易志刚 作品数:14 被引量:27 H指数:4 供职机构: 复旦大学上海医学院 更多>> 发文基金: 国家科技重大专项 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
基于EV71毒株的感染性cDNA克隆及其应用 本发明属于生物医药领域,提供了稳定的、基于一株临床分离的EV71毒株的感染性cDNA克隆及其含有各类报道基因的衍生克隆、及以其为母本构建的各种突变克隆;以及利用这些克隆产生的各种重组病毒、亚单位病毒颗粒;以及利用这些克隆... 易志刚 宋志刚 张惠英 袁正宏文献传递 病毒SARS-CoV-2的特异性线性优势表位及对应多肽及其制药用途 本发明属于生物医药技术领域,涉及病毒SARS‑CoV‑2的特异性线性优势表位,具体涉及病毒SARS‑CoV‑2的特异性线性优势表位及对应多肽及其制药用途,尤其是在制备包括诊断试剂及疫苗抗原的检测制剂中的用途。本发明公开了... 易志刚 袁正宏安全、便捷技术再生一次性医用口罩的实验研究 被引量:7 2020年 在防控新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)疫情中,为了减少病毒的传播,一次性医用口罩是普通民众必不可缺少的防护品。然而,随着2019-nCoV的蔓延,口罩短缺现象严重。本研究旨在探讨一次性医用外科口罩(口罩)的再生方法,以达到既有个人防护的效果又能节省资源。用流行性感冒病毒(简称流感)模拟2019-nCoV污染口罩,采用常用的恒温烘箱干烤及电吹风机热风处理2种方法,对表面污染有流感病毒的医用口罩进行病毒灭活,洗脱口罩上已灭活处理的病毒,感染Mardin-Darby狗肾细胞(Mardin-Darby canine kidney cell,MDCK细胞),观察细胞病变并定量检测病毒基因组拷贝数以评价病毒灭活效果。同时采用抽滤系统和PM 2.5监测仪对以2种相似热灭活方式处理过的口罩滤过截留PM 2.5的效果进行评价。结果显示电吹风机30 min热风处理后病毒基因组拷贝数降低至原来的1/1000000~1/10000000,接近未感染组,但烘箱56℃30 min干热处理仅灭活部分病毒。2种热灭活方式对口罩的PM 2.5滤过截留效果无显著影响。本研究提供了一个安全、便捷处理一次性医用外科口罩的方法,为个人防护用品口罩表面污染病毒的灭活及其再生利用提供了科学依据。然而,应注意的是在口罩匮乏的非常时期,普通人群可采用该简便技术再生口罩后再次使用,但该方法再生的口罩不适合密切接触患者的人群、医护人员及实验室工作人员使用。 宋武慧 潘滨 阚海东 徐燕意 易志刚关键词:医用口罩 流行性感冒病毒 新型冠状病毒 2015—2016年上海地区成人门诊腹泻病例中诺如病毒GⅡ型流行特征 被引量:5 2020年 目的了解2015—2016年上海地区成人门诊急性腹泻病例中诺如病毒(norovirus,NoV)GⅡ型的基因分型及分子流行病学特征。方法收集上海地区2015年3月至2016年12月912份成人急性腹泻粪便标本,采用一步法定量逆转录PCR方法检测NoV GⅡ型,并扩增开放阅读框1(open reading frame,ORF1)的聚合酶和ORF2衣壳区域进行测序分型。结果2015年3月至2016年12月912份成人急性腹泻粪便标本NoV GⅡ型阳性检出率为17.76%(162/912),其中2015年NoV GⅡ型阳性率为15.08%(65/431),2016年阳性率为20.17%(97/481),阳性标本中针对ORF1的RdRp区域和ORF2区域5′端均分型的标本为145份,共有10种型别,分别为GⅡ.Pe_GⅡ.4 Sydney 2012(60份)、GⅡ.P17_GⅡ.17(45份)、GⅡ.P16_GⅡ.13(10份)、GⅡ.P12_GⅡ.3(10份)、GⅡ.P7_GⅡ.6(9份)、GⅡ.P21_GⅡ.21(5份)、GⅡ.P16_GⅡ.4 Sydney 2012(2份)、GⅡ.Pe_GⅡ.17(2份)、GⅡ.P2_GⅡ.2(1份)、GⅡ.P7_GⅡ.14(1份)。结论上海地区2015年春季主要流行GⅡ.P17_GⅡ.17,2015/2016年冬春季主要流行GⅡ.Pe_GⅡ.4 Sydney 2012和GⅡ.P17_GⅡ.17,而2016年秋季主要以GⅡ.Pe_GⅡ.4 Sydney 2012流行为主。进行持续的NoV暴发监测对于确定基因型分布的变化趋势和新毒株的发现非常重要。 陈海丽 杨春忆 张万菊 刘祎 田棣 王蔚 易志刚 朱召芹关键词:诺如病毒 成人腹泻 基于细菌人工染色体的新冠病毒SARS-CoV-2亚基因组复制子克隆、构建及应用 本发明属于生物医药技术领域,涉及基于细菌人工染色体BAC的新冠病毒SARS‑CoV‑2亚基因组复制子克隆、构建及应用。本发明提供了新冠病毒亚基因组复制子克隆的表达产物,其不含有新冠病毒的结构蛋白S、M或者E,还包括其编码... 易志刚 袁正宏文献传递 质谱在免疫学中的应用及研究进展 2004年 方彩云 刘锋 易志刚 袁正宏 杨芃原关键词:质谱 免疫学 MS 免疫系统 抗原 免疫应答 丙型肝炎病毒高水平复制细胞株的构建及其机制初步研究 2020年 旨在探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)cured细胞株的易感机制。