCs中的表达量,miR-1458靶基因富集通路分析筛选出富集通路,分析其与生殖细胞发育的相关性。基于前期联合分析RA诱导ESCs的mRNA-seq数据中|log2(fold change)|>8筛选出的与miR-1458互作的差异性mRNA,依据靶基因预测软件数据库在线预测该基因与miR-1458是否存在结合位点,利用qRT-PCR验证两者的关系,同时利用同源重组法将靶基因的3′UTR及点突变序列插入pMIR-REPORT^(TM)双荧光素酶报告载体中,共转染DF-1细胞,通过双荧光素酶报告载体确定miR-1458与TBX6的靶向调控关系。结果显示:ESCs向SSCs分化过程中差异表达miR-1458,miR-1458在生殖细胞分化过程中发挥重要作用;miR-1458与TBX63′UTR存在结合位点;miR-1458和TBX6分别在ESCs和SSCs中呈现此消彼长的表达趋势;miR-1458能够抑制TBX6的表达;miR-1458可靶向TBX63′UTR区调节TBX6的表达。研究表明miR-1458在鸡的ESCs和SSCs中呈现差异性高表达,并且miR-1458能够直接靶向调控TBX63′UTR区从而调节TBX6的表达,为后续研究miR-1458在SSCs形成过程中的机制探究奠定基础。 耿晴晴 程富富 胡菜 武嵘峰 吴宇慧 赵宗仪 赵梓多 张亚妮关键词:如皋黄鸡 HSD3B2通过甾类激素合成通路调控鸡ESCs 向雄性生殖细胞分化 精原干细胞可以替代胚胎干细胞进行基因治疗和遗传操作而不涉及伦理道德,目前被广泛的应用和研究,但是对精原干细胞形成过程中具体的调控方式却少有研究.
目的:本研究旨在探索甾类激素合成通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的... 张晨 王曼 何娜娜 汪怡临 赵瑞丰 余昕健 金晶 左其生 张亚妮 李碧春关键词:鸡胚胎干细胞 雄性生殖细胞 细胞分化 甾类激素 CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除 被引量:8 2016年 本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目的基因定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP(chr2,Expression In PGC)基因全长,并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3,并构建cas9/gRNA载体;将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1,利用Luciferase SSA重组检测法、T7E1酶切法以及TA克隆测序法检测gRNA在DF-1细胞中基因的敲除效率。Luciferase SSA重组检测结果表明,只有cas9/gRNA3载体具有基因敲除活性,荧光活性比对照组高两倍,T7E1酶切结果显示cas9/gRNA3基因的敲除活性为27%,TA克隆测序结果表明,30个测序菌液中有8个菌液出现不同数目的碱基缺失或增加,初步估计基因敲除效率为26%。通过本研究在家鸡中初步建立了cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在鸡的细胞DF-1上介导基因敲除。 左其生 王颖洁 赵瑞丰 程少泽 汪怡临 靳锴 王飞 纪艳芹 路镇宇 张文慧 张亚妮 李碧春关键词:基因敲除