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生长激素释放因子(GRF)在动物肌肉组织的表达被引量：35: 2000年; 向大鼠后肢小腿前部注射生长激素释放因子 ( GRF)的表达质粒 pc DNA3 -GRF4 0 μg,于注射后 2 d开始 ,每隔 5d杀 2只取样 ,提取 RNA和 DNA,用 PCR和 RT-PCR检测质粒及其表达。结果表明 ,在 3 0 d时仍为阳性结果。注射部位肌肉组织免疫组化检测结果表明 ,在部分大鼠 ( 1 4/ 2 4 )的肌肉组织中检测到了 GRF分子。给家兔注射 pc DNA3 -GRF质粒 1 0 0μg(第组注射质粒 ,第组注射含 1 0 %甘油的质粒 ) ,于注射后 1 d开始采血分离血清 ,用 RIA法测定血清生长激素 ( GH)的水平。结果表明 ,第组在 5d时 ,GH水平上升2 7.1 %( P <0 .0 5)。本研究结果表明 ,外源 GRF在肌肉组织可获得表达 ,并能提高动物体内的; 张永亮欧阳红生刘松财连继勤冯立文赵建军张玉静; 关键词：GH 外源基因表达 GRF 肌肉组织

生长激素释放因子在CHO细胞的表达被引量：6: 2002年; 在对生长激素释放因子 (GRF)基因改造和化学合成 ,并构建了其真核表达载体 pc DNA3- GRF(1- 32 )的基础上 ,用 L ipofectin将上述载体转染 CHO细胞进行瞬时表达。提取转染细胞总 RNA,用 RT- PCR和 Dot blotting检测 GRF基因的表达情况 ,用 Western blotting检测转染细胞上清液的表达产物 ,均得到了阳性结果。制备大鼠垂体单层细胞 ,测定表达产物的生物学活性 ,结果表达产物可刺激生长激素释放 ,并且比对照组提高 3.8倍。试验结果表明 ,已构建的真核表达载体 pc DNA3- GRF(1- 32 )能表达出有生物学活性的 GRF。; 张永亮刘松财欧阳红生冯立文赵建军张玉静; 关键词：GRF CHO细胞真核表达

猪肌生成抑制素基因的克隆和序列测定被引量：32: 2001年; 根据文献报道的猪肌生成抑制素基因 c DNA序列 ,分别从第 1、第 2和第 3外显子中设计引物 ,以大约克猪染色体 DNA为模板 ,分段扩增出含内含子和外显子的序列。将所得各序列回收、克隆到 p GEM-easy T载体中 ,然后进行序列测定。合并所有测得的猪肌生成抑制素基因序列 ,共获得 6 kb连续序列。分析结果表明 ,猪肌生成抑制素基因第 1内含子长 1 80 9bp,第 2外显子长 374 bp,第 2内含子长 1 978bp。所测得的外显子序列与已发表的 c DNA序列同源分析比较 ,没有出现引起氨基酸改变的突变。表明瘦肉型猪 (大约克猪 )肌生成抑制素基因仍很完整。; 欧阳红生孙燕张永亮李慎涛张锐廖晓萍张玉静赵建军赵凤云; 关键词：肌生成抑制素基因克隆

猪肌生成抑制素基因结构和表达组织分析研究: 肌生成抑制素(Myostatin)是Alexandra C.McPherron等1997年发现的骨骼肌生长的负调控因子,它只在骨骼肌中表达,在骨骼肌的生长、分化过程中发挥负调控作用。本文从大约克猪血中提取猪染色体)NA。...; 欧阳红生李慎涛张永亮赵建军孙博兴张锐张云霞刘松财张玉静; 文献传递

CHO表达生长激素释放因子的生物活性测定被引量：1: 2003年; 在对生长激素释放因子(GIF)基因改造和化学合成,并构建了其真核表达载体pCDNA3-GRF(1-32)的基础上,用Lipofectin将上述载体转染CHO细胞进行瞬时表达,采用体外单层垂体细胞培养的方法对表达的CRF(1-32)进行了体外生物活性测定,即先将垂体用酶进行消化,再将消化细胞培养,形成单层细胞,利用其能合成与释放生长激素的能力来检测GRF的活性。结果表明:表达产物可刺激生长激素释放,并且比对照组提高3.8倍。; 任晓慧刘松财张永亮欧阳红生赵建军张玉静; 关键词：生长激素释放因子 CHO细胞生物活性体外测定生长激素

间接ELISA测定GRF方法的建立被引量：2: 2001年; 建立了间接 ELISA定量测定生长激素释放因子 ( GRF)的方法。其基本程序为 ,抗原包被、5%牛血清白蛋白和 5%猪血清封闭、一抗反应 (山羊抗人 GRF1～ 2 9抗体 )、二抗反应 (生物素化兔抗山羊 Ig G)、链霉卵白素 -HRP反应、DAB显色。最佳工作条件为 ,一抗 1∶ 1 6 0 0、二抗 1∶ 32 0 0、链霉卵白素 -HRP0 .5mg/L。在上述条件下 ,绘制了标准曲线 ( 2～ 4 0 ng) ,并测定了中国仓鼠肾细胞 ( CHO)表达; 张永亮刘松财冯立文赵凤云欧阳红生连继勤赵建军甄英凯张玉静; 关键词：生长激素释放因子间接ELISA法

兔防御素cDNA表达质粒的构建及其表达被引量：1: 2001年; 将兔防御素 ( MCP-1 ) c DNA插入真核表达载体 pc DNA3的 Eco R 和 Xba 酶切位点之间 ,构建了兔MCP-1 c DNA的真核表达质粒 pc DEF。通过脂质体转染 ,使兔 MCP-1 c DNA在 COS-7细胞中表达 ,在转染60、84、1 0 8h后 ,提取总 RNA。采用 RT-PCR,在 2 88bp的位置扩增出 1条特异性带 ;RNA斑点印迹杂交表明 ,兔 MCP-1 c DNA在 60、84、1 0 8h均有表达。; 张艳宇刘万臣张玉静谭芳赵建军柳凤琴; 关键词：兔防御素转染基因表达质粒构建

猪肌生成抑制素基因结构和表达组织分析研究: 肌生成抑制素(Myostatin)是Alexandra C.McPherron等1997年发现的骨骼肌生长的负调控因子,它只在骨骼肌中表达,在骨骼肌的生长、分化过程中发挥负凋控作用.本文从大约克猪血中提取猪染色体DNA....; 欧阳红生李慎涛张永亮赵建军孙博兴张锐张云霞刘松财张玉静; 文献传递

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赵建军