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沈关望

作品数：16 被引量：12H指数：2
供职机构：西南大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 11篇期刊文章
  • 3篇专利
  • 1篇学位论文
  • 1篇会议论文

领域

  • 9篇生物学
  • 5篇农业科学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 13篇家蚕
  • 5篇卵黄
  • 5篇卵黄原蛋白
  • 5篇激素
  • 3篇蛋白
  • 3篇受体
  • 3篇启动子
  • 3篇化蛹
  • 3篇基因
  • 3篇雌激素
  • 2篇蛋白分泌
  • 2篇营养
  • 2篇营养分配
  • 2篇原核表达
  • 2篇脂肪体
  • 2篇质粒
  • 2篇受体调控
  • 2篇吐丝
  • 2篇吐丝期
  • 2篇蜕皮激素

机构

  • 16篇西南大学
  • 1篇四川省农业科...

作者

  • 16篇沈关望
  • 15篇林英
  • 13篇夏庆友
  • 7篇刘红玲
  • 5篇张海燕
  • 5篇杨从文
  • 5篇吴金鑫
  • 4篇邢润苗
  • 4篇彭芷昕
  • 3篇陈恩祥
  • 3篇张海燕
  • 3篇罗娟
  • 2篇王勇
  • 2篇王勇
  • 1篇侯勇
  • 1篇吕毅华
  • 1篇谢建昌

传媒

  • 5篇昆虫学报
  • 3篇蚕业科学
  • 1篇中国农业科学
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇生物工程学报

