李宝贤
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省“十五”科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 犬干扰素-γ的稀释复性及活力测定被引量：10
- 2008年
- 文章探讨了不同折叠促进剂、加样方式、温度、pH在稀释法复性条件下对重组犬IFN-γ体外折叠的复性影响。结果表明,0.5mol·L-1精氨酸、0.5mol·L-1盐酸胍、2.0mol·L-1尿素均能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,其中精氨酸的效果最好。在4℃、pH8.0、精氨酸浓度0.5mol·L-1,蛋白浓度0.15mg·mL-1及脉冲加样操作方式下,复性后重组犬IFN-γ的活性为1.35×104U·mL-1,比活为3.74×106U·mg-1。
- 陈忠广张桂红夏春丽李宝贤李一经
- 关键词：稀释复性活性包涵体
- Percoll法分离小鼠卵母细胞
- 2006年
- 岳顺利梁洋太平朱赫朱佳伟李宝贤周佳勃
- 关键词：小鼠卵母细胞PERCOLL卵丘细胞透明带分子水平体外受精
- 猪轮状病毒JL94株vp4全基因克隆及原核表达载体构建
- 2005年
- 根据GenBank已发表的猪轮状病毒vp4基因保守序列,设计一对引物扩增猪轮状病毒地方株JL94株vp4全基因;将扩增产物与载体pMD-18T连接进行序列测定并将测序结果同国外分离株进行序列比较。用限制性内切酶BamHI和SalI将vp4基因从pMD-18T-vp4切下;同样用BamHI和SalI双酶切表达载体pGEX-6P-1;将这2个双酶切产物连接并转化,通过酶切鉴定和PCR鉴定证明完成了vp4原核表达载体的构建。测序结果表明:vp4全基因长2362bp,JL94株同国外分离株BEN307株、Gottfried株vp4全基因片段核苷酸同源性分别为93.44%和69.43%;氨基酸同源性分别为96.06%和71.88%。说明JL94株同BEN-307株属同一VP4血清型,而同Gottfried株属于不同血清型。重组原核表达载体pGEX-6P1-vp4的构建为表达VP4蛋白,研制诊断性抗原和病毒重组活载体疫苗奠定了基础。
- 于晓龙宋岩李宝贤李一经
- 关键词：猪轮状病毒VP4基因克隆原核表达载体构建
- 黄牛瘤胃臌气治疗不当致瘤胃穿孔的病例
- 2005年
- 马常熙韩丽辉韩丽群刘金波李宝贤
- 关键词：黄牛瘤胃臌气病例症状剖检变化
- 猪流行性腹泻病毒LJB/03地方株核蛋白基因序列分析及其原核表达被引量：3
- 2007年
- 以猪腹泻粪便样品提取RNA,应用RT-PCR方法扩增获得了PEDV地方株LJB/03核衣壳蛋白(N)全基因序列,测序结果表明:N基因全长1326 bp,编码441个氨基酸,包含405个腺嘌呤(30．5%)、329个鸟嘌呤(24．8%)、294个胞嘧啶(22．2%)和298个胸腺嘧啶(22．5%)。与已发表的序列相比,LJB/03株N基因和其他分离株核苷酸的同源性在95%以上,与JS2004、chinju99、Brl/ 87、CV777同源性分别是97．4%、95．6%、96．6%、96．8%;氨基酸同源性在96．5%以上,与JS2004、chinju99、Br1/87、CV777的同源性分别是98．0%、96．90%、96．1%、96．4%。序列分析表明:N蛋白包含7个潜在的蛋白激酶C磷酸化位点、9个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点和2个依赖cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点。将N基因定向克隆到原核表达载体pGEX- 6p-1,转化宿主菌BL21中,经IPTG诱导后,N基因得以表达。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,确定表达的融合蛋白大小约为75ku,且具有良好的反应原性。
- 葛俊伟姜艳萍李宝贤裴敦国李一经
- 关键词：猪流行性腹泻病毒N基因克隆
- 黄牛咯血病例的治疗被引量：1
- 2005年
- 马常熙韩丽群韩丽辉刘金波李宝贤
- 关键词：病例黄牛呼吸器官
- 现代生物技术防治仔猪病毒性腹泻的研究
- 李一经唐丽杰任晓峰师东方马广鹏葛俊伟李海滨宋岩尹杰超姜骞陈淑红吴凌范京惠边亚娟张炳丽史达李丹丹钟涛夏春丽李宝贤
- 该项目研究建立了猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR快速监测方法；竞争性DOT-ELISA和竞争性ELISA病原检测方法以及猪流行性腹泻病毒RT-PCR快速检测方法；建立了猪传染性胃肠炎DOT-ELISA抗体快速检测方法；建立...
- 关键词：
- 关键词：仔猪病毒性腹泻生物技术
- 猪流行性腹泻病毒功能性受体的鉴定被引量：11
- 2009年
- 为研究猪氨基肽酶(Porcine Aminopeptidase N,pAPN)是否作为猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的细胞感染受体,通过转染技术,使PEDV非容许性细胞MDCK表达pAPN,并用PEDV感染转染细胞。结果发现转染的MDCK细胞可以感染PEDV,并且该病毒可以在转染细胞中连续传代。免疫荧光法鉴定存在病毒抗原。进一步实验证实,抗pAPN血清可以抑制PEDV感染转染的MDCK细胞。这些结果展示转染的MDCK细胞、pAPN表达及PEDV病毒复制之间存在直接联系,证明pAPN是PEDV的细胞感染受体之一。
- 李宝贤马广鹏葛俊伟李一经
- 关键词：受体猪流行性腹泻病毒冠状病毒
- 猪流行性腹泻病毒细胞感染受体的生物学特性鉴定
- 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)可导致仔猪的严重腹泻，尤其在东亚各国传播非常广泛，每年都造成严重的经济损失。PEDV属于Ⅰ群冠状病毒，同属于Ⅰ群冠状病毒的猪流行...
- 李宝贤
- 关键词：猪流行性腹泻病毒冠状病毒生物学鉴定
- 文献传递
