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于传飞: 作品数：146 被引量：198H指数：8; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>

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基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用: 目的：利用转基因细胞法建立抗HER2单抗的抗体依赖的细胞介导细胞毒效应(Antibody-De-pendent Cell-mediated Cytotoxicity,ADCC)的生物学活性检测方法.方法：利用Jurkat...; 刘春雨王馨于传飞徐刚领张峰王文波王兰高凯; 关键词：ADCC 生物学活性

抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定: 目的用两种方法即液质联用和紫外分光光度计对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定.方法采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析；采用紫外分光光度计在252及280 nm处进行吸光值测量.结果两种方法测得...; 李萌于传飞王兰张峰刘春雨王文波郭玮高凯王军志; 关键词：液质联用紫外分光光度计

一种快速测定IL-2蛋白药物和抗CD25抗体药物的生物学活性方法: 本发明公开了一种快速测定IL‑2蛋白药物和抗CD25抗体药物的生物学活性方法，所述方法通过构建慢病毒(pLV‑STAT5‑Luc‑PGK‑Zencin)转染的C8166效应细胞，经筛选后得到稳定表达STAT5报告基因的单...; 王兰段茂芹于传飞张峰刘春雨付志浩王文波郭莎郭潇黄璟徐苗王军志; 文献传递

一种抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定被引量：8: 2014年; 用两种方法即液质联用和紫外分光光度法对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定,为科学评价和有效控制药物抗体偶联比提供可靠方法。采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析,根据偶联不同数目药物分子的质量数增加判断偶联数目;采用紫外分光光度计在252及280 nm处进行吸收度测量,根据抗体和药物在不同波长处的吸收系数不同,由二元一次方程求导出药物抗体偶联比。两种方法测得的药物抗体偶联比分别为3.21及3.25,结果相似,都可用于此种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比分析。; 于传飞李萌郭玮王兰张峰刘春雨王文波王军志高凯; 关键词：液质联用

成像毛细管等点聚焦电泳法对单克隆抗体制品的电荷异质性分析: 目的：采用成像毛细管等点聚焦电泳法分析单克隆抗体制品的电荷异质性.方法：应用优化的成像毛细管等点聚焦电泳技术,对两种单克隆抗体制品酶切处理前后进行电荷异质性分析.结果：羧肽酶B处理前后的抗体1成像毛细管等点聚焦电泳结果...; 于传飞郭玮王兰张峰刘春雨王文波李萌王军志高凯; 文献传递

以CD79b为靶点抗体偶联药物的质量研究: 2023年; 目的:建立抗体偶联药物(ADC)抗CD79b单抗-vc-MMAE(维泊妥珠单抗)的质控方法。方法:采用细胞杀伤法测定抗CD79b单抗-vc-MMAE的生物学活性;采用表面等离子共振法(SPR)测定其亲和力参数(K_(D));采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定其与CD79b的相对效价;对抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE进行肽图鉴别;采用分子排阻色谱法(SEC-HPLC)和十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(CE-SDS)分析其纯度;采用毛细管等点聚焦电泳法(iCIEF)分析其电荷异质性;采用液质联用法(UPLC-MS)测定其相对分子质量和药物抗体偶联比(DAR);采用疏水色谱法(HIC-HPLC)进一步确认其DAR;采用反相色谱法(RP-HPLC)测定游离小分子药物。结果:抗CD79b单抗-vc-MMAE的生物学活性相对效价为(99.32±3.99)%,K_(D)为(4.27±0.27)×10^(-9)mol·L^(-1),结合活性相对效价为(106.01±2.88)%,抗CD79b单抗和抗CD79b单抗-vc-MMAE的参比品与其样品的肽图图谱一致,SEC-HPLC主峰纯度为(99.32±0.05)%,非还原CE-SDS的重链-重链-轻链-轻链(HHLLC)纯度为(6.89±0.19)%,重链-重链-轻链(HHLC)纯度为(27.21±0.15)%,重链-重链(HHC)纯度为(18.33±0.06)%等,还原CE-SDS轻链和重链纯度为(95.47±0.16)%,iCIEF主峰峰面积百分比为(73.57±0.55)%,主峰等电点7.53±0.00,液质联用法测定抗CD79b单抗-vc-MMAE分别偶联0、2、4、6个小分子药物的相对分子质量为147891、150527、153161和155796,DAR为3.60,HIC法测得的DAR为3.53±0.01,RP-HPLC测定游离小分子药物浓度为(0.039±0.003)μg·mL^(-1)。结论:建立了抗CD79b单抗-vc-MMAE的质控方法,对该产品的安全性、有效性进行控制,为该类ADC药物的质量检测提供参考。; 李萌赵雪羽武刚杜加亮王文波郭璐韵龙彩凤杨雅岚付志浩俞小娟刘春雨段茂芹徐刚领于传飞王兰; 关键词：生物学活性连接子

