吴凌
- 作品数：10 被引量：21H指数：2
- 供职机构：四川大学华西口腔医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 组织工程牙胚异体异位发育的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的比较组织工程牙胚在体内不同部位移植的生长与发育情况,为进一步明确组织工程化牙齿的体内构建探寻合适的生长环境。方法采用出生后大鼠/猪第一磨牙牙胚为种子细胞,与不同生物材料相复合构建组织工程牙胚,分别植入裸鼠皮下、猪肠系膜内、SD成年大鼠肾被膜下,特定时间点取材,HE染色观察移植牙胚的发育情况。结果移植于裸鼠皮下、肠系膜内的移植物未见进一步发育趋势,皮下构建的组织工程牙胚部分从皮肤脱落而丧失,在肠系膜内可见大量浸润的淋巴细胞;而移植于大鼠肾被膜下的牙胚生长良好,可见釉质和牙本质-牙髓复合体。结论肾被膜下的种植环境有利于异体组织工程牙胚的生长,可为牙齿体内组织工程化方式及进一步发育提供良好的微环境。
- 聂鑫金岩龙洁吴凌敬伟林云锋田卫东
- 关键词：牙胚发育异体移植物
- 体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究被引量：3
- 2008年
- 目的通过构建体外组织培养模式,观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1(TGF-β1)的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织,剪碎后与牙本质陶瓷粉(CDP)及2μg/mL TGF-β1混合,将混合物以骨基质明胶(BMG)为载体构建牙髓组织培养模型,在培养3、7、14和21 d后,通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成,免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白(DSP)的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化,甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积,免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型,该模型能维持牙髓细胞的生长和存活,可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察;该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。
- 聂鑫金岩龙洁吴凌敬伟林云锋田卫东
- 关键词：器官培养牙髓细胞
- 小鼠牙乳头间充质细胞自发牙向分化及相关基因表达分析
- 2008年
- 目的观察小鼠牙乳头间充质细胞在血清培养基中的自发牙向分化,并对其特异性牙向和骨向分化的相关转录因子的基因表达进行分析。方法获取孕16.5 d(E16.5 d)胎鼠的原代牙乳头间充质细胞,分别在含血清培养基和添加白血病抑制因子(LIF)的血清培养基中传代培养,观察细胞是否出现成牙本质细胞表型分化,并检测牙向分化表型和维持未分化表型的细胞的特异性转录因子的mRNA表达情况。结果单纯血清培养基培养的牙乳头间充质细胞可在第4代后自发分化为成牙本质细胞表型;而添加106U/L LIF的含血清培养基,可使小鼠牙乳头间充质细胞的未分化表型稳定至第9代。无论细胞是否出现牙向分化,表现成牙间充质细胞特性的Msx1/Msx2、Pax9、Lhx6/Lhx7均有表达;而成牙本质细胞表型分化后尚能检测到DSPP、Sox9、Cbfα1、Osx等启动向矿化组织细胞终末分化的特异性基因表达。结论牙乳头间充质细胞的自发牙向分化模型可作为诱导其他成体间充质干细胞牙向分化时的阳性对照,其基因表达模式可为研究其他成体干细胞牙向分化后在基因水平上的变化提供佐证。
- 朱锋聂蓉蓉吴凌刘磊汤炜田卫东
- 关键词：白血病抑制因子基因表达
- 过表达牙本质涎磷蛋白的骨髓间充质干细胞部分牙向和骨向分化基因的表达被引量：2
- 2008年
- 目的观察小鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSC)过表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)后的形态学改变,并研究其部分牙向及骨向分化基因的表达情况。方法体外培养小鼠BM-MSC,通过腺病毒介导的方式将DSPP基因转染小鼠BM-MSC,通过标记基因GFP检测转染效率,观察转染后细胞的形态学改变,RT-PCR方法检测过表达DSPP的BM-MSC有无成牙和成骨基因的mRNA表达。结果成功获得小鼠BM-MSC,经腺病毒介导的DSPP基因转染BM-MSC的转染效率可达42.7%,转染后的细胞出现分化,似成牙本质样细胞。转染后细胞表达DSPP、DMP1、Msx1/2、Pax9、Lhx6/7、Sox9、Cbfα1、Osx、Col等多种牙向和骨向发育分化基因。结论过表达DSPP的BM-MSC出现细胞分化,并可表达多种牙向及骨向发育分化的基因。
- 朱锋聂蓉蓉吴凌刘磊汤炜田卫东
- 关键词：牙本质涎磷蛋白骨髓间充质干细胞腺病毒
- 小鼠牙本质涎磷蛋白基因重组腺病毒载体的构建被引量：2
- 2007年
- 目的应用AdEasy重组腺病毒载体系统,构建携带小鼠牙本质涎磷蛋白编码区基因的复制缺陷型重组腺病毒载体Ad-DSPP。方法将质粒pTRE2-DSPP中的小鼠DSPP编码序列亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV中构建重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-DSPP,酶切线性化后转入已含有病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌中进行同源重组。筛得的病毒质粒pAd-DSPP经酶切鉴定后,在293细胞中包装成重组腺病毒。荧光显微镜观察绿色荧光表达。扩增并纯化病毒,测定病毒滴度。结果重组腺病毒质粒经酶切鉴定证实成功构建了携带DSPP基因的重组腺病毒载体,转染293细胞后可出现明显的细胞病变效应,并观察到绿色荧光的表达,DSPP基因测序鉴定与genebank中公布序列一致。重组腺病毒的滴度为:2×109pfu/ml。结论应用AdEasy系统成功地构建了重组腺病毒载体Ad-DSPP,通过该系统携带的标记基因GFP可直观检测靶细胞转染和外源基因表达的情况,为进一步研究牙本质涎磷蛋白在牙齿发育中的作用奠定了基础。
- 朱锋聂蓉蓉刘磊汤炜郑晓辉吴凌田卫东
- 关键词：牙本质涎磷蛋白腺病毒载体绿色荧光蛋白同源重组
- 贴壁法获取脂肪基质细胞的体外研究
- ：探讨贴壁法获取脂肪基质细胞的可行性.方法：分别用贴壁法和消化法从小鼠脂肪组织中获取细胞，流式细胞仪比较两种细胞的CD44、CD34、CD45、sca-1、c-kit等表面特性，通过细胞技术比较两种细胞的增殖能力，另将两...
