李韦杰
- 作品数：7 被引量：47H指数：3
- 供职机构：解放军302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBV基因组A1846T变异对病毒复制力及核心启动子活性的上调作用研究
- [目的]评价乙型肝炎病毒(HBV)基因组核苷酸(nt)A1846T变异对体外病毒复制力及核心启动子(CP)转录活性的影响。[方法]385例研究对象包括116例慢乙肝中度(CHB-M)患者,123例慢乙肝重度(CHB-S)...
- 江玲许智慧刘妍李晓东姚伟明李韦杰戴久增辛绍杰徐东平
- 文献传递
- 不同自然病程中乙肝病毒感染者肝内HBV cccDNA和血清标志物的定量分析
- 【目的】:乙肝病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)是病毒复制的原始模板,在HBV持续感染中起着重要的作用。然而,HBV cccDNA研究的一个主要障碍是需要进行肝活检。本研究旨在探讨慢性HBV感染的自然病程中肝内HBV...
- 李韦杰赵景民姚伟明刘树红邹正升李伯安鲁凤民徐东平辛绍杰
- 文献传递
- 原发性肝细胞癌中HBV DNA整合位点分析被引量：3
- 2011年
- 目的比较乙型肝炎病毒(HBV)基因在原发性肝细胞癌及癌旁组织中的整合规律,探讨其致癌作用机制。方法采用Alu-PCR和LM-PCR方法扩增50例有慢性HBV感染背景的肝癌组织及配对非肿瘤肝组织的HBV整合片段,并对整合位点侧翼的病毒及人基因组DNA序列进行测序,通过NCBIBIAST及UCSCBLAT检索确定HBVDNA在染色体上的精确整合位置。结果 50例肝癌组织中有34例标本检测到HBVDNA的整合,癌组织HBVDNA的整合检出率为68%;配对癌旁组织有35例标本检测到HBVDNA的整合,整合检出率为70%。癌组织中的所有染色体上都检测到HBV整合位点,癌旁组织中除了Y染色体之外,其余染色体也都检测到整合位点。其中14号、15号、18号、19号、Y染色体的HBVDNA整合密度在癌组织中高于癌旁组织。结论癌组织中14号、15号、18号、19号和Y染色体的HBVDNA整合频率高于癌旁组织,整合位点附近有与癌症相关的基因,提示HBVDNA在这些染色体上的整合可能与HBV致癌机制有一定相关性。
- 蒋素贞杨紫伟李韦杰李晓君陈香梅鲁凤民
- 关键词：原发性肝细胞癌乙肝病毒染色体
- HBV基因组A1846T变异对病毒复制力及核心启动子活性的上调作用研究被引量：4
- 2013年
- 目的评价乙肝病毒(HBV)基因组核苷酸(nt)A1846T变异对病毒体外复制力及核心启动子(CP)转录活性的影响。方法 385例研究对象包括116例轻中度慢性乙肝(CHB-M)患者,123例重度慢性乙肝(CHB-S)患者和146例慢加急性肝衰竭(ACLF)患者。从患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV全长基因组,统计A1846T变异的发生率。挑选代表性A1846T变异株HBV全长序列克隆至pGEM-Teasy载体中,并通过定点突变获得野生型对照。BspQⅠ/ScaⅠ双酶切HBV基因组,转染HepG2细胞,检测病毒复制力和HBsAg表达水平;用PCR分别扩增含nt1846变异型和野生型的HBVCP区片段,构建pGL3-CP双荧光素酶真核报告表达载体,转染HepG2细胞,分析检测A1846T变异对荧光素酶表达的影响。结果 HBV A1846T变异发生率随疾病程度加重依次增高,CHB-M、CHB-S和ACLF患者的变异检出率分别为31.03%、42.27%和55.48%(P<0.01)。A1846T变异株的复制力、分泌的HBsAg水平和核心启动子活性较野生株分别提高了320%、28%和85%,常见的CP区A1762T/G1764A双联变异株分别较野生株提高了67%、9%和72%,A1846T变异对提高病毒复制力的影响更强。结论 A1846T变异可显著增加HBV复制力,提高HBsAg表达水平,增强启动子活性,顺式激活下游基因转录表达,提示该变异可能与慢性乙肝重症化发生机制相关。
- 江玲许智慧刘妍李晓东姚伟明李韦杰戴久增辛绍杰徐东平
- 关键词：肝功能衰竭启动区DNA复制
- 阿德福韦酯持续干预对HepG2.2.15细胞经典耐药突变的诱导作用
- 2017年