过滤对一种IgG2亚型EGFR单抗中不溶性微粒的影响被引量：1: 2018年; 目的:探讨过滤操作对一种免疫球蛋白G2(immunoglobin G2,IgG2)亚型表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体(单抗)生物类似药(similar biotherapeutic product,SBP)候选药中不溶性微粒的影响。方法:利用微流数字成像(microflow digital imaging,MDI)技术对某厂家生产的Ig G2亚型EGFR单抗SBP候选药与其原研药(reference biotherapeutic product,RBP)中不同粒径的不溶性微粒进行比较;采用0.22μm的滤器对EGFR单抗SBP候选药进行过滤,并采用MDI法立即对不同粒径和性质的不溶性微粒进行检测和分析;再将过滤后的EGFR单抗SBP候选药在室温静置2 h,并采用MDI法对不同粒径和性质的不溶性微粒进行检测和分析。结果:某Ig G2亚型EGFR单抗SBP候选药中不同粒径的不溶性微粒数量明显高于RBP;用0.22μm的滤器过滤后,EGFR单抗SBP候选药中的不溶性微粒数由8.51×105粒·m L-1降为1.52×104粒·m L-1,且主要成分蛋白聚体、气泡和纤维均明显减少;室温静置2 h后,其中的不溶性微粒数由1.52×104粒·m L-1增加至3.23×104粒·m L-1,且增加的微粒主要为蛋白聚体。结论:与原研药相比,该EGFR单抗SBP候选药蛋白聚体水平较高,过滤后有明显改善,但随着放置时间延长,蛋白聚体含量又有明显增加。这提示我们需加强研发,以提高SBP候选药的产品质量、安全性和有效性。; 郭莎张峰刘春雨于传飞李萌王文波付志浩俞小娟王兰; 关键词：单克隆抗体不溶性微粒

抗体药物偶联物中药物抗体偶联比的测定: 目的用两种方法即液质联用和紫外分光光度计对一种抗体药物偶联物的药物抗体偶联比进行测定。方法采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析;采用紫外分光光度计在252及280nm处进行吸光值测量。结果两种方法测得的药物抗...; 李萌于传飞王兰张峰刘春雨王文波郭玮高凯王军志; 关键词：液质联用紫外分光光度计; 文献传递

光阻法检测治疗性抗体不溶性微粒的取样方式探讨被引量：2: 2017年; 目的:考察不同取样方式对光阻法检测小装量治疗性抗体不溶性微粒的影响。方法:采用光阻法对体积小于25 m L的19个靶点65个批次治疗性抗体中≥2μm、≥10μm和≥25μm的不溶性微粒进行检测,将抗体分为3组,取样方式分别为单支样品不同取样体积(0.5、1、3 m L)检测与合并样品(取样体积5 m L)检测,合并样品不同取样体积(0.5、1、3、5 m L)检测,以及合并样品后稀释(稀释20、10、5倍)检测与合并样品原倍检测。结果:对于≥2μm、≥10μm、≥25μm的不溶性微粒,不管是采用单支样品不同取样体积还是采用合并样品后不同取样体积,与合并样品后每次取样5 m L的不溶性微粒检测结果相比,均没有统计学意义上的差异;且≥2μm不溶性微粒的取样体积变异小于≥10μm、≥25μm的不溶性微粒。合并样品后稀释检测的结果则与合并样品检测的结果具有统计学差异,且稀释后的结果要高于未稀释的结果,稀释倍数越大,与未稀释结果的差异也越大。结论:采用光阻法对体积小于25 m L的小装量治疗性抗体进行不溶性微粒检测时,为节省样品并减少外源微粒污染,不管单支取样还是合并取样,均可首先考虑选择小于5 m L的单次取样体积进行检测,而对合并后稀释检测的方式应慎重选择。; 郭莎曹俊霞倪永波于传飞刘春雨李萌张峰王文波陈伟高凯王兰; 关键词：药品检验取样方法光阻法治疗性抗体不溶性微粒

超高效液相色谱串联Qda质谱法检测单抗N糖的研究被引量：12: 2018年; 目的利用超高效液相色谱串联Qda质谱法对单抗的N糖谱进行定性和定量分析。方法对单抗Fc上的N糖链利用糖苷酶F进行酶切释放,然后用Rapi Fluor-MS染料进行标记,通过Qda质谱对N糖进行糖型鉴别、荧光检测器进行定量检测。结果超高效液相色谱串联Qda质谱法能够准确的对单抗N糖进行定性定量检测,单个糖型的实测m/z值在理论值±0.5内。利用该方法对原研抗CD20人鼠嵌合单抗和生物类似药候选药物的N糖进行分析表明,3个候选药物的N糖谱与原研抗体基本一致,但在部分糖型种类和比例上存在一定的差异,总的岩藻糖修饰糖型比例基本一致。对CHO细胞、NS0细胞和SP2/0细胞表达的单抗N糖进行比对分析显示,3种细胞表达单抗的主要糖型为G0F-N、G0F、Man5、G1Fa、G1Fb和G2F,占总糖型比例的80%以上。相比于NS0细胞和SP2/0细胞,CHO细胞表达抗体糖型种类相对较为简单,共11种糖型。而NS0细胞和SP2/0细胞表达单抗糖型种类和结构较复杂,分别检测到22和26种糖型,其中含有多种复杂的唾液酸和半乳糖修饰糖型,虽然这些糖型所占比例较低,但可能与单抗的体内半衰期和免疫原性相关。结论超高效液相色谱串联Qda质谱法作为快速准确的N糖分析方法,可应用于单抗N糖的质控研究中。; 王文波于传飞张峰徐刚领高凯王兰

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