- 敬伟林云锋吴凌李晓宇刘磊郑晓辉汤伟田卫东
- 关键词：脂肪基质细胞贴壁法增殖能力
- 地塞米松诱导小鼠骨髓基质细胞成骨的分子机制
- 2007年
- 目的研究骨髓间充质细胞成骨分化的分子机制,为将其作为基因治疗的载体细胞奠定理论基础。方法取成年小鼠股骨骨髓,贴壁培养,分别用矿化诱导培养基(10-7M地塞米松、10mMβ-甘油磷酸钠和50mg/ml抗坏血酸)与骨形成蛋白2诱导,用RT-PCR检测Runx2,Osx和骨钙蛋白基因表达,茜素红染色鉴定钙节结。结果RT-PCR显示,矿化培养基诱导组仅有Osx和OCN表达,BMP2诱导组Runx2,Osx和OCN全部表达,而两组茜素红染色均呈阳性钙结节。结论地塞米松诱导的成骨作用中可能通过不同于BMP2的信号通路起作用。
- 段瑞平王晓卫吴凌张艳萍梁娜田卫东
- 关键词：地塞米松骨髓基质细胞
- 绿色荧光蛋白标记人脂肪基质细胞成骨分化能力体外实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的研究绿色荧光蛋白(GFP)基因体外转染人脂肪基质细胞的方法,并检测基因转染后细胞的生物学特性及分化潜能。方法体外分离培养人脂肪基质细胞,用重组腺病毒载体Ad-GFP及脂质体介导质粒pEGFP-C1两种方法转染GFP基因,通过流式细胞术观察比较GFP转染和表达的结果;倒置显微镜下观察细胞生长情况;将腺病毒介导的基因转染细胞经成骨定向诱导后,检测碱性磷酸酶表达和钙结节形成情况。结果重组GFP基因的腺病毒Ad-GFP转染的脂肪基质细胞的感染率达(42.5±1.5)%,16h即有GFP表达,7d时表达趋于稳定,感染6周时仍可见有GFP表达,明显优于脂质体转染组(转染效率最高为11.4%)。感染Ad-GFP后的脂肪基质细胞与未感染的对照组脂肪基质细胞成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)表达均逐渐增高,两组间差异无统计学意义(P>0.05);诱导21d后两组均见到茜素红钙盐染色阳性。结论重组GFP基因的腺病毒载体Ad-GFP可高效率感染脂肪基质细胞,基因转染后细胞的增殖分化能力未受到影响,可以作为一种高效可靠的人脂肪基质细胞标记方法。
- 林云锋敬伟陈希哲乔鞠李志勇严征斌吴凌田卫东
- 关键词：人脂肪基质细胞绿色荧光蛋白基因转染分化
- 不同成骨诱导作用下骨髓间充质干细胞的基因表达模式被引量：12
- 2006年
- 目的研究骨髓间充质干细胞不同成骨分化模式的分子调控机制,为将其作为骨组织缺损基因治疗的载体细胞奠定理论基础。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),传代扩增后分别用矿化培养基(100nmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/mL抗坏血酸)与重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2,500ng/mL)进行诱导,分别于诱导后1、2周行茜素红染色鉴定钙结节形成情况;诱导后1、2和3d时用RT-PCR检测Runx2、Osx、OCN和Col的基因表达情况。结果矿化诱导组和rhBMP-2诱导组,茜素红染色均呈阳性钙结节,但矿化诱导组细胞于1周后形成矿化结节,时间早于rhBMP-2诱导组(2周后形成矿化结节);RT-PCR显示,在矿化诱导组,Runx2在诱导的1、2、3d均没有表达,Osx在诱导后2、3d有表达,OCN和Col在诱导的1、2、3d均有表达;在rhBMP-2诱导组,Runx2和Osx于诱导的第2d开始表达,OCN和Col在诱导的1、2、3d均表达。结论与rhBMP-2相比,矿化培养基通过更为直接的信号传导方式调控着骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,因此矿化培养基诱导骨髓间充质干细胞形成矿化结节的能力强于rhBMP-2。
- 段瑞平吴凌林云锋刘磊汤炜田卫东
- 关键词：骨髓间充质干细胞骨形成蛋白-2基因表达模式
