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戊型肝炎病毒IV型衣壳蛋白缺失突变体原核表达与性质: 2014年; 采用PCR技术扩增基因IV型HEV(Hepatitis E Virus,HEV)开放阅读框2(Open Reading Frame 2,ORF2)的缺失突变体(aa384-606),亚克隆到表达载体后,转化到大肠杆菌中进行诱导表达,表达蛋白命名为rP24。SDS-PAGE和免疫印迹实验表明,rP24获得了高效表达,且和单克隆抗体15B2具有强的反应活性。rP24经过包涵体洗涤、溶解复性、离子交换层析和分子筛层析纯化后,免疫印迹实验表明,纯化rP24能与抗HEV ORF2中和单克隆抗体8C11以及HE(Hepatitis E,HE)阳性血清发生很强的免疫反应性,说明rP24上具有构象型中和表位,模拟了HEV衣壳蛋白的空间结构。动态光散色测量结果表明,rP24的平均水化半径为7.48 nm;纯化rP24免疫动物实验表明,rP24具有强的抗原性,小鼠阳转周期短,抗体持续时间长;纯化rP24作为包被抗原检测HE阳性血清和阴性血清,结果显示rP24对HE阳性血清和阴性血清检出率与北京万泰公司的抗HEV-IgG检测试剂盒的检出率一致。这些实验结果说明,具有较好免疫反应性和免疫原性的rP24获得了高效表达,该蛋白模拟了天然病毒衣壳蛋白的中和表位,为进一步研究基因I型和基因IV型HEV感染不同宿主细胞差异的分子机制奠定了基础。; 邱义兰吴俊文邱果李桑李烨刘胜姿刘如石; 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白原核表达免疫反应性免疫原性

HCMV pp65原核表达重组菌株及其构建方法: 本发明公开了一种含有HCMV pp65基因片段的工程菌，其分泌表达的重组pp65蛋白作为抗原具有良好的反应原性，可以用于免疫动物制备相应的抗原诊断单克隆抗体，也为开发ELISA快速诊断抗体试剂盒提供基础；同时重组抗原可作...; 刘如石许凤邱义兰邱果李桑何赛郑姣黄雄军; 文献传递

血清胱抑素C、同型半胱氨酸联合检测对诊断高血压早期肾病的意义被引量：51: 2015年; 目的：探讨血清胱抑素C（CysC）、同型半胱氨酸（Hcy）联合检测在诊断高血压早期肾病的临床价值。方法选取2012年6月至2014年6月该院高血压患者393例，根据患者肾小球滤过率（GFR），将其分为A组单纯性高血压（89例）、B组高血压肾病Ⅰ～Ⅱ期（194例）、C组高血压肾病Ⅲ～Ⅴ期（110例）。选取同期健康体检者为健康对照组（213例），检测血清CysC、Hcy、肌酐（Cr）的含量，并对检测结果进行比较分析。结果血清CysC、Hcy和Cr含量随着高血压肾病患者病情的加重而呈上升趋势，A组CysC、Cr含量与健康对照组相比，差异无统计学意义（P＞0．05），A、B、C组 Hcy含量和B、C组CysC、Cr含量均高于健康对照组（P＜ 0．05）。ROC曲线分析显示，B组CysC、Hcy、Cr的 AUC分别为0．897、0．934、0．983，C组分别为0．995、0．992、1．000。B组的CysC、Hcy、Cr阳性率分别为69．59％、64．43％、4．12％，血清Cr＋ Hcy、Cr＋CysC、Hcy＋CysC、Cr＋ Hcy＋CysC联合检出率分别为65．46％、69．59％、89．18％、90．21％；C组CysC、Hcy、Cr的阳性率分别为98．18％、95．45％、95．45％，血清Cr＋ Hcy、Cr＋CysC、Hcy＋CysC、Cr＋ Hcy＋CysC联合检出率分别为100．00％、98．18％、100．00％、100．00％。结论 CysC、Hcy、Cr均可作为诊断高血压肾病的生物标志物；CysC和 Hcy联合检测高血压肾病Ⅰ～Ⅱ期，具有较高的灵敏度，对诊断早期高血压肾病具有一定的临床意义。; 蒋琰刘如石李原邱义兰邱果李桑谌芳吴意; 关键词：同型半胱氨酸高血压肾病

抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究被引量：1: 2014年; 人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。; 邱果许凤邱义兰廖旻晶李烨刘胜姿李桑刘如石; 关键词：人巨细胞病毒 PP65蛋白杂交瘤细胞单克隆抗体

乡村沼气池污泥微生物多样性的研究被引量：1: 2015年; 为了优化沼气池产气效率和开展污泥微生物多样性研究,通过对PCR-DGGE条件的优化,建立了农村户用沼气池污泥微生物16S r DNA V3区DGGE分析技术,通过DGGE技术分析了沼气池污泥中细菌和古细菌微生物多样性随沼气池深度的变化规律。同时通过构建污泥样品mcr A功能基因克隆文库,应用RFLP技术,开展了农村户用沼气池污泥样品中与次级代谢产物相关基因的功能基因多样性研究。结果显示,农村户用沼气池污泥中含有丰富的微生物资源,其中细菌群落受污泥深度因素影响小,而浅层污泥中古细菌群落与深层污泥中古菌群落却存在明显差异。所采集的沼气池污泥中含有较为丰富的产甲烷菌资源,其中可能存在类似功能或产生类似代谢物质的产甲烷菌。该结果为进一步优化群落结构、筛选功能基因提供了科学依据。; 李桑张琳邱义兰刘胜姿孙一兵颜亨梅郭向荣刘如石; 关键词：农村户用沼气池总DNA提取微生物多样性

抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备方法及其应用: 本发明公开了一种高特异性和高亲和力的抗Pp65单克隆抗体，其由抗Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株8D6所产生，所述细胞株8D6保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：C201476。本发明杂交瘤细胞株分泌的...; 刘如石邱义兰许凤廖旻晶邱果李桑李烨刘胜姿; 文献传递

人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及活性鉴定被引量：3: 2013年; 以病毒全基因组为模板,通过PCR技术扩增HCMV pp65基因编码序列,其产物连接到pMD18-T质粒,酶切并回收目的片段后克隆到表达载体pTO-T7,然后将重组质粒pTO-T7-pp65转化大肠杆菌ER2566,大量表达后将重组蛋白进行质谱法分析鉴定,再利用Western blot以及间接ELISA进行重组蛋白的活性及抗原性鉴定.结果显示:通过SDS-PAGE鉴定可知,大肠杆菌可能表达出了重组蛋白,质谱分析结果说明了重组蛋白为pp65蛋白,具有极高可信度,其相对分子质量约为63 kD,从Western blot和间接ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)的结果可知,pp65蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性与免疫原性,为制备相应的抗原诊断单克隆抗体打下了基础,同时也为开发HCMV IgG快速诊断ELISA试剂盒提供了可选原料.; 许凤邱义兰邱果李桑何赛郑姣李小曼刘如石; 关键词：质谱免疫反应性免疫原性

人胱抑素C的原核表达及活性鉴定: 2016年; 目的建立胱抑素C蛋白(Cys C)原核表达系统,表达、纯化并鉴定重组的人Cys C。方法在不改变氨基酸序列的前提下,对Cys C的编码基因进行大肠杆菌同义密码子偏好性优化后,人工合成其序列,PCR扩增Cys C基因,在原核系统中表达重组人Cys C。纯化表达的Cys C重组蛋白,采用间接ELISA法测定其反应灵敏度及免疫原性。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定可知,重组基因在大肠杆菌中获得了有效表达,相对分子质量约为35×103,Western blot结果进一步说明重组蛋白为Cys C蛋白,间接ELISA结果显示,在包被浓度为0.5mg/L时便产生了阳性值。结论成功建立了Cys C原核表达系统,Cys C蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性与免疫原性,为制备相应的抗原诊断单克隆抗体打下了基础,同时也为开发Cys C快速诊断ELISA试剂盒提供了可选原料。; 李原刘如石蒋琰李桑郑姣何赛吴意; 关键词：酶联免疫吸附试验免疫反应性免疫原性

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李桑

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