陈蕾蕾
- 作品数：23 被引量：131H指数：7
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脂质体介导的VEGF_(165)基因转染对内皮细胞生长的作用被引量：3
- 2004年
- 构建血管内皮细胞生长因子基因VEGF165真核表达载体pcDNA3 VEGF165,以阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将基因转入原代培养的人脐静脉内皮细胞中。结果表明 ,基因转染 1h后细胞内就有VEGFDNA存在 ,VEGFmRNA水平显著上升 ;基因转染 2d后培养液上清VEGF蛋白表达显著上升 (135 5 12± 6 2 34)pg/ml和 (19 2 7± 2 96 )pg/ml,P <0 0 1。转染VEGF165基因 2d的内皮细胞再经程序降温冷冻保存复苏后 ,其存活率显著高于对照组 (pcDNA3 组 ) (90 13%± 2 84 %和81 5 2 %± 2 15 % ,P <0 0 5 ) ,凋亡率显著低于对照组 (7 15 %± 0 4 2 %和 17 6 1%± 1 5 6 % ,P <0 0 5 )。MTT法显示转染VEGF165基因能促进内皮细胞VEGF蛋白的表达 ,促进细胞增殖 ,抑制细胞凋亡。在治疗心脏及下肢动脉缺血性疾病中 ,VEGF165基因治疗可能具有重要的意义。
- 顾松刘长建孙雪梅张乐陈蕾蕾
- 关键词：脐静脉内皮细胞
- 单细胞反转录酶聚合链式反应技术对胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子的鉴别
- 2006年
- 目的:利用干细胞分化获得胰岛细胞后目前还没有较理想的鉴别方法,实验通过单细胞反转录酶聚合链式反应技术鉴别胰岛干细胞标记物胰岛素促进因子,以建立一种检测胰岛干细胞的有效方法。方法:实验于2001-10/2005-08在加拿大多伦多大学和南京大学附属鼓楼医院完成。①将收集培养2～4周的单个胰岛干细胞用于实验。②胰岛活性测定实验中,选择1×106分化的胰腺干细胞,用低浓度和高浓度葡萄糖分别刺激1～4h,检测12,14,24d培养液中胰岛素的浓度。③单细胞反转录酶聚合链式反应检测胰岛素促进因子基因实验中,选择12个单个胰腺干细胞进行检测,另取12个单个未分化的干细胞作为对照。聚合链式反应体系为20μL。聚合链式反应扩增反应条件为94℃预变性4min,94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸2min条件下循环35次。聚合链式反应产物以质量浓度为20g/L的琼脂糖凝胶电泳。结果:①分化的胰腺干细胞培养液中胰岛素浓度的检测:培养12,14,24d时培养液中胰岛素的浓度分别为42.6,68.2,73.5IU/L,随着时间的延长,呈逐渐升高的趋势。②单个胰岛干细胞胰岛素促进因子反转录酶聚合链式反应检测结果:12个单个胰岛干细胞中有7个胰岛素促进因子表达呈阳性,而作为对照的12个未分化干细胞均未检出,两者差异显著(P<0.001)。结论:采用单细胞反转录酶聚合链式反应检测方法为胰腺干细胞的鉴定和纯化提供了技术保障,证明单细胞反转录酶聚合链式反应是一种检测胰腺干细胞标记物的有效方法。
- 耿东进陈军浩陈蕾蕾张乐刘勇周锦勇顾香芳韩鹂
- 关键词：细胞分离胰岛素
