王全颖
- 作品数：11 被引量：6H指数：1
- 供职机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 凋亡素原核表达载体的构建、表达与抗体制备
- 2009年
- 目的构建凋亡素基因的原核表达载体,进行表达并制备表达蛋白的多克隆抗体。方法构建凋亡素pGEM-T/Apoptin载体,并将凋亡素基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,将该质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)受体菌中,以IPTG对其进行诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。用表达蛋白常规免疫Balb/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体的滴度。结果凋亡素基因被成功的克隆至pET-28a(+),表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子量约17000的位置出现目的蛋白条带,大小与预期结果一致,Balb/c小鼠经5次免疫后,得到了滴度为1:5×105血清抗体。结论凋亡素原核表达载体的成功构建和多克隆抗体的制备为进一步研究凋亡素的功能和凋亡素的应用研究奠定了基础。
- 王健生张明鑫段小艺莫非王全颖杨广笑
- 关键词：原核表达抗体制备
- 介导p73去阻抑肽-p53(N37)表达的重组腺伴病毒的构建和鉴定
- <正>目的构建编码融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT的重组腺伴病毒表达载体,为进一步基因治疗的实验研究奠定基础。方法采用互补引物二次PCR法以及T载体克隆法获得p53(N37)基因克隆,酶切后将其连同穿膜肽...
- 白艳霞闫利英杨广笑王全颖
- 人骨形态发生蛋白-7重组腺病毒载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的为了研究人骨形态发生蛋白-7(hBMP7)导入骨缺损模型中的治疗作用,构建重组腺病毒载体。方法将hBMP7基因全长定向克隆入穿梭质粒pACCMV-plpA,构建pACCMV/rhBMP7穿梭质粒,应用磷酸钙-DNA共沉法将穿梭质粒及包装质粒PJM17共转染293细胞,经细胞内同源重组后,构建骨形态发生蛋白-7重组腺病毒Ad pAC-CMV/rhBMP7。结果成功构建了重组质粒pACCMV/rhBMP7,经293细胞包装后,扩增纯化测定病毒滴度为1×1011pfu/mL。结论成功构建人骨形态发生蛋白-7重组腺病毒Ad pACCMV/rhBMP7,为骨缺损、骨不连的基因治疗奠定了基础。
- 李新友王金堂刘淼王全颖杨广笑李萌
- 关键词：骨形态发生蛋白-7腺病毒载体基因转移滴度测定
- 重叠PCR克隆Exendin-4的基因及序列分析被引量：1
- 2013年
- 目的克隆Exendin-4 39肽氨基酸序列基因编码区cDNA。方法根据Exendin-4氨基酸序列编码cDNA,设计正、负向引物/模板链,利用重叠延伸PCR法扩增出Exendin-4编码区基因DNA片段;将获得的基因片段插入pGEM-T-Easy质粒中;转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆,利用限制性内切酶及核苷酸序列分析技术鉴定重组质粒。结果经质粒DNA酶切分析及序列测定,获得了Exendin-4 DNA片段序列。结论本研究成功克隆了Exendin-4 cDNA,为下一步构建Exendin-4真核表达载体打下基础,也为Exendin-4基因治疗糖尿病提供了前提条件。
- 王俊红郭永红张静徐静谢璇杨广笑王全颖王枫
- 关键词：EXENDIN-4重叠延伸PCR基因克隆
- 丙型肝炎病毒核心区基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：4
- 2001年
- 肝炎病毒(HCV)是输血后及散发性非甲非乙型肝炎的主要病原,丙型肝炎易转为慢性肝炎,与肝癌及肝硬变关系密切[1].HCV核心区编码蛋白是研究重点之一.在研究过程中,首先应获得大量高效表达的HCV核心蛋白抗原.HCV基因组结构与黄病毒或瘟病毒相似,为长约9.4kb的单股正链RNA,含一个开放读码框架(open readingframe,OFR),编码含3010～3011个氨基酸残基的多蛋白前体,经宿主和病毒蛋白酶作用加工成结构蛋白(C,E1和E2/NS1)和非结构蛋白(NS2,NS3,NS4和NS5)[2].核心蛋白约含191个氨基酸,大小约19000～22000,其氨基酸序列十分保守,比较已有的HCV各分离株氨基酸序列,同源性超过95%.
