石琦
- 作品数：107 被引量：134H指数：8
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金传染病预防控制国家重点实验室基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后半数致死量(LD_(50))的测定被引量：9
- 2006年
- 目的测定羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后的LD50。方法将感染羊瘙痒因子263K的仓鼠脑组织用生理盐水制成10%(w/v)脑组织匀浆,梯度稀释后感染仓鼠,观察仓鼠的发病情况。以Reed-Muench公式计算LD50,用West-ern blot方法检测观察期结束后发病及仍存活的仓鼠脑组织、脾组织中抵抗蛋白酶K的PrPSc。结果当颅内接种稀释度由低到高变化时,仓鼠发病的潜伏期及病程同时也由短到长发生变化。发病仓鼠脑组织中可以检测到PrPSc,但是PrPSc的量在不同的组之间无太大差别。观察期结束后,仍存活的仓鼠脑组织中未检测到具有PK抗性的PrP信号。结论本实验室保存的羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠的LD50为9.2-log10LD50i.c.units/0.001g brain,即当对仓鼠颅内接种10μl羊瘙痒因子263K的10-9.2稀释液时,50%的仓鼠会死亡。
- 石琦张宝云高晨韩俊高永军周玉玲董小平
- 关键词：半数致死量
- 不同剂量羊瘙痒因子263K颅内感染仓鼠临床终末期脑中GFAP表达的研究
- 2008年
- 目的研究不同剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后，在发病的终末期星形胶质细胞增生程度是否与注射剂量及潜伏期长短有关。方法以胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）作为星形胶质细胞增生的分子标志物，采用Western Blot和免疫组化方法检测感染仓鼠终末期脑匀浆和脑组织病理切片中的GFAP表达，经定量分析比较各感染剂量组间是否存在差异。结果与正常对照相比，不同剂量感染仓鼠发病终末期脑组织GFAP阳性细胞数量和总GFAP含量均明显升高，但各感染剂量组间无显著差异。结论不同感染剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠在发病终末期脑中星形胶质细胞的增生程度相似，与感染剂量及潜伏期无关联性。
- 田婵张宝云石琦韩俊高晨韩露董小平
- 关键词：朊病毒纤维蛋白
- 具有八肽重复区突变的朊蛋白其抗氧化性降低被引量：1
- 2008年
- 抗氧化性被认为是细胞朊蛋白的主要生理功能之一,研究显示它的抗氧化性主要与朊蛋白序列中的八肽重复区有关.但是迄今为止它的抗氧化机制仍旧不清楚.我们构建表达了野生型朊蛋白(PrP-PG5)和它的不同八肽重复区突变体0(PrP-PG0),9(PrP-PG9)和12(PrP-PG12).各种原核表达突变体蛋白在H2O2氧化后出现分子量的增加,并可导致羰基产生.MTT和细胞计数实验显示表达各种突变体的细胞存活率明显低于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.细胞内ROS检测发现表达各种突变体的细胞内ROS水平明显高于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.此外,谷胱甘肽过氧化物酶检测显示表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞内谷胱甘肽过氧化物酶水平明显高于表达各种突变体的细胞.H2O2处理细胞后,转染突变体的细胞总的羰基产物数量明显高于转染野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞,而表达突变体细胞及转染空载体的细胞较表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞对氧化物质的抵抗性明显减弱.这些结果提示,具有正确八肽重复区数目对于朊蛋白(PrP)的抗氧化作用起关键作用,PrP的抗氧功能的丢失可能参与家族性朊病毒病的病理过程.