- Smad1在青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞中的表达及意义被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨Smad1在青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者骨髓间质干细胞(MSCs)中的表达及其在发病机制中的作用。方法:30例12～18岁志愿者分为两组:AIS组20例,同年龄正常对照组10例。分别从髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离MSCs,体外培养并传至P2代行表型鉴定,分别采用RT-PCR及免疫蛋白印记法检测两组患者MSCs中Smad1的表达情况。结果:AIS组与对照组Smad1mRNA水平的平均表达率分别为4.48±0.58和1.03±0.22,蛋白水平的平均表达率分别为2.62±0.55和0.84±0.22。不论是核酸水平还是蛋白水平AIS组Smad1的表达均高于对照组(P<0.01)。结论:Smad1在AIS患者MSCs中表达强度异常,可能与AIS发病的分子机制相关。
- 孙强邱勇刘臻吴洁陈军浩陈蕾蕾马薇薇
- 关键词：青少年特发性脊柱侧凸骨髓间质干细胞
- 荧光染料CFSE作为细胞标记的特性研究被引量：36
- 2004年
- 探讨荧光染料CFSE在作为细胞标记时的特性。方法 :应用激光共聚焦扫描显微术 ,观察CFSE在细胞中的准确定位。利用MTT比色法测定CFSE标记的细胞及未标记细胞的增殖情况 ;通过细胞计数和流式细胞仪 (FCM) ,测定细胞在不加任何刺激及诱导的情况下细胞数及平均荧光强度的变化趋势。结果 :在共聚焦显微镜下 ,可见CFSE标记的细胞的细胞膜、细胞核及细胞质中都带有绿色荧光 ,以胞核荧光最强。利用MTT比色法测定标记及未标记细胞的A值无显著差异。连续 6d记录的细胞数与FCM测定的平均荧光强度呈负相关。结论 :CFSE可作为细胞的标记物 ,用于细胞移植的体内检测。
- 陈蕾蕾陈军浩孙雪梅施广飞
- 关键词：荧光染料CFSE细胞标记
- RANKL/OPG在青少年特发性脊柱侧凸患者低骨量发生机制中的作用
- 目的从骨髓间质干细胞(MSCs) 水平探讨 RANKL 及 OPG 与青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者骨量降低的关系。方法 46 例12～17岁志愿者分为2组,其中 AIS 组 30例,年龄12～17岁,平均14.1岁...
- 刘臻邱勇孙强吴洁陈军浩陈蕾蕾马薇薇
- 关键词：RANKLOPG脊柱侧凸骨髓间质干细胞
- 文献传递
- SOX9在青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞的表达及意义被引量：10
- 2006年
- 目的:探讨SOX9在青少年特发性脊柱侧凸(AIS)发病机制中的作用。方法:30例12～18岁志愿者分为两组,AIS组20例,同年龄对照组10例。分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离骨髓间质干细胞(MSCs),体外培养并传至P2代行表型鉴定,分别采用RT-PCR法、Westernblotting法及免疫荧光法检测两组MSCs中SOX9的表达情况。结果:不论是核酸水平还是蛋白水平,AIS组患者的SOX9表达均高于对照组(P<0.01)。结论:转录因子SOX9在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS发病相关。
- 孙强邱勇刘臻吴洁陈军浩陈蕾蕾马薇薇
- 关键词：SOX9青少年特发性脊柱侧凸骨髓间质干细胞
- 神经纤维瘤蛋白在先天性脊柱侧凸患者成骨细胞和软骨细胞中的表达
- 2006年