年份

  • 2篇2020
  • 1篇2019
  • 2篇2018
  • 2篇2017
  • 1篇2016
  • 2篇2015
  • 5篇2014
  • 1篇2013
共 16 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
脊椎动物雌激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控及其与蜕皮激素受体相互作用的MST分析被引量：1
2017年
【目的】雌激素雌二醇(E_2)在脊椎动物中通过雌激素受体(ER)调节脊椎动物的生长发育和繁殖。昆虫中并没有ER,但有研究显示某些昆虫能对E_2产生一定的应答。本研究在明确E_2能影响家蚕Bombyx mori卵黄原蛋白基因(BmVg)表达的前提下,分析其对这一基因表达的调控机制。【方法】取BmVg高量表达时的家蚕雌性幼虫(上蔟后60 h)脂肪体,用不同浓度(0.001,0.05,0.5,5和50 nmol/L)E_2处理后,通过qRT-PCR检测BmVg表达的变化,分析家蚕对E_2的应答;克隆家蚕蜕皮激素受体基因(BmEcRB1),构建原核表达载体,表达并纯化BmEcRB1蛋白后与E_2体外孵育,通过微量热泳动仪(MST)分析E_2与BmEcRB1的结合情况。【结果】不同浓度E_2均显著抑制离体培养的雌蚕脂肪体中BmVg基因的表达。MST实验证实,E_2与BmEcRB1具有一定的亲和力,解离常数(Kd)为77.8±22μmol/L。【结论】结果说明,E_2对BmVg表达的影响是通过与蜕皮激素(20E)竞争性结合BmEcRB1实现的。
王勇王勇吴金鑫吴金鑫沈关望林英
关键词：家蚕蜕皮激素卵黄原蛋白
适用于家蚕细胞双荧光素酶报告基因系统的内参质粒及其制备方法和应用
本发明涉及一种适用于家蚕细胞双荧光素酶报告基因系统的内参质粒及其制备方法和应用，内参质粒含有适用于家蚕细胞双荧光素酶报告基因系统的组成型启动子BmVgP78M，该启动子由BmVg基因启动子突变激素元件而得，构建为内参质粒...
夏庆友刘红玲林英沈关望
文献传递
一种降低吐丝期活性20E浓度改变丝蛹营养分配比例增加蚕茧产量的系统及应用和方法
本发明涉及一种降低吐丝期活性20E浓度改变丝蛹营养分配比例增加蚕茧产量的系统及应用和方法，通过Gal4/UAS双元系统在末龄家蚕中表达外源蛋白EGT延长家蚕吐丝期增加蚕丝产量，该系统中GAL4基因由BmLP3启动表达，U...
夏庆友沈关望林英
雌激素及相关受体调控家蚕卵黄原蛋白表达的机制
沈关望林英吴金鑫王勇刘红玲张海燕韩超珊张艳嫡徐银莹夏庆友
家蚕非滞育红卵突变体Re-nd的遗传分析被引量：1
2020年
【目的】家蚕Bombyx mori非滞育红卵突变体Re-nd是家蚕品种C108经化学诱变剂N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)诱导产生的新型卵色突变体,属于浆液膜突变。本研究旨在通过传统的遗传学方法分析其突变表型产生的机理,为进一步对Re-nd突变基因的克隆和功能研究及应用奠定基础。【方法】非滞育家蚕突变体Re-nd与野生型滞育的二化品种大造(Dazao)和非滞育的多化品种N4杂交、同胞交配及回交,然后进行遗传分析;同时,Re-nd与已知滞育白卵突变体w-2、桃红眼白卵突变体pe及红卵突变体re杂交、同胞交配及回交,然后进行遗传分析。【结果】结果显示,Re-nd分别与大造和N4杂交F 1代的非滞育卵都为淡红色;同胞交配的F 2代非滞育卵色为红色、淡红色和淡黄色,其红卵(包括淡红色卵)与淡黄色卵的数量比基本符合3∶1;回交B 1代非滞育卵为红色和淡黄色,其数量比基本符合1∶1。Re-nd与w-2和pe杂交的F 1代均表现为淡褐色滞育卵色;与w-2杂交产生的F 2代滞育卵色表型有正常深褐色、淡褐色、黄色以及淡黄偏微红色,非滞育卵表型有红色、淡黄偏微红色、橙黄色以及淡黄色;与pe杂交产生的F 2代卵都是滞育卵,其卵色表型有正常深褐色、淡褐色、淡黄偏微红色以及红色;与re杂交F 1代均表现为淡褐色滞育卵色,F 2代都为滞育卵,其卵色表型有正常深褐色、淡褐色以及红色,re亲本滞育卵的颜色为红色,F 2代卵中并没有分离出新的卵色。【结论】通过杂交和遗传分析,证实了Re-nd突变体为独立的显性遗传,Re-nd突变基因位于w-2及pe突变基因的下游,可能参与了不同于野生型卵色素代谢分支,即卵中眼色素生物合成后期3-羟基-犬尿氨酸进一步代谢合成奥敏类(ommatins)色素的过程。
张宇靖张海燕沈关望沈关望吴金鑫毛雪芹焦梦瑶林英
关键词：家蚕眼色素
一种降低吐丝期活性20E浓度改变丝蛹营养分配比例增加蚕茧产量的系统及应用和方法
本发明涉及一种降低吐丝期活性20E浓度改变丝蛹营养分配比例增加蚕茧产量的系统及应用和方法，通过Gal4/UAS双元系统在末龄家蚕中表达外源蛋白EGT延长家蚕吐丝期增加蚕丝产量，该系统中GAL4基因由BmLP3启动表达，U...
夏庆友沈关望林英
文献传递
一种适于家蚕细胞激素研究的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒的构建(英文)被引量：3
2018年
双荧光素酶报告基因系统能够提供灵敏的读数,但该系统需要依赖组成型表达的内参对读数进行归一化。然而,大多数内参并不是在所有条件下都组成型表达。为此,文中建立了一个有效的方法制备适于家蚕细胞双荧光素酶报告基因系统的内参质粒。首先,突变BmV gP78启动子上的激素应答相关元件,获得了在家蚕细胞中稳定表达的组成型启动子BmV gP78M;然后,用BmV gP78M替换pRL-SV40质粒上的SV40启动子和嵌合内含子序列,成功构建了pRL-V gP78M内参质粒;最后,通过细胞转染实验证实pRL-V gP78M内参在家蚕细胞系中稳定表达,并且pRL-V gP78M内参的表达活性不受蜕皮激素、保幼激素及激素相关转录因子的影响。最终,获得了在家蚕细胞中稳定表达且表达量适中的内参质粒pRL-V gP78M。该内参可以有效地作为双荧光素酶报告基因系统的内参质粒用于家蚕细胞系中激素的研究。同时,该内参质粒的构建方法也为构建适于其他物种细胞系的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒提供了参考。
