王佳林
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导DLC-1基因转染SW480细胞系的β-catenin表达水平变化及意义被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨慢病毒介导肝癌缺失基因-1(Deleted in liver cancer-1,DLC-1)转染结肠癌SW480细胞系对β-catenin表达水平的影响及意义。方法:用携带DLC-1基因的重组慢病毒转染结肠癌SW480细胞系;采用Real-time PCR及Western blot法检测SW480细胞系中DLC-1及β-catenin的表达水平,MTT法检测SW480细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Transwell小室法检测SW480细胞迁移和侵袭能力。结果:DLC-1重组慢病毒转染SW480细胞系中,过表达的DLC-1下调β-catenin表达水平,抑制SW480细胞的增殖、迁移及侵袭,并诱导其凋亡。结论:DLC-1基因可能通过下调β-catenin的表达来调节结肠癌SW480细胞系的增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为,DLC-1在结肠癌的发生、发展中可能发挥了十分重要的作用。
- 王春毅王佳林刘洪傅仲学
- 关键词：DLC-1结肠癌
- DLC-1过表达抑制结肠癌细胞生长及与Wnt/β-catenin信号通路的关系被引量：5
- 2014年
- 目的:探讨在结肠癌细胞中抑癌基因DLC-1的作用及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法:以结肠癌SW480细胞系为实验对象,分为实验组(pc DNA3.1(+)-DLC-1组),阴性对照组[pc DNA3.1(+)组]及空白对照组(SW480组)。用携带抑癌基因DLC-1的重组慢病毒表达载体转染各组,用MTT法检测各组细胞增殖活性,用流式细胞仪检测各组凋亡率,用real-time PCR及Western blot分别检测各组Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、GSK-3β和c-myc的表达水平。结果:慢病毒介导DLC-1过表达使结肠癌细胞SW480的增殖受到抑制,增殖率为0.546,凋亡率明显增加,为42.422+3.413。转染DLC-1基因的结肠癌SW480细胞中β-catenin和c-myc的m RNA及蛋白表达水平较空白对照组及阴性对照组均明显下降,而GSK-3β的m RNA及蛋白表达水平较空白对照组及阴性对照组则明显上升,差异具有统计学意义(P均=0.000)。结论:慢病毒介导DLC-1过表达在结肠癌中有明显的抑癌作用,这种作用与Wnt/β-catenin信号通路密切相关。DLC-1可能是Wnt/β-catenin信号通路的上游调节因子。
- 王春毅王佳林刘洪傅仲学
- 关键词：DLC-1抑癌基因结肠癌WNT/Β-CATENIN信号通路
- DLC-1基因重组慢病毒表达载体的构建及其在结直肠癌SW480细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 目的:构建携带肝癌缺失基因-1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)的重组慢病毒表达载体并实现DLC-1基因在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)SW480细胞中的过表达。方法:将DLC-1基因的靶序列与载体质粒pcDNA3.1(+)-GFP连接成重组质粒。重组质粒经双酶切法及基因测序验证构建正确后包装成慢病毒颗粒并计算病毒滴度。重组慢病毒感染SW480细胞,同时设置阴性对照组和空白对照组流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测感染率;real-time PCR及Western blot检测SW480细胞中DLC-1基因表达水平。结果:重组质粒构建正确。重组慢病毒滴度为1×109 TU/ml;对SW480细胞的感染率为90%;DLC-1mRNA在重组慢病毒组细胞中过表达;重组慢病毒组DLC-1蛋白的表达水平显著高于阴性对照组(P=0.000);阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P=0.902)。结论:成功构建了高滴度的DLC-1基因重组慢病毒,其携带的DLC-1基因能够在CRC SW480细胞中过表达,为后续研究DLC-1基因的表达在CRC的发生、发展中的作用奠定了实验基础。
- 王佳林王春毅刘洪傅仲学
- 关键词：肝癌缺失基因-1慢病毒SW480细胞结直肠癌
