施静雯
- 作品数：12 被引量：16H指数：3
- 供职机构：广东药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 二甲基阿米洛利对人肺癌细胞增殖及细胞周期相关蛋白的影响
- 2010年
- 目的研究二甲基阿米洛利(dimethyl amiloride,DMA)对人高转移巨细胞肺癌细胞PGCL3增殖的作用及对细胞周期相关蛋白的影响。方法不同浓度的DMA作用于PGCL3细胞,用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DMA对PGCL3细胞周期的影响;Westernblot检测DMA对细胞p21、cyclinA、细胞周期依赖激酶2(cell cycle depend on kinas e2,CDK2)、cyclinB1和细胞分裂周期基因25B(cell divide cycle 25B,Cdc25B)蛋白表达以及CDK2和Cdc25B蛋白活性的影响。结果DMA可抑制PGCL3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。DMA阻滞细胞于G2/M期和S期,上调p21蛋白表达,下调cyclinB1蛋白表达,降低CDK2和Cdc25B蛋白活性,但对cyclinA、CDK2和Cdc25B蛋白表达水平无影响。结论DMA可抑制人肺癌细胞增殖,并改变某些细胞周期相关蛋白的表达和活性,这可能是其抑制肿瘤的机制之一。
- 徐彬施静雯毛建文
- 关键词：肺癌细胞增殖细胞周期
- 中药复骨方对糖皮质激素致骨质疏松骨折大鼠骨代谢及骨密度的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察中药复骨方对糖皮质激素致骨质疏松骨折模型大鼠骨代谢及骨密度的影响。方法将48只SD大鼠随机分为基础组、模型组及治疗组各16只。基础组仅给予肌内注射生理盐水1 mg/kg,模型组和治疗组予肌内注射地塞米松1 mg/kg,1次/d,3次/周,用药8周建立糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)模型。第8周末对3组大鼠手术造成单侧股骨闭合性骨折,骨折处采用金属内固定,复制GIOP骨折模型。术后第2天开始治疗组中药复骨方药液灌胃,持续8周。检测大鼠血清钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)指标,采用双能X线吸收法(DXA)测量大鼠股骨骨密度。结果骨折术前,模型组大鼠骨密度值为(0.219±0.013)g/cm2,基础组骨密度值为(0.283±0.015)g/cm2,模型组骨密度值明显低于基础组(t=12.8970,P<0.05)。实验16周末,治疗组股骨全长骨骨密度为(0.265±0.014)g/cm2,高于模型组(t=9.8403,P<0.05)。实验12周末,治疗组大鼠血清Ca为(2.35±0.19)mmol/L、P为(2.47±0.23)mmol/L、ALP为(196.74±25.38)U/L及BGP为(1.33±0.25)μg/L,与模型组比较均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中药复骨方可显著提高GIOP骨折大鼠股骨骨密度,升高GIOP骨折大鼠血清Ca、P、ALP及BGP活性,促进骨形成,有助于GIOP骨折的愈合。
- 邓伟坤李艳卿李敏研施静雯
- 关键词：骨代谢骨密度糖皮质激素性骨质疏松骨折
- 阿米洛利对高转移肺癌细胞侵袭能力和uPA系统的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:观察阿米洛利对人高转移肺癌细胞PGCL3体外侵袭能力和尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogenactivator,uPA)系统的影响。方法:不同浓度(25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)的阿米洛利作用于PGCL3细胞6h后,用Transwell小室法检测对细胞侵袭能力和运动能力的影响。阿米洛利作用24h后,用发色底物法检测对细胞分泌的uPA和纤溶酶原激活物抑制剂-1(Dlasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)活性的变化。RT-PCR检测阿米洛利对细胞uPA、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)和PAI-1 mRNA表达的影响。Western blot检测阿米洛利对细胞uPA、细胞外调节蛋白激酶2(extracellular regulated proteinkinase 2,ERK2)和ras蛋白表达情况的影响。结果:侵袭实验和运动实验结果均显示,经阿米洛利处理后,穿膜细胞数明显减少,在100μmol/L时,对侵袭和运动的抑制率分别为(37.7±4.1)%和(64.9±4.9)%,与对照组相比具有显著性差异(P<0.01)。同时,细胞分泌的uPA和PAI-1活性降低,当浓度达到100μmol/L时,差异具有统计学意义(P<0.05)。从25μmol/L开始,阿米洛利就可显著抑制PAI-1 mRNA的表达,当达100μmol/L时可明显下调uPAmRNA的表达,但各浓度对uPAR mRNA的表达均无影响。随着阿米洛利浓度的增加,uPA蛋白表达量逐渐减少,但对ras和ERK2蛋白表达量无明显影响。结论:阿米洛利能够抑制高转移肺癌细胞PGCL3的侵袭和运动,其作用机制与抑制uPA和PAI-1的活性和表达有关,有成为抗肿瘤转移药物的潜力。
