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新穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白的跨膜效率及其对细胞存活的影响被引量：1: 2008年; 目的研究穿膜融合蛋白His-T1-绿色荧光蛋白（GFP）的跨膜效率及其对细胞存活的影响。方法以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与人鼻咽癌CNE2或大鼠肾小管上皮NRK52E细胞孵育6h，应用荧光显微镜观察His-T1-GFP跨膜进入细胞的情况。应用多功能酶标仪检测细胞荧光强度，研究His-T1-GFP跨膜的动力学因素：以浓度为500mg·L-1的His-T1-GFP与CNE2或NRK52E细胞孵育10min至24h，观察孵育时间对穿膜作用的影响；以浓度为25mg·L^-1至1．0g·L^-1的His-T1-GFP与两种细胞孵育6h，观察蛋白浓度对跨膜效率的影响；以浓度为500mg·L^-1的His-T1-GFP与两种细胞分别在4℃和37℃的条件下孵育6h，观察温度对蛋白跨膜效率的影响。用细胞乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒和MTr法来评价5．0g·L^-1浓度的His-T1-GFP对细胞存活的影响。结果在一定浓度范围内，His-T1-GFP能够有效穿透CNE2和NRK52E细胞膜，且对NRK52E细胞的跨膜效率明显高于His-TAT-GFP。His-T1-GFP在10min内就能有效跨膜进入细胞，并且在6h内进入细胞的量与时间成正相关。在一定浓度范围（25mg·L^-1-1．0g·L^-1）内，该蛋白进入细胞的量与自身浓度成正相关，而在4℃时该蛋白仍具有跨膜能力。当其终浓度高达5．0g·L^-1时，对CNE2和NRK52E两种细胞几乎无毒性作用。结论His-T1-GFP蛋白是一种跨膜效率高且低毒的穿膜融合蛋白。; 王怡林海环杨静姜丽娟李校堃; 关键词：穿膜肽融合蛋白细胞膜通透性细胞毒性

新穿膜肽蛋白His-T1-GFP的跨膜效率和细胞毒性研究: 目的研究新穿膜肽蛋白 His-T1-GFP 对不同细胞的跨膜效率和细胞毒性．方法用荧光显微镜来观察 His-T1-CFP 和 His-Tat-GFP 跨膜进入不同细胞的情况;使用酶标仪检测细胞荧光强度,研究其跨膜的动力学...; 王怡肖健林海环杨静李校堃; 关键词：穿膜肽细胞毒性; 文献传递

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林海环

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