- 目的观察Hep G2.2.15细胞在不同浓度阿德福韦酯(ADV)持续诱导下发生经典耐药突变的情况,并探讨其产生耐药的机制。方法用不含或含0.01、0.1、1.0μmol/L ADV的培养基于12孔板中培养Hep G2.2.15细胞,每3d传代,共培养至110代,分别抽提细胞和上清中的HBV DNA,每10代取样1次。以不降解质粒的ATP依赖性DNA酶消化+滚环扩增+跨缺口PCR方法和单管巢式PCR方法分别扩增细胞内HBV ccc DNA和上清中HBV DNA的反转录酶(RT)区。以PCR产物直接测序结合克隆测序法(20个克隆/样本)分析细胞内HBV ccc DNA和上清HBV DNA的RT区是否产生经典ADV耐药突变。结果未经药物处理的对照组持续稳定表达HBV DNA。0.01μmol/L ADV组和0.1μmol/L ADV组随着ADV干预时间的延长,细胞内总HBV DNA、ccc DNA及上清中HBV DNA的载量持续下降。0.01μmol/L ADV组细胞内和上清中至110代仍未检测出耐药变异,0.1μmol/L ADV组细胞内和上清中在110代时检测到RT区发生rt A181V+N236T变异。1.0μmol/L ADV组由于细胞生长受到抑制于第15代时停止培养。结论 Hep G2.2.15细胞内存在HBV ccc DNA循环池,用含适量浓度ADV的培养基持续培养可以诱导Hep G2.2.15细胞发生经典耐药突变。
- 李奇李奇李乐李乐蔡少平李韦杰李韦杰刘妍
- 关键词：阿德福韦酯HEP共价闭合环状DNA耐药变异
- 54例慢性乙型肝炎患者肝组织乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA与血清HBsAg定量检测结果分析被引量：35
- 2011年
- 目的检测慢性乙型肝炎患者肝组织HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）和血清HBsAg，分析两种定量指标之间及其与血清HBVDNA载量的相关性。方法应用PSAD消化＋滚环扩增＋跨缺口实时荧光PCR方法，定量检测54例慢性乙型肝炎患者甲醛固定石蜡包埋肝组织HBVcccDNA水平；用化学发光试剂定量检测患者血清HBsAg。用Pearson检验及直线回归分析方法对数据进行分析。结果患者肝组织HBVcccDNA与血清HBsAg定量水平之间呈正相关（r=0．459，P〈0．01），但与血清HBVDNA载量相关性无统计学意义；血清HBsAg定量水平与血清HBVDNA载量呈正相关（r=0．328，P〈0．05），与病毒复制效率呈负相关（r=－0．373，P〈0．05）。结论慢性乙型肝炎患者肝组织HBVcccDNA载量与血清HBsAg定量水平相关，结合血清HBVDNA定量检测，可以更全面的反映HBV的复制水平，评价抗病毒疗效。
- 李韦杰李伯安赵景民韩佳琪刘妍江玲毛远丽鲁凤民徐东平
- 关键词：肝炎病毒共价闭合环状DNA肝炎抗原乙型
- 血清病毒检出核苷(酸)类似物耐药突变的慢性乙肝患者PBMCs中HBV cccDNA基因突变特点分析被引量：6
- 2012年
- 目的分析经核苷(酸)类似物治疗并已在血清病毒中产生耐药基因突变的慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMCs)中HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)反转录酶(RT)区的基因突变特点。方法收集2010年7月-2011年8月于解放军302医院住院的慢性乙肝患者30例,均经6个月以上的核苷(酸)类似物抗病毒治疗并已在血清中检测到耐药相关突变。采集与血清检测同一时间点的全血标本30份并分离PBMCs,提取总DNA,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化+滚环扩增+跨缺口PCR方法扩增HBV cccDNA的RT区,分析9个位点的核苷(酸)类似物耐药相关变异。结果 30份样本中,16例检出HBV cccDNA,检出率为53.3%,PBMCs中HBV cccDNA检出率与HBeAg阳性率、血清ALT水平及血清HBVDNA载量均无显著相关性。在16例HBV cccDNA检出者中,B基因型5例,占31.3%,C基因型11例,占68.8%,与血清HBV基因分型结果一致。但是,与血清HBV均检出耐药突变株不同,16例PBMCs cccDNA中检出的病毒均是无核苷(酸)类似物耐药相关突变的野生株。结论在经核苷(酸)类似物治疗的慢性乙肝患者血清中HBV DNA产生耐药突变的情况下,PBMCs中HBV cccDNA仍以原始野生株为优势种群,推测PBMCs可能是体内HBV野生株的"存储库"。
- 李忠斌任晓强刘妍许智慧李韦杰戴久增李乐邵清陈国凤徐东平
- 关键词：突变