刘红玲林英沈关望沈关望张海燕吴金鑫张海燕吴金鑫夏庆友
关键词：家蚕激素
家蚕卵黄原蛋白受体BmVgR的体外表达被引量：1
2014年
【目的】克隆家蚕卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor,VgR),分析其在昆虫细胞中的表达特征,了解正常VgR和突变VgR的表达模式,为阐明其生物学功能提供参考依据。【方法】基于家蚕VgR的基因编码序列设计特异引物,扩增的目的片段连接到载体pET28a上,构建原核表达载体,转化E.coil BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导获得目的蛋白;用镍柱亲和层析方法纯化诱导表达的家蚕VgR肽蛋白;将纯化后的肽蛋白制备BmVgR的兔源多克隆抗体;PCR扩增获得大造和突变型白妙卵(scanty vitellin,vit)的LBD1+EGF1结构域(C11D和C11V)片段,连接到细胞表达载体上,通过细胞转染表达目的蛋白,采用细胞免疫组化检测大造和突变型vit的VgR在细胞里的表达情况;通过Western blot检测细胞培养液中大造和突变型vit VgR的表达量。【结果】原核表达获得了一个大小约为22 kD的融合蛋白,以包涵体形式表达;镍柱亲和层析初纯化得到BmVgR的肽蛋白,进一步切胶纯化后,以此为抗原制备BmVgR的兔源多克隆抗体,其抗体效价>1﹕512 000,纯度为95%以上。转录水平检测表明Sf9和Spli221昆虫细胞中没有BmVgR和BmVg内源基因的表达;在Sf9昆虫细胞中成功表达了家蚕野生型和突变型vit BmVgR的结构域SP+LBD1+EGF1肽段,家蚕突变型vit在BmVgR第1个表皮生长因子同源区域的第3个ClassB区域有编码50个氨基酸残基的核酸序列缺失;细胞免疫组化试验表明,突变型和正常型的C11V和C11D都能在Sf9细胞质中正常表达;制备的BmVgR兔源多克隆抗体和Myc标签抗体同时检测到细胞表达的目的蛋白,表明试验所制备的VgR抗体特异性较好;由于SP+LBD1+EGF1肽段存在信号肽,细胞表达的蛋白会分泌进入细胞培养液中,Western blot对培养液进行蛋白检测,表明突变型vit存在氨基酸缺失,但并不影响肽蛋白的正常表达,且表达量没有明显差异。【结论】EGF1结构域的缺失并不影响SP+LBD1+EGF1肽蛋白的
罗娟陈恩祥刘红玲彭芷昕杨从文沈关望张海燕邢润苗林英夏庆友
关键词：家蚕原核表达细胞表达
用于细胞水平家蚕转录调控元件研究的简单基础启动子的构建
2019年
【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的能在家蚕细胞中稳定表达且基本不含上游转录调控元件的BmVgP78M启动子的基础上,通过PCR技术在其上游添加一定长度的间隔序列和能够应答20-羟基蜕皮激素(20E)且增强启动子活性的BrC-Z2转录因子结合基序(BrC-Z2 element, BrC-Z2E);通过基因克隆技术构建细胞转染载体;通过细胞转染技术和双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性的变化。【结果】通过在BmVgP78M启动子上游添加28 bp间隔序列,成功构建了一个简单基础启动子,命名为VgP78ML,并证明其为可用于研究目标转录调控元件的简单基础启动子。经实验验证表明,该简单基础启动子不仅可以在家蚕细胞中稳定表达,且其本身活性不受20E及转录因子BrC-Z2的影响;当该启动子上游连接BrC-Z2E时,可以显著地应答20E及BrC-Z2转录因子,从而调控报告基因的表达。【结论】VgP78ML能够作为简单基础启动子应用于细胞水平对家蚕基因转录调控进行研究。同时,其构建方法也为其他物种构建研究转录调控的简单基础启动子提供了参考。
顾健健刘红玲李凯荣孟紫旺王慧娟沈关望沈关望阮杨林英夏庆友
关键词：家蚕细胞转录调控
蜕皮激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控被引量：2
2014年
蜕皮激素(20-hydroxy ecdysone,20E)是由前胸腺分泌的能调节节肢动物昆虫纲、甲壳纲等动物蜕皮的激素.家蚕属于完全变态昆虫,一生经历卵、幼虫、蛹、成虫四个发育时期.20E在家蚕发育过程中有不可替代的作用.本研究通过酶联免疫吸附反应(ELISA)测定家蚕变态期前后血淋巴中20E滴度,发现在卵黄原蛋白基因(Bombyx mori vitellogenin,BmVg)高量表达前的雌雄血淋巴中20E含量没有明显差异,但含量变化趋势与BmVg表达趋势相一致.用20E注射上蔟后60 h的家蚕和添食5龄家蚕,能诱导雌性和雄性脂肪体中BmVg表达和蛋白合成.调查处理后的家蚕所产卵中的卵黄磷蛋白(BmVn)含量及重量,发现蚕卵中BmVn含量及蚕卵重量都明显增加;本研究还通过脂肪体体外培养,证明了20E是直接作用于脂肪体来诱导BmVg的表达.本研究结果表明,20E是通过诱导脂肪体中BmVg的转录来增加蚕卵中BmVn积累,从而最终使得蚕卵重量也相应增加.
沈关望林英吕毅华王继岩邢润苗夏庆友
关键词：蜕皮激素卵黄原蛋白家蚕基因表达
全选 清除 导出
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