查园园
- 作品数：12 被引量：44H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小同功型人硒蛋白P的诱导凋亡活性被引量：3
- 2004年
- 目的 研究小同功型人硒蛋白P(HSelP)的作用。方法 克隆HSelP小同功型基因 ,将位于N端 4 0位的硒半胱氨酸 (SeCys)突变为半胱氨酸 ,测序确定后 ,在感受态大肠杆菌BL2 1中大量表达 ,表达产物HSelP2 80m用阴离子交换层析纯化 ,Westernblot方法鉴定。提取小鼠肝细胞线粒体 ,通过荧光光谱仪检测线粒体悬液 90°光散射强度和罗丹明 12 3荧光光度变化 ,确定不同浓度HSelP2 80m引起的线粒体膜透过性转运孔 (PTP)开放程度和线粒体跨膜电位的变化。结果 成功地将HSelP小同功型中SeCys点突变为半胱氨酸 ,在原核表达系统中获得大量表达。表达产物纯化后纯度达 90 %以上。HSelP2 80m可促进线粒体PTP开放 ,跨膜电位下降 ,且有剂量依赖关系 ,可被PTP的特异抑制剂所抑制。此作用在去除N端 4 0个氨基酸后丧失。结论 HSelP2 80m有促进线粒体PTP开放的作用 ,为进一步研究HSelP的结构和功能提供了线索。
- 房青伊瑶郑艳华陈佺宁力查园园毕胜利杨建国林晨
- 关键词：凋亡活性氨基酸
- 兔抗人硒蛋白P抗体的制备与鉴定被引量：10
- 2004年
- 目的 :以原核表达的人硒蛋白P片段 (HSelP)制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法 :在E .coli中诱导表达HSelP片段 ,经DEAEfastflow和Ni NTA Agarose柱层析纯化后 ,以其为免疫原制备兔抗HSelP抗体 ,并以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果 :成功地表达并纯化了HSelP ,制备的兔抗HSelP抗体可有效地检测天然的SelP。结论 :以原核表达并纯化的HSelP为免疫原 ,成功地制备了兔抗该蛋白的抗体 ,Westernblot鉴定特异性良好。为进一步研究硒蛋白P的功能。
- 房青张明程查园园毕胜利李志伟杨建国小祝修林晨
- 关键词：多克隆抗体
- 基因枪介导的neu基因DNA疫苗抗肿瘤作用的实验研究被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨DNA疫苗pWRG neu的皮内免疫 ,对高表达neu基因的小鼠移植瘤生长和转移的抑制作用。方法 向小鼠黑色素瘤B16F10细胞系转染pcDNA neu ,用有限稀释法筛选一株高表达neu基因的细胞株B16F10 neu。在基因枪介导下 ,向C5 7BL/ 6小鼠导入DNA疫苗pWRG neu ,通过观察免疫动物的生存期 ,评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。分离免疫动物脾细胞 ,经自体淋巴细胞混合培养实验 ,分析DNA疫苗体内免疫后机体的CTL应答。结果 筛选到一株高表达neu基因的B16F10 neu细胞株 ,转基因过程和外源基因的表达没有改变细胞系的增殖特性。用基因枪轰击 ,进行DNA疫苗pWRG neu皮内免疫 ,对小鼠黑色素瘤B16F10 neu进行预防、治疗和抗转移的实验研究 ,结果表明 ,DNA疫苗的免疫能够明显推迟移植瘤的生长 ,延长小鼠生存期 ,获得明显的抗肿瘤效果。DNA疫苗免疫后可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性。结论 基因枪介导的DNA疫苗pWRG neu经皮内免疫 ,能够有效的诱导机体的细胞免疫应答 ,预防和治疗小鼠移植瘤的发生 ,并有一定的预防肿瘤肺转移的作用。
- 查园园林晨张叔人梁肖张雪艳付明张自强吴旻
- 关键词：NEU基因DNA疫苗基因枪抗肿瘤作用
- 基因枪注射GM-CSF基因部位接种肿瘤抗原治疗肿瘤的实验研究
- 目的:GM-CSF具有刺激树突状细胞分化成熟、诱导粒细胞和巨噬细胞系增殖分化以及调节免疫应答的作用。为了进一步探讨高效方便的肿瘤免疫治疗新方法,我们用基因枪将含小鼠GM-CSF基因的载体注射于小鼠局部皮肤,于注射部位接种...