本研究将体外转录的HCV RNA电转入肝癌细胞系Huh 7细胞,建立HCV复制子细胞株,用γ-干扰素(interferon,IFN)处理复制子细胞株,获得HCV cured Huh 7A和Huh 7B细胞株。用插入报告基因的HCV毒株Jc1-G感染上述细胞株,分别进行荧光素酶活性测定、蛋白质印迹法和荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测以验证其易感性。收集Huh 7、Huh 7.5、Huh 7A和Huh 7B细胞并利用IFN-α处理,之后用蛋白质印迹法及荧光定量PCR进行检测,验证细胞株中IFN诱生信号通路中关键因子内源性表达及抗病毒活性ISGs的激活水平。结果显示,在Huh 7A和Huh 7B细胞中检测不到病毒RNA,与Huh 7细胞一致。病毒感染实验中,与Huh 7细胞相比,Huh 7A和Huh 7B细胞株中荧光素酶活性增高百倍,病毒蛋白表达和RNA水平亦显著上调,与Huh 7.5细胞株中的表达水平接近。IFN信号通路实验中,与Huh 7细胞相比,Huh 7A和Huh 7B细胞株中RIG-I/MDA5/MAVS内源性蛋白表达和mRNA水平无明显差异;IFN-α处理细胞后IFN刺激基因isg56,mx1,mx2,oax1,oax2,viperin,cxcl10,ifitm1和ifitm3激活水平亦无显著变化。结果提示,本研究制备的Huh 7A和Huh 7B细胞株可支持HCV高水平复制,将为研究病毒复制机制提供有力的支持。 宋武慧 易志刚关键词:丙型肝炎病毒 Γ-干扰素 Viperin蛋白可通过影响非结构蛋白与脂筏的关联抑制丙型肝炎病毒复制 2009年 目前,对丙型肝炎病毒(HCV)感染患者主要采用以Ⅰ型干扰素为主的治疗方案,但干扰素抑制病毒的具体机制仍然不详。本研究通过实时聚合酶链反应(PCR)检测HCV的RNA水平,蛋白免疫印迹法检测HCV非结构蛋白的表达,以及膜飘浮实验检测非结构蛋白与脂筏的关联性,探讨干扰素诱导蛋白Viperin抑制HCV复制的机制。结果显示,在体外HCV亚基因复制子及感染细胞模型中过量表达Viperin可显著降低细胞内HCV非结构蛋白的表达及RNA的水平。膜漂浮实验发现,过量表达的Viperin可通过干扰HCV非结构蛋白NS3、NS5A与细胞内脂筏膜的关联,使其对非离子去污剂敏感。进一步研究发现,与脂筏膜结构组成相关的法尼基合成酶(FPPS)可通过与Viperin相互作用,部分反转Viperin的抗HCV复制效应。以上结果提出一种新的干扰素抗HCV机制,即干扰素诱导蛋白Viperin可通过影响非结构蛋白与脂筏的关联,干扰HCV复制复合体的稳定性,从而抑制HCV复制。 吴显芳 王珊珊 潘婷婷 易志刚 袁正宏关键词:丙型肝炎病毒 干扰素诱导蛋白 脂筏相关的丙型肝炎病毒基因复制复合体的研究 已知正链RNA病毒基因复制多定位在宿主内的特定膜结构上,由病毒RNA、病毒蛋白与宿主蛋白相互作用并对宿主膜结构进行改造,形成膜相关的病毒基因复制复合体。目前认为HCV的基因复制也采用类似的机制,在Golgi体及内质网膜上... 易志刚关键词:丙型肝炎 脂筏 病毒基因 人类诺如病毒反向遗传体系的构建与验证 被引量:1 2021年 为验证已报道的能复制人类诺如病毒(human norovirus,HuNoV)GⅡ.3 U201感染性克隆的复制能力,进一步在HuNoV临床病毒株中寻找更优序列,构建能高效复制的感染性克隆,本研究合成含有T7启动子和EF-1α启动子的HuNoV GⅡ.3 U201全长序列,构建质粒pU201和pEF-1α-U201及对应的病毒RNA聚合酶失活的突变质粒。在COS 7细胞和Huh 7细胞中分别共转染T7聚合酶与pU201以及单独转染pEF-1α-U201,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测转染后不同时间点细胞内病毒RNA水平。结果显示,与对照组相比,pU201和pEF-1α-U201的病毒RNA水平升高约2倍和3倍。为便于检测HuNoV复制,在pU201和pEF-1α-U201质粒中分别插入NanoLuc TM荧光素酶报告基因,并命名为pU201-Nluc和pEF-1α-U201-Nluc。将质粒分别转染COS 7细胞和Huh 7细胞,检测转染后不同时间点Nluc荧光素酶活性。结果显示,pEF-1α-U201-Nluc的Nluc荧光素酶活性相较于对照组增高近2倍,而pU201-Nluc无明显升高,提示EF-1α启动子起始病毒复制优于T7启动子。为寻找优于HuNoV GⅡ.3 U201的HuNoV序列,合成HuNoV GⅡ.4临床病毒株全长序列,将其插入EF-1α启动子载体中并转染细胞,于不同时间点检测上清及细胞中病毒RNA水平。结果显示,上清及细胞中病毒RNA水平与对照组相比无显著差异。以上结果提示,已报道可复制的HuNoV GⅡ.3 U201反向遗传体系复制效率有限,且HuNoV反向遗传体系复制能力可能与不同序列的病毒相关。 陈水叶 宋武慧 易志刚关键词:T7启动子 感染性克隆