- 徐彬施静雯毛建文
- 关键词：阿米洛利肺癌尿激酶型纤溶酶原激活物
- 稳定表达ClC-3对宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响及其机制被引量：4
- 2014年
- 目的 :探讨稳定表达电压门控氯通道3(voltage-gated chloride channel 3,ClC-3)的宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的变化及其可能的机制。方法 :通过脂质体介导的方法将重组载体质粒pcDNA3.1/ClC-3转染至HeLa细胞中。pcDNA3.1/ClC-3转染后,蛋白质印迹法检测细胞中ClC-3蛋白和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达水平,实时荧光定量PCR法检测细胞中ClC-3和多药耐药基因1(multi-drug resistance gene 1,MDR1)mRNA的表达水平,MTT法检测顺铂对细胞增殖的影响,免疫荧光法检测细胞中ClC-3蛋白和P-gp的表达及定位。结果 :成功获得稳定表达ClC-3的HeLa/ClC-3细胞。HeLa/ClC-3细胞中ClC-3蛋白和P-gp的表达水平以及MDR1和ClC-3 mRNA的表达水平均明显高于转染空载体pcDNA3.1的HeLa/mock细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。与转染空载体pcDNA3.1的HeLa/mock细胞比较,顺铂对HeLa/ClC-3细胞增殖的抑制作用明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),顺铂对HeLa/ClC-3细胞的半数抑制浓度(half inhititory concentration,IC50)为71μmol/L,明显高于HeLa/mock细胞的32μmol/L(P<0.05)。ClC-3蛋白和P-gp共同定位于HeLa/ClC-3和HeLa/mock细胞的细胞膜。结论 :ClC-3可降低HeLa细胞对顺铂的敏感性,可能与ClC-3上调P-gp的表达水平有关。
- 王施思杨清松施静雯林嘉麟徐彬
- 关键词：宫颈肿瘤P糖蛋白顺铂CLC-3HELA细胞
- 阿米洛利对PGCL3细胞增殖的抑制作用及其机制被引量：3
- 2010年
- 目的:研究阿米洛利对人高转移巨细胞肺癌细胞PGCL3增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法:人肺癌细胞PGCL3经阿米洛利处理后用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测药物对PGCL3细胞周期的影响;Western blot检测药物对细胞的CyclinB1蛋白表达和细胞分裂周期基因25B(cell divide cycle 25B,Cdc25B)蛋白活性的影响。结果:PGCL3细胞经阿米洛利处理后,时间和剂量依赖性抑制细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期,下调CyclinB1蛋白表达,降低Cdc25B蛋白活性。结论:阿米洛利对PGCL3细胞的增殖具有抑制作用,其作用机制与抑制细胞周期相关蛋白的表达和活性有关。
- 徐彬 施静雯 毛建文徐彬施静雯毛建文
- 关键词：肺肿瘤阿米洛利PGCL3增殖
- 复骨方促进糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨折愈合作用的研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨中药复骨方对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠骨折愈合的促进作用。方法将48只SD大鼠随机分为三组,各16只。前8周实验中,基础组仅给予肌内注射生理盐水1 mg/kg,模型组和治疗组肌内注射地塞米松1 mg/kg,1次/d,3次/周,建立GIOP动物模型。第8周末对三组大鼠手术造成单侧股骨闭合性骨折,骨折处采用金属内固定,建立GIOP骨折动物模型。术后第2天开始,基础组和模型组给予蒸馏水10 mL/kg灌胃,治疗组以复骨方药液灌胃给药,持续8周。观察各组股骨骨密度(BMD)变化,影像学观察骨折愈合情况,比较各组骨组织形态计量学参数和生物力学测量结果。结果治疗组股骨全长骨BMD高于模型组,差异有统计学意义(t=11.2532,P<0.05)。模型组大鼠股骨骨小梁面积百分数(TbAr%)、骨小梁数量(TbN)、平均骨小梁厚度(TbTh)均较基础组下降,骨小梁分离度(TbSp)较基础组增高,差异有统计学意义(t=3.5885、7.4488、9.0512、10.0270,P<0.05);治疗组TbAr%、TbN、TbTh均高于模型组,TbSp低于模型组,两组各指标比较差异有统计学意义(t=2.3329、5.3328、5.9512、10.9590,P<0.05)。模型组的最大载荷、最大挠度及最大应力均较基础组降低,差异有统计学意义(t=3.8944、5.3915、4.4739,P<0.05);治疗组的最大载荷、最大挠度及最大应力均高于模型组,差异有统计学意义(t=2.9251、3.7628、6.6926,P<0.05)。结论中药复骨方可提高GIOP骨折大鼠的BMD,改善骨微结构,提高骨生物力学性能。中药复骨方对GIOP骨折的愈合有促进作用。