- 李华潘承恩陈武科王全颖杨广笑
- 关键词：丙型肝炎病毒病毒核心蛋白基因表达大肠杆菌
- EGFRvⅢ／PEP-3cDNA融合于HbcAg MIR区重组基因的构建与原核表达
- 表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)与肿瘤的发生、发展有密切关系。EGFRvⅢ仅存在于恶性肿瘤组织,正常组织检测不到,因此成为肿瘤免疫治疗的理想靶点。也为抗体介导的放射性核素特异性诊断和靶向治疗提供了新的线索。目前...
- 段小艺王健生周斌刘敏郭佑民王全颖杨广笑
- 文献传递
- 一种鸭乙型肝炎病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂
- 本发明公开了一种鸭乙型肝炎病毒的荧光定量PCR检测方法及试剂，筛选出鸭乙肝病毒Core区最大一致性的保守区核酸序列，以此为模板，设计、合成引物和荧光探针。构建pGEM-T/DHBV Core重组质粒，制备PCR标准品。通...
- 王亚文李义平刘正稳惠凌云刘希冯艾王威张琳杨广笑王全颖
- 文献传递
- 人骨形态发生蛋白-7全长基因cDNA的克隆和序列分析
- 2003年
- 目的 克隆人骨形态发生蛋白-7(BMP-7)全长基因,并进行测序及序列分析,研究其结构和功能。方法 采用异硫氰酸胍一步法从人胎儿肾中提取总RNA,利用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,分段扩增出hBMP-7全长基因cDNA,与PGEM-Teasy连接成PGEM-Teasy/hBMP-7重组质粒,采用Sanger双脱氧链终止法测定基因序列。结果以4号特异引物引导的RT-PCR扩增出BMP-7基因3′端540bp片段,以2号特异引物引导的RT-PCR扩增出BMP-7基因5′端750bp片段,重组连接两片段得到BMP-7全长基因cDNA。与Genebank上发表的hBMP-7序列(XM30619)比较有一个碱基不同,第862位核苷酸由T→G,编码的氨基酸由苯丙氨酸变为缬氨酸。结论 首次从中国人胎肾中分段克隆出BMP-7全基因。cDNA,该基因在骨关节系统的损伤与修复中具有重要的临床应用价值。
- 李新友刘淼王毅李曙明王全颖杨广笑
- 关键词：骨形态发生蛋白-7基因CDNA克隆
- 一种靶向病毒核心蛋白的穿膜抗体及其制备方法
- 本发明公开了一种靶向病毒核心蛋白的穿膜抗体及其制备方法，包括相偶联的针对病毒核心蛋白的抗体和蛋白转导域，两者偶联后构成穿膜抗体。本发明提供的膜抗体在蛋白转导域的作用下，被赋予细胞膜穿透能力，不但可以进入感染了病毒的靶细胞...
- 王亚文李义平刘正稳惠凌云刘希冯艾王威张琳杨广笑王全颖
- 文献传递
- 新生SD大鼠G418耳蜗Corti器离体损伤模型的建立
- 2008年
- 目的:建立毒性蛋白G418损坏新生大鼠耳蜗毛细胞的离体培养试验模型。方法:应用耳蜗基底膜分离取材技术,耳蜗器官离体培养技术和毛细胞免疫组化染色技术定量观察了G418对新生SD小鼠耳蜗毛细胞的损害。结果:G418对耳蜗毛细胞的有明显的损害,200μg/ml的终浓度,内外毛细胞均有不同程度损害,以外毛细胞为著。结论:G418可用于建立耳蜗Corti器离体损伤模型。
- 吴保俊祝康韦俊荣郑国玺杨广笑王全颖
- 关键词：耳蜗CORTI器
