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大鳄龟蛙病毒感染的PCR检测及组织病理分析: 2013年3月成都某海洋馆送检2只发病大鳄龟(Macrochelys temminckii),临床特征表现为:精神状态萎靡,爬行无力,对外界刺激反应迟钝;颈部和四肢局部红肿,腹甲溃烂,严重部位甚至穿孔,最后死亡。为明确大...; 余泽辉耿毅周燕邓梦玲刘丹陈成徐敬钧范玉蕾; 关键词：大鳄龟 PCR; 文献传递

大鲵蛙病毒LAMP检测方法的建立被引量：5: 2015年; 根据大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要核衣壳蛋白MCP编码基因的序列设计合成4条特异性引物,以重组pMD19-T-MCP质粒为模板,通过反应条件与反应体系优化,建立CGSRV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对CGSRV的最低检测限,并与巢式PCR和普通PCR进行比较。结果表明,该LAMP方法最佳反应温度为62℃,反应时间为40min,对CGSRV最低检测限5copies/μL,而巢氏PCR和常规PCR的检测限为50和5×103copies/μL,表明该LAMP方法的灵敏度显著高于巢氏PCR和常规PCR;且与淋巴囊肿病毒、鲫鱼出血病疱疹病毒2型、云斑尖塘鳢虹彩病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、迟钝爱德华菌、嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌等均无交叉反应;反应结束后加入荧光染料EtBr可肉眼判定粉色为阳性,而棕色则为阴性。因此,该方法对CGSRV的检测较巢氏PCR和常规PCR更为简便、快速、灵敏、特异,且不需昂贵仪器设备,更适合养殖现场检测,为CGSRV早期感染的快速检测提供了新方法。; 刘星星耿毅汪开毓周燕陈德芳黄小丽刘丹陈成; 关键词：环介导等温扩增

辣木叶总黄酮响应面法微波萃取工艺优化及其体外降糖效果观察被引量：17: 2015年; 利用响应面法优化微波萃取辣木叶总黄酮工艺。选取乙醇浓度、微波功率、提取时间、液料比为影响因素,总黄酮得率为评价指标。在单因素实验的基础上,通过4因素3水平Box-Behnken中心组合试验建立黄酮得率的二次多项式回归方程,研究以上因素对总黄酮得率的影响。结果表明最佳提取工艺条件为:乙醇浓度58%,微波功率397 W,提取时间8 min,液料比59∶1,该条件下,总黄酮得率为3.45%,与预期基本相符。采用Hep G2细胞研究辣木叶总黄酮体外降糖效果,检测该细胞24 h的葡萄糖摄取量。结果表明:在高糖环境下,辣木叶总黄酮能促进Hep G2细胞对葡萄糖的消耗;相同质量浓度下,经微波萃取的总黄酮降糖活性较回流提取得到的强。; 吉莉莉汪开毓罗晓波赵玲黄小丽周燕; 关键词：总黄酮微波萃取响应面法

一株传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的分离鉴定及其感染的病理学观察: 2014 年5 月,四川都江堰市某虹鳟养殖场幼鱼和鱼苗爆发一种致死性传染病,幼鱼和鱼苗死亡率分别高达40％和80％。为探究此次疫情病因,对病料进行了临床特征、病理剖解及组织学观察、病毒分离、人工感染、多重RT-PCR 鉴...; 余泽辉耿毅汪开毓周燕范玉蕾邓梦玲陈德芳欧阳萍黄小丽; 关键词：IHNV 病理损伤基因型虹鳟

似鲇高原鳅败血症病原菌的分离鉴定与病理学观察被引量：2: 2014年; 为确定一起似鲇高原鳅败血症疫情的病原,本实验通过无菌操作从病鱼体内分离到一株优势菌(GYQ),以腹腔注射与浸泡的方式进行人工感染试验,证明其为似鲇高原鳅败血症的病原菌。根据分离菌的形态、生理生化特性,结合16S r DNA和gyr B基因序列测定(KF952599和KJ001821)与系统发育分析,将其鉴定为鮰爱德华氏菌(E.ictaluri)。病鱼组织器官具有典型的败血症病理变化,以全身多组织器官充出血、细胞变性、坏死以及炎性细胞侵润为主要特征,尤其是肝、肾、脾、肠和脑较为严重。药敏结果显示该菌对氟苯尼考、强力霉素等6种药物表现为敏感;对庆大霉素等4种药物表现为不敏感。; 周燕耿毅汪开毓阳磊刘丹徐敬钧陈德芳黄小丽; 关键词：败血症病理损伤

西伯利亚鲟海豚链球菌的分离鉴定及毒力基因检测被引量：19: 2015年; 2013年8—9月,四川雅安汉源湖养殖的西伯利亚鲟发生一种以体表溃疡、内脏出血和心外膜囊肿为特征的传染病。为明确其病因,本研究从自然发病鱼的肝、脾和肾进行了病原菌的分离、人工感染、分离菌的表型特征和分子生物学特征的检测。结果从患病鱼体内分离到一株G+链状球菌(Ab130920),人工感染实验证实了其病原性,生理生化特性与海豚链球菌(ATCC29178)基本一致;16S r DNA序列(Gen Bank登录号:KJ162337)与Gen Bank中S.iniae16S r DNA序列同源性最高,在以16S r DNA序列及其Gen Bank中同源性较高的相关序列构建的系统发育树上,分离菌与海豚链球菌聚为一支;同时,在基于S.iniae lct O基因的特异性PCR检测中,从分离株基因组DNA扩增出预期大小的870 bp条带,进而鉴定分离菌Ab130920为S.iniae。在对cps D、sim A、sag A、pdi和scp I等5种S.iniae毒力基因的多重PCR检测中,分离菌均扩增出相应大小的特异性片段,表明其为一毒力较强的菌株,与人工感染实验的高致病性结果相佐证;药物敏感性检测发现其对阿莫西林、强力霉素、氟苯尼考等抗菌药物敏感,但对新生霉素、利福平、氧氟沙星耐药。; 邓梦玲耿毅刘丹周燕汪开毓黄小丽陈德芳余泽辉陈成; 关键词：海豚链球菌 RDNA 毒力基因