- 安润董辰方雷艳君韩露李平陈建明王桂荣石琦高晨姜慧英周伟韩俊楚雍烈董小平
- 关键词：PRP抗氧化性谷光甘肽过氧化物酶细胞活性
- 下咽部鳞状细胞癌患者人乳头瘤病毒感染及p53蛋白表达的检测分析被引量：3
- 2018年
- 目的了解下咽部鳞状细胞癌患者人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染及p53蛋白表达的情况。方法对收集到的15例临床诊断下咽部鳞状细胞癌病例的石蜡组织标本应用Luminex及PCR的方法对HPV感染进行基因检测,应用PCR方法对p53基因进行扩增、测序和分析,应用免疫组织化学的方法对HPV16/18E6蛋白及p53蛋白进行检测。结果在15例临床诊断的下咽癌病例中,通过Luminex及PCR的方法发现6例病例具有HPV病毒的感染;通过免疫组织化学的方法发现2例病例具有HPV16/18的感染,总阳性率达到46.7%(7/15);有9例患者p53蛋白表达为阳性(60%,9/15),另外有9例患者p53基因出现突变(40%,6/15)。结论此研究探讨了下咽癌患者中HPV病毒的感染率与p53蛋白的表达及突变情况,为进一步阐明下咽癌的发病机制奠定基础。
- 魏炜宋蕴韬徐国辉肖康石琦
- 关键词：人乳头瘤病毒P53蛋白
- 克雅氏病的实验室检测技术研究进展
- 2022年
- 克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)是一种在人类中最为常见的海绵状脑病,其致病因子为朊病毒。由于该病的致死率为100%,且具有传播风险,CJD的早期诊断对疾病防控具有重要意义。临床上一般依据患者的临床症状与体征以及相应的实验室检测来进行CJD的鉴别诊断。本文主要围绕现有的CJD实验室检测技术展开综述,包括朊病毒的直接与间接检测、疾病标志物的检测以及疾病相关基因PRNP的检测与分析等,旨在为进一步推广和规范CJD的实验室检测提供参考与技术依据。
- 王环茹滕峥石琦张曦
- 关键词：克雅氏病
- 朊病毒感染中钙调蛋白相关激酶含量异常变化的研究被引量：1
- 2019年
- 朊病毒病是一类具有致死性、传染性和进行性的神经退行性疾病。目前研究发现许多因子都参与了疾病的发生发展过程,包括细胞因子、激酶和一些离子,其中钙离子及相关激酶在朊病毒病致病机制中的研究报道较少,为了探究朊病毒感染中钙调蛋白相关下游激酶的含量变化情况,本研究利用多种检测方法对朊病毒感染细胞系及小鼠脑组织进行了分析。结果显示朊病毒感染后,钙离子和钙调蛋白(CaM)的表达水平升高,下游Ca^(2+)/CaM复合物依赖性激酶CaMKIα和CaMKIV表达水平下降,同时这些激酶的上游激酶CaMKKα含量降低,提示朊病毒感染后神经元中钙离子和相关激酶稳态失衡,这种异常变化很可能影响下游多种转录因子合成,这些结果为解释朊病毒感染后神经元大量丢失提供了科学依据。
- 胡超王耀恩陈嘉高利萍郭海婷严普刘恋肖康王晶石琦董小平陈志宝陈操
- 关键词：朊病毒CAMKIV
- 人朊蛋白相关蛋白Shadoo的表达、纯化及抗体的制备
- 2007年
- 目的克隆、表达和纯化人朊蛋白相关Shadoo(SHO)蛋白并制备抗Shadoo的多克隆抗体。方法提取仓鼠各组织的mRNA,分析SHO基因在仓鼠各组织中转录水平的差异;提取人DNA,PCR方法获得人SHO基因,克隆至融合表达载体,在大肠埃希菌中表达人SHO蛋白并纯化;以纯化蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清,用Western blot方法分别检测与重组及内源性SHO蛋白的免疫反应性。结果SHO基因在仓鼠各组织中的转录水平差异很大,脑组织转录水平高。在大肠埃希菌中表达了分子质量单位为37 ku的人SHO融合蛋白,制备的SHO蛋白抗体可与重组的SHO蛋白反应,可识别内源性的SHO。结论成功表达纯化人SHO融合蛋白并制备了抗SHO抗体,为研究SHO和正常朊蛋白之间的关系打下初步基础。
- 高永军高晨陈建明石琦郭燕张宝云董小平