- 朱冰李敏研刘智华施静雯
- 关键词：骨折愈合骨组织形态计量学生物力学糖皮质激素性骨质疏松
- 慢病毒介导的干扰ClC-3肝癌稳定细胞株的建立及其侵袭和迁移能力的改变被引量：1
- 2015年
- 目的建立慢病毒介导的靶向干扰电压门控氯通道3(voltage-gated chloride channel 3,Cl C-3)的稳定肝癌细胞株,并探讨其侵袭和迁移能力的改变。方法构建靶向Cl C-3的3个短发夹状RNA(short-hairpin RNA,sh RNA)慢病毒表达载体,293FT细胞包装慢病毒并测定滴度。重组慢病毒感染肝癌细胞株MHCC97H,筛选稳定干扰细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测Cl C-3 m RNA和蛋白的表达以确定干扰效率。Transwell小室实验(含Matrigel和不含Matrigel)和细胞划痕实验检测Cl C-3基因被抑制后侵袭和迁移能力的改变。结果成功获得4种慢病毒,感染MHCC97细胞后,建立1株阴性对照细胞和3株Cl C-3稳定干扰细胞(MHCC97H/sh Cl C-3-1、sh Cl C-3-2和sh Cl C-3-3)。3株稳定干扰细胞Cl C-3 m RNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照细胞(P<0.01),MHCC97H/sh Cl C-3-2细胞对Cl C-3的抑制效果最好。与阴性对照细胞相比,MHCC97H/sh Cl C-3-2细胞侵袭和迁移能力都下降(P<0.01)。结论成功建立稳定干扰Cl C-3基因的肝癌细胞株,Cl C-3表达抑制会降低MHCC97H细胞的侵袭和迁移能力。
- 徐彬林嘉麟施静雯王施思余杰
- 关键词：肝癌细胞慢病毒载体RNA干扰
- 耐药肿瘤细胞中ClC-3、P-gp的表达变化及相关性被引量：4
- 2016年
- 目的观察电压门控氯通道3(Cl C-3)、P-糖蛋白(P-gp)在耐药肿瘤细胞中的表达变化,并探讨其相关性。方法提取人肝癌细胞株BEL-7402及其氟尿嘧啶耐药株BEL-7402/FU、人结肠癌细胞株HCT-8及其紫杉醇耐药株HCT-8/T的总RNA和蛋白,用荧光定量PCR法检测细胞Cl C-3和多药耐药基因1(MDR1)mRNA的表达,Western blotting法检测细胞Cl C-3蛋白和P-gp的表达,采用线性相关分析Cl C-3蛋白和P-gp表达的相关性。结果耐药细胞BEL-7402/FU和HCT-8/T中Cl C-3、P-gp的mRNA和蛋白水平都高于相对应的非耐药细胞BEL-7402和HCT-8(P均<0.05),在耐药肿瘤细胞中,Cl C-3蛋白与P-gp表达呈正相关(r=0.98,P<0.05)。结论 Cl C-3、P-gp在耐药肿瘤细胞中呈高表达,二者表达水平呈正相关关系。
- 林嘉麟施静雯刘学强余杰徐彬
- 关键词：肝肿瘤结肠肿瘤P-糖蛋白肿瘤细胞
- 开放性实验在高校生物学实验教学改革中的重要性被引量：1
- 2009年
- 开放性实验教学模式在生物学专业中的展开,打破了一贯呆板的实验教学模式,最大范围地调动了学生的主观能动性,激励了学生创造性思维的培养,锻炼了学生分析、解决问题的能力,是新形势下高校实验教学改革中不可缺少的组成部分。
- 施静雯杨国柱
- 二甲基阿米洛利对高转移性肺癌细胞侵袭能力的影响及其作用机制被引量：1
- 2009年
- 目的:研究二甲基阿米洛利(dimethyl amiloride,DMA)对人高转移性肺癌PGCL3细胞体外侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:肺癌PGCL3细胞经DMA处理后,用Transwell小室法检测其对细胞侵袭和运动能力的影响,发色底物法检测DMA对细胞分泌的尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)和纤溶酶原激活物抑制剂1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)活性的影响,RT-PCR检测DMA对细胞uPA、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uro-kinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)和PAI-1 mRNA表达的影响,Western印迹法检测细胞外调节蛋白激酶2(extra-cellular regulated protein kinases 2,ERK2)和ras蛋白表达的变化。结果:DMA能抑制PGCL3细胞的体外侵袭和运动能力,下调uPA、uPAR和PAI-1的mRNA表达,上调ras蛋白的表达;高浓度时DMA可降低细胞分泌的uPA活性,但对分泌型PAI-1活性和ERK2蛋白表达无影响。结论:DMA能抑制高转移性肺癌PGCL3细胞的侵袭和运动,其作用机制可能与抑制uPA系统的表达有关。
- 徐彬施静雯毛建文
- 关键词：肺肿瘤肿瘤转移肿瘤侵润尿纤溶酶原激活物