大鲵蛙病毒巢氏PCR检测方法的建立被引量：9: 2014年; 参照GenBank已收录的大鲵蛙病毒MCP基因序列设计特异性引物,建立基于大鲵蛙病毒特异性引物的巢式PCR检测体系。本试验利用大鲵蛙病毒CGSV主要核衣壳蛋白MCP基因保守区,设计内引物和外引物并制备了重组质粒pMD19-T作为阳性对照标准品。灵敏度试验结果显示,巢氏PCR的敏感性较普通PCR的敏感性高1 000倍;而且与草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)、鲫鱼疱疹病毒2型(Goldfish herpes virus,CyHV-2)、云斑尖塘鳢虹彩病毒(Marbled sleepy goby iridovirus,MSGIV)、迟钝爱德华菌(Edwardsiella tarda)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)等无交叉反应。该体系具有简便、快捷、特异性高、低成本等特点,为大鲵蛙病毒检测提供了一项重要的技术手段。; 刘星星耿毅周赵英汪开毓黄小丽陈德芳周燕

RNA干扰对大鲵蛙病毒主要功能基因表达及其增殖的影响被引量：2: 2017年; 采用q PCR与病毒滴度测定观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)对大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)、甲基转移酶(methyltransferases,MTases)、DNA多聚酶(DNA polymerase)基因表达与病毒增殖的影响。结果表明,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)能推迟鲤鱼上皮瘤细胞(epithelioma papillosum cyprini,EPC)出现病变,且病变程度也较对照组轻。在各功能基因表达量上,NC-FAM对照组与阴性对照组差异不显著(P>0.05);而干扰组的干扰率极显著高于阴性对照组,其中siR-DP-1组siRNA对MCP基因的干扰率为79%,极显著高于其余组(P<0.01);siR-MT-1、siR-MT-2组siRNA对MTases基因的干扰率为77%,极显著高于其余组(P<0.01);siR-DP-1组siRNA对DNA polymerase基因的干扰率为79%,极显著高于其余组(P<0.01)。干扰实验组病毒滴度与NC-FAM对照组和阴性对照组相比也有不同程度的降低。阴性对照组lg TCID50为8.362,NC-FAM对照组lg TCID50为7.848,siR-MCP、siR-MT、siR-DP实验组最低lg TCID50分别为5.764、5.317、5.362。证实RNAi能够抑制CGSRV主要功能基因的表达并影响病毒的复制。; 牟维豪周燕耿毅汪开毓余泽辉李亚军黄小丽欧阳萍陈德芳; 关键词：RNA干扰基因表达病毒滴度

大鳄龟蛙病毒感染的PCR检测及组织病理分析: 2013 年3 月成都某海洋馆送检2 只发病大鳄龟(Macrochelys temminckii)，临床特征表现为：精神状态萎靡，爬行无力，对外界刺激反应迟钝；颈部和四肢局部红肿，腹甲溃烂，严重部位甚至穿孔，最后死亡。为...; 余泽辉耿毅周燕邓梦玲刘丹陈成徐敬钧范玉蕾; 关键词：大鳄龟 PCR

似鲶高原鳅温和气单胞菌的分离鉴定及其感染的病理损伤被引量：7: 2014年; 2013年9月,四川雅安某似鲶高原鳅养殖场发生以体表出血、皮肤溃疡、内脏器官肿大、出血与坏死为特点的疾病。从自然发病的似鲶高原鳅肝与肾分离到1株G-短杆菌（XJJ130928）,其在BHI平板上28℃培养24 h,形成灰白色、表面光滑、边缘整齐、半透明状微隆的圆形菌落,人工感染证实其为本次似鲶高原鳅发病的病原菌。根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为温和气单胞菌Aeromonas sobria;进一步的16S rRNA和gyrB基因序列分析表明,分离株的16S rRNA与gyrB基因序列（GenBank登录号：KF761305与KJ139988）在GenBank中进行Blast比对与A.sobria同源性最高。在以分离株16S rRNA和gyrB基因序列及GenBank中同源性较高的序列构建的系统发育树上,分离株与A.sobria聚为一族,其同源性分别为96.0%-99.0%与94.5%-98.0%,结合生理生化特性鉴定分离菌为A.sobria。该菌对头孢西丁、亚胺培南、强力霉素、氟苯尼考和氧氟沙星等敏感,对磺胺甲基异恶唑、洛美沙星、环丙沙星中度敏感,对氨苄青霉素、链霉素、卡那霉素耐药。组织病理学观察发现,A.sobria感染似鲶高原鳅对多组织器官都造成明显的病理损伤,尤其是肝、肾、脾、肠的损伤较为严重,表现为明显的淤血、出血,变性,坏死及炎症细胞浸润。; 徐敬钧耿毅汪开毓陈成周燕陈德芳黄小丽蒲云丹; 关键词：温和气单胞菌 RRNA GYRB 病理损伤

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周燕

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