- 关键词：朊蛋白蛋白纯化多克隆抗体
- 2020年中国克–雅病监测网络病例特征分析被引量：6
- 2022年
- 目的 了解2020年中国克–雅病(CJD)的发病情况、流行病学及临床特征。方法 对2020年我国CJD监测网络获得的可疑CJD病例的临床及流行病学资料进行分析,并收集患者的血液及脑脊液,提取全血基因组DNA并利用聚合酶链式反应及测序方法对朊蛋白基因(PRNP)129位及219位氨基酸多态性进行分析,Western Blot检测脑脊液中14-3-3蛋白。结果 2020年共监测病例458例,其中散发型CJD临床诊断病例179例(39.08%),疑似诊断病例12例(2.62%),遗传型CJD病例18例(3.93%),吉斯特曼–施特劳斯综合征(GSS)1例(0.22%)。病例报告无季节聚集性,长久居住地呈散在分布,职业分布无聚集性。临床诊断病例年龄中位数为63.14(43,87)岁,男女性别比为0.97∶1;疑似诊断病例年龄中位数为68.08(54,77)岁,男女性别比为1∶1。快速进行性痴呆为最常见的首发症状。脑脊液14-3-3蛋白、脑电图以及头颅磁共振成像3项检测结果中,出现阳性结果越多的病例典型症状也较多。对439份血液样品进行PRNP检测,其中129位氨基酸为M/M纯合子的434例,M/V杂合子的3例,V/V纯合子的2例;219位氨基酸为E/E纯合子的435例,E/K纯合子的4例。结论 2020年我国监测到的CJD病例的报告时间、长久居住地分布、职业、性别比例以及年龄分布均符合CJD的发病特点。
- 高利萍肖康周伟王园董小平石琦
- 关键词：朊蛋白基因
- 人乳头瘤病毒2(HPV-2)变异株的突变E2蛋白转录抑制作用的研究
- 2008年
- 皮肤寻常疣的发生与多种基因型别HPV的感染密切相关。本研究利用PCR方法对1例临床罕见的寻常疣患者感染的HPV-2毒株LCR及E2基因序列进行扩增、测序,分别构建含HPV-2变异株及原毒株LCR的重组CAT基因报导质粒pBLCAT-LCR和表达突变及野生型E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-E2,通过瞬时转染HeLa细胞,研究变异株启动子活性及突变E2蛋白的转录抑制作用。结果显示,患者感染的HPV-2变异株LCR及E2基因均存在多处点突变。变异株早期启动子活性明显高于原毒株;突变的E2蛋白转录抑制作用较野生型E2蛋白显著降低;变异株LCR上E2结合位点核苷酸的突变明显降低E2蛋白对病毒早期启动子的抑制作用。提示HPV-2变异株启动子活性增强及突变E2蛋白转录抑制作用的降低与这一罕见巨大寻常疣临床表型之间存在着重要的联系。
- 雷艳君高晨姜慧英韩俊陈建明石琦周伟袁育康董小平
- 关键词：寻常疣E2LCR启动子活性
- 细胞浆中PrP蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究被引量：1
- 2008年
- 为了探讨在胞浆中表达的PrP的理化特征以及对细胞活性的影响,我们构建了胞浆型PrP(CytoPrP)真核表达质粒,瞬时转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,通过蛋白酶敏感性实验检测CytoPrP及其蛋白酶抗性,利用MTT和Trypan Blue细胞计数检测CytoPrP的细胞毒性作用。结果显示,CytoPrP在胞浆内的存在受蛋白酶抑制剂的控制;与野生型PrP相比,CytoPrP具有相对较强的蛋白酶K(PK)抗性。MTT和细胞计数实验均显示,Cyto-PrP的存在可诱导明显的细胞毒性效应,而CytoPrP的细胞毒性作用受蛋白酶抑制剂含量的影响,呈剂量依赖关系。上述结果为研究CytoPrP在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的科学数据。
- 王新董辰方石琦石崧王桂荣雷艳君安润徐琨姜慧英韩俊赵玉军董小平
- 关键词：朊病毒细胞毒作用