- 目的:检测神经纤维瘤蛋白在先天性脊柱侧凸患者成骨细胞和软骨细胞中的表达。方法:6例先天性脊柱侧凸患者,在后路手术时取髂骨及髂骨生长板,分离、培养成骨细胞和软骨细胞,分别行碱性磷酸酶染色和甲苯胺蓝染色。逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测神经纤维瘤蛋白mRNA,间接免疫荧光和Westernblot检测神经纤维瘤蛋白在成骨细胞和软骨细胞中的表达。结果:先天性脊柱侧凸患者成骨细胞和软骨细胞中存在Ⅱ型神经纤维瘤蛋白表达,该蛋白主要分布在细胞浆,所表达蛋白为三磷酸鸟苷酶活化蛋白(GAP)活性较弱的Ⅱ型异构体。结论:先天性脊柱侧凸患者成骨细胞和软骨细胞中存在神经纤维瘤蛋白表达,但该蛋白是否通过对成骨细胞和软骨细胞的影响导致骨骼系统异常还有待于进一步研究。
- 陈晖邱勇陈蕾蕾李雷周祀桥
- 关键词：成骨细胞软骨细胞先天性脊柱侧凸
- HCCR1和HCCR2可溶性蛋白在细菌中表达、纯化及在早期肝癌诊断中的应用(英文)被引量：2
- 2006年
- 目的评估HCCR1和HCRR2克隆、细菌表达及可溶性蛋白的纯化及应用于早期肝癌诊断的可行性。方法cDNA克隆、表达、蛋白质的纯化、Westernblot分析用于评估HCCR1和HCCR2蛋白的生产,Elisa方法用检测血清抗原。结果HCCR1和HCCR2能够高水平地在细菌中表达,纯化的可溶性蛋白能用于生产抗体并应用于肝癌的早期诊断。结论HCCR1和HCCR2蛋白质可以在细菌中生产,并能成功地用于肝癌的早期诊断。
- 耿东进陈军浩顾香芳陈蕾蕾张乐刘勇韩鹂
- 关键词：肝细胞性肝癌重组蛋白
- 用猪AMI模型研究荧光染料CFSE和Brdu作为移植细胞标记物的实用性被引量：1
- 2006年
- 目的研究荧光染料CFSE和Brdu作为体内细胞移植标记物的实用性。方法构建猪急性心肌梗死(AMI)模型。用CFSE和Brdu对骨髓单个核细胞进行双标记,经冠状动脉回输至MI区。4周后,利用激光共聚焦显微镜和免疫组织化学法分别观察CFSE和Brdu的定位和标记情况。结果细胞移植4周后,发现Brdu阳性细胞多位于心肌疤痕形成区且MI区的新生血管内壁也出现阳性染色。在MI区可见CFSE标记的带绿色荧光的细胞,但背景色较高。结论在动物实验中,CFSE和Br-du均可作为移植细胞标记物,Brdu的标记效果优于CFSE,适于同时进行形态学和组织学研究。
- 陈蕾蕾孙雪梅施广飞张荣林耿东进顾香芳韩鹂张葵
- 关键词：CFSEBRDU细胞移植荧光染料
- 小鼠骨髓干细胞向肝细胞转化的体外实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的建立以30 ng/ml FGF-4和30 ng/ml OSM 为主的诱导培养体系,研究体外骨髓干细胞向肝细胞的转化过程中细胞形态、结构、功能的变化。方法建立以30 ng/ml FGF,30 ng/mlOSM 为主的小鼠骨髓干细胞诱导培养体系。观察细胞形态和数量的变化;RT-PCR、Western blot、免疫荧光染色检测肝细胞特异性标记物的表达;通过 PAS 糖原染色、白蛋白 ELISA、尿素合成试验,检测细胞的合成和代谢功能。结果诱导12 d,观察到多极性的肝细胞样细胞,且逐渐增多、集落不断增大。在诱导过程中,不同的时间点可以分别检测到 HNF-3βmRNA、ALBmRNA、CK18mRNA、TTRmRNA、G-6-PasemRNA 和 TATmRNA 的表达。诱导21 d,细胞表达 HNF-3β、ALB、CK18蛋白;免疫荧光定位示 ALB 表达于胞浆和胞膜,而 CK18表达于胞浆。诱导21 d,细胞胞浆内可见红染的糖原颗粒;在诱导过程中,不同的时间点检测到细胞分泌 ALB、合成尿素的量的变化。结论我们建立的以30 ng/ml FGF、30 ng/ml OSM 为主的诱导培养体系,可以有效地促进骨髓干细胞体外定向转化为肝细胞。
- 施晓雷丁义涛仇毓东谢婷朱章华李雷陈蕾蕾
- 关键词：骨髓干细胞肝细胞
