周宏旭
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基质金属蛋白酶-2、9与胶质瘤间质血管形成关系的研究进展被引量：1
- 2005年
- 周宏旭于士柱
- 关键词：基质金属蛋白酶-2血管形成侵袭性生长肿瘤复发肿瘤间质
- 靶向表皮生长因子受体的shRNA抑制U251胶质瘤生长的实验研究被引量：5
- 2007年
- 目的 探讨靶向表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的RNA干涉（RNAi）技术抑制恶性胶质瘤体外细胞系U25l的EGFR表达后，在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法 在人EGFR开放阅读框的细胞内区酪氨酸激酶结构域选择1个siRNA靶序列、进行短发夹RNA（shRNA）表达载体psiRNA-2400的构建，并以含有随机序列的psiRNA-scr表达质粒为对照进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达。应用RT-PCR检测EGFR表达水平，应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导、靶向EGFR的shRNA可显著抑制U251细胞ECFR表达，Mr兀’法分析显示psiRNA-2400转染组细胞生长抑制率为68％；与对照组和psiRNA-scr转染组比较，细胞周期分析结果表明psiRNA-2400转染组G0～G1期细胞数没有明显变化，进入s期的细胞数较对照组减少了12．7％～13％，而进入G2期细胞则增加了10．5％～11、7％。Matrigel基质生长实验显示对照组和psiRNA-scr转染组细胞呈正常形态贴壁生长，而psiRNA-2400转染组细胞不能贴壁生长，呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-2400显著抑制皮下肿瘤生长，组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降、PCNA标记指数降低而GFAP表达上调。结论靶向EGFR的RNAi技术可以显著抑制U251细胞的EGFR表达，在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。因此，shRNA表达质粒介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性EGFR治疗的新策略。
- 康春生浦佩玉张志勇王广秀贾志凡裘明哲周宏旭于士柱
- 关键词：表皮生长因子受体短发夹RNA神经胶质瘤
- 生长抑制因子1基因核定位序列绿荧光蛋白融合表达载体的构建及表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建p33ING1b核定位序列(nuclearlocatingsequence,NLS)绿荧光蛋白融合表达载体,将其转染到人胚肺纤维母细胞系MRC5,建立稳定表达该融合蛋白的细胞模型。方法应用逆转录PCR获得p33ING1b的NLS序列,然后将NLS序列插入绿荧光蛋白融合表达载体pEGFP C1的多克隆位点,构建pEGFP C1NLS绿荧光蛋白融合表达载体,再用此载体转染MRC5细胞系,观察活细胞绿荧光蛋白的亚细胞定位。结果成功构建了pEGFP C1NLS绿荧光蛋白融合表达载体,由该载体表达的绿荧光蛋白NLS肽段融合蛋白产生的绿色荧光信号全部定位于胞核部位,而空载体转染的细胞表达的绿色荧光蛋白,绿色荧光信号定位于细胞浆中。结论在活细胞内,生理情况下P33ING1b完全定位于细胞核,并且在其亚细胞定位的转运过程中,NLS肽段起着决定性作用。
- 孙兆明于士柱张文治康春生周宏旭黄慧玲安同岭
- 关键词：质粒亚细胞定位
- GST-NLS(ING1)融合蛋白表达载体构建及表达纯化的研究被引量：8
- 2006年
- 目的构建P33ING1b核定位信号肽(NLS)与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白(GST-NLS)原核表达载体及建立GST-NLS纯化技术。方法先用RT-PCR从ING1基因中扩增编码NLS的cDNA片段,将其插入克隆质粒pbluescript-SK,再以克隆质粒NLS片段为模板,PCR扩增NLScDNA片段,并加入限制性酶切位点和终止子,进而将其插入原核表达质粒pGEX-5X-3,构建GST-NLS原核表达载体pGEX-5X-3-NLS,最后用IPTG诱导其在大肠杆菌(BL21)中表达,用谷胱甘肽-琼脂糖小珠亲和纯化表达的GST-NLS。结果酶切鉴定和测序分析显示,NLScDNA片段被成功插入pbluescript-SK多克隆位点;NLScDNA片段在pGEX-5X-3-NLS中的插入位点、碱基序列及读码框和终止子的次序完全正确,NLScDNA序列位于表达载体的GST序列下游,插入片段全长183bp。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-5-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和亲和纯化,从负荷pGEX-5X-3-NLS质粒的BL21菌株中获得了31.57ku的GST-NLS。结论成功建立了重组GST-NLS的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法学,为进一步研究p33ING1b入核运载机制提供了重要技术手段。
- 孙兆明于士柱安同周宏旭
- 关键词：基因重组融合蛋白
- 胶质母细胞瘤血管生成机制及抑制其生成的研究
- 人脑胶质母细胞瘤是中枢神经系统中恶性程度最高的肿瘤，其侵袭性生长往往是患者肿瘤复发、治疗失败和死亡的重要原因。而且胶质瘤间质血管增生在胶质瘤的侵袭性生长过程中具有重要作用。研究表明细胞外基质的降解在胶质瘤的侵袭过程中起关...
- 周宏旭
- 关键词：胶质母细胞瘤内皮抑素基因治疗侵袭性生长
- 文献传递
- 反义封闭MMP-9基因表达对胶质母细胞瘤细胞系增殖的影响
- 2010年
- 目的探讨反义封闭胶质瘤细胞MMP-9基因表达对胶质瘤细胞增殖的影响。方法利用基因重组的方法构建正义和反义MMP-9重组体;经脂质体介导,分别将pcDNA3.0空载质粒、正义重组体、反义重组体转染TJ905细胞;通过RT-PCR和Western blot检测转染细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平;利用免疫组织化学法分析了转染细胞中MMP-9和Ki-67的表达。结果经限制性酶切鉴定和DNA测序分析,基因重组成功,且正义与反义重组体插入位点间的序列方向正好相反。与TJ905对照组、空载体组和正义对照组相比较,转染反义重组体后的TJ905细胞中MMP-9mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P<0.001)。转染空载体和正义重组体后,TJ905细胞内MMP-9mRNA和蛋白的表达水平与未进行转染的TJ905细胞相比差异无统计学差异(P>0.05)。免疫组织化学结果显示反义封闭有效,MMP-9的表达下调,TJ905细胞增殖活性下降。结论转染反义MMP-9重组体可以有效抑制胶质母细胞瘤细胞的MMP-9基因的表达,同时可以抑制肿瘤细胞的增殖。
- 周宏旭于士柱王虔张丽侠安同岭
- 关键词：基质金属蛋白酶胶质瘤反义RNA