- 高全立林晨张叔人马文波张书岭查园园梁萧张友会
- 文献传递
- 人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系的建立及其特性被引量：8
- 2004年
- 背景与目的:临床前和临床研究显示吉西他滨对实体瘤有较好的疗效,尽管已有卵巢癌和红白血病吉西他滨耐药细胞系的报道,但肺癌吉西他滨耐药细胞系尚未见报道。我们建立了人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系,并对其细胞生物学特性进行研究。方法:逐步增加培养基中吉西他滨的浓度,建立了对吉西他滨耐药的人肺腺癌细胞系A549-Gem。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,计算出A549和A549-Gem的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI)。比较A549和A549-Gem的生长曲线,并计算出两细胞系的倍增时间。采用MTT法检测A549-Gem对几种常用抗肿瘤药物的交叉耐药谱。结果:吉西他滨对A549和A549-Gem的IC50分别为(6.56±1.19)μmol/L和(921.09±225.27)μmol/L,RI为140.52(P=0.0195)。集落形成实验的RI为132.95。根据生长曲线计算出A549和A549-Gem的倍增时间为29.7h和36.4h。交叉耐药实验表明,A549-Gem对长春新碱(VCR)和足叶乙甙(VP-16)的RI分别为54.38和6.18(P<0.01),对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、阿糖胞苷(Ara-C)和紫杉醇(Taxol)无交叉耐药。结论:成功建立了人肺腺癌吉西他滨耐药细胞系A549-Gem,耐药性能明显、稳定,非常适合用于肺癌中吉西他滨耐药的研究。A549-Gem对VCR、VP-16产生交叉耐药,对ADM、DDP。
- 董梅林晨冯奉仪张雪燕付明梁萧逯海燕查园园吴旻
- 关键词：吉西他滨肺腺癌耐药
- 一种新的基因转移技术——基因枪被引量：5
- 1999年
- 本文综述了基因枪的研究现状，较详细地描述了这一技术的发展、优点、在肿瘤基因治疗中的应用及其引起机体反应的可能机制。
- 查园园
- 关键词：基因枪基因治疗
- 基因枪在肿瘤基因治疗中的应用价值被引量：12
- 2000年
- 目的 研究基因枪经小鼠皮肤转移基因的效率、被转基因的表达量、表达时间 ,以及对小鼠肿瘤的治疗效果 ,探讨作为一种新的基因转移工具 ,基因枪在基因治疗中应用的可能性。方法 (1)用荧光显微镜观察基因枪对体外培养细胞系的基因转导效率和被转基因表达时间 ;(2 )通过基因枪向小鼠皮肤转Lac Z基因后 ,取转基因部位的皮肤做冰冻切片进行 β gal染色 ,观察转基因蛋白在皮肤中表达的部位 ;(3)用ELISA法检测向小鼠皮肤转mGM CSF基因后 ,血清中的转基因蛋白表达量 ,并取转基因部位的皮肤做病理切片 ,通过观察局部病理改变 ,推测转基因蛋白在局部的表达情况 ;(4 )用基因枪向小鼠腹部皮肤转mGM CSF 10d后 ,用肿瘤细胞攻击 ,观察肿瘤生长情况 ;(5 )在小鼠右腋下接种肿瘤细胞 ,1周后进行转基因或注射瘤苗治疗 ,观察肿瘤生长情况。结果 (1)基因枪能有效地对体外培养的各种肿瘤细胞系转基因 ,转导基因的效率是 16 .5 %± 9.0 % ,被转基因可获得较长时间的瞬时表达 ;(2 )小鼠皮肤冰冻切片染色结果显示 ,基因枪可有效地将外源基因导入到皮肤表皮 4～ 5层 ;(3)ELISA结果显示 ,经皮肤转基因后 ,血清中GM CSF蛋白水平显著升高 ,最高可达对照组的12 .5倍。小鼠皮肤病理切片可见到炎性浸润 。
- 查园园林晨梁萧付明张雪艳吴旻
- 关键词：肿瘤基因治疗基因枪
- 重组腺相关病毒介导人内皮抑素抑瘤作用的实验研究被引量：3
- 2002年
- 背景与目的:研究表明,内皮抑素能抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移,然而有关内皮抑素治疗的研究报道却很少。本研究初步探讨了重组腺相关病毒介导内皮抑素对肿瘤生长和转移的作用。方法:用RT-PCR方法获得人内皮抑素基因,构建内皮抑素可分泌表达的通用型重组腺相关病毒(rAAV)载体,包装获得重组腺相关病毒rAAV-SS-Endostatin。以动物实验分析其抗肿瘤作用。结果:C57BL/6小鼠肌肉注射1011TUrAAC-SS-Endostatin一次,该重组病毒对小鼠黑色素瘤B16F10移植瘤生长的抑制率为57.1%,在实验肺转移模型中,对转移灶的抑制率为70.7%。结论:重组腺相关病毒介导的内皮抑素能有效抑制肿瘤的生长和转移。
- 路国秋查园园吴小兵杨建国张雪艳付明梁肖吴旻林晨
- 关键词：重组腺相关病毒内皮抑素基因治疗
- 重组腺病毒载体介导的基因治疗及其与放射治疗联合应用对子宫颈癌HeLa细胞的作用被引量：2
- 2002年
- 目的 观察重组腺病毒载体 (Ad)介导的野生型p5 3基因 (Ad p5 3)单独及与放射治疗(放疗 )联合应用 (联用 )对宫颈癌HeLa细胞的体内、外作用效果。方法 将Ad p5 3单独或与放疗联用 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术证实转染的成功性 ;通过细胞生长和存活的抑制实验、流式细胞仪分析、梯状DNA(DNAladder)实验 ,以及裸鼠皮下移植瘤的治疗实验 ,观察Ad p5 3对宫颈癌HeLa细胞的体内、外作用及可能作用机制。结果 RT PCR技术检测结果显示 ,加入Ad p5 3后 ,p5 3mRNA表达明显增加。在体外实验中 ,Ad p5 3对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制率为 6 1 8% ,单独放疗的抑制率为 4 4 6 % ,而Ad p5 3与放疗联用的抑制率为 85 5 % ,后者分别与前两者比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。在体内实验中 ,单独Ad p5 3与放疗对HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为5 4 8%和 5 8 4 % ,而Ad p5 3与放疗联用的抑瘤率达到 77 4 % ,后者分别与前两者比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。结论 Ad p5 3在体内、外对宫颈癌HeLa细胞生长均有明显的抑制作用 ,而将其与放疗联用则抑制作用更明显。作用机理可能与Ad p5 3诱导细胞凋亡和引起细胞G2
- 孔为民孙建衡林晨查园园路国秋付明张雪燕
- 关键词：重组腺病毒载体HELA细胞AD-P53
- 基因枪注射GM-CSF基因同时局部注射肿瘤提取物治疗肿瘤的初步观察
- 2001年
- 高全立林晨张叔人马文波张书岭查园园梁萧张友会
- 关键词：肿瘤免疫疗法GM-CSF基因
