尹华
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝细胞核因子3β调控小鼠体内HBV转录和复制的实验研究
- 2008年
- 目的应用复制型HBV小鼠模型观察肝细胞核因子3β(HNF3β)对小鼠体内HBV转录和复制的调控作用。方法通过尾静脉高压注射法将复制型HBV重组质粒pHBV4.1和大鼠HNF3β表达质粒pCMVHNF3β导入小鼠体内,用Northern吸印杂交检测小鼠肝组织中HBV3.5kb、2.4/2.1kb、0.7kb mRNA的转录情况,Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果经小鼠尾静脉高压注射法体内转染质粒pHBV4.1后,小鼠肝组织中检测到HBV3.5kb、2.4/2.1kb mRNA转录信号和HBV DNA复制中间体信号;与共转染pHBV4.1和空载质粒pCMVpA对照组相比,共转染pHBV4.1和pCMVHNF3β使HNF3β过量表达,明显降低了小鼠体内HBV RNA转录和DNA复制水平。结论肝富集转录因子HNF3β对小鼠体内HBV转录和复制具有抑制作用,有可能成为今后抗HBV生物治疗新的靶点。
- 韩红霞刘凤君侯全玲王月宾尹华崔尧丽唐红
- 关键词：乙型肝炎病毒转录
- 复制型HBV重组腺病毒的制备被引量：2
- 2008年
- 目的 通过细菌体内同源重组方法，构建含1．3拷贝HBV DNA片段（HBV4．1）的HBV复制型重组腺病毒。方法从质粒pTh—HBV4．1上获取HBV4．1片段，插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack—CMV中，构建含HBV4．1的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV／HBV4．1。然后在大肠杆菌BJ5183内与pAdEasy—1进行同源重组。形成重组腺病毒质粒pAd—GFP／HBV4．1，经脂质体2000转染HEK293细胞进行包装和扩增，获得腺病毒Ad-GFP／HBV4．1。通过荧光显微镜下观察GFP绿色荧光蛋白的表达，检测腺病毒滴度和感染效率；采用PCR法检测腺病毒DNA上有无HBV基因组存在。结果经酶切鉴定确认含HBV穿梭质粒pAdTrack—CMV／HBV4．1扣重组腺病毒基因组质粒pad—GFP／HBV4．1构建成功；GFP荧光检测提示重组腺病毒Ad-GFP／HBV4．1已成功包装；PCR扩增表明重组腺病毒内携带有HBVDNA片段。在HEK293细胞中获得的病毒滴度可达（4．2—4．8）×10^7 efu／ml；当MOI为100时，感染HEK293细胞的效率〉90％。结论成功构建了携带1．3拷贝HBV基因组的重组腺病毒Ad-GFP／HBV4．1，为进一步建立高水平HBV复制型细胞和动物模型以用于HBV生物学特性的研究奠定了基础。
- 尹华周陶友李红王月宾韩红霞唐红
- 关键词：腺病毒乙肝病毒同源重组
- 转基因小鼠在乙肝发病机制研究中的应用
- 2008年
- 尹华唐红
- 关键词：小鼠小家鼠转基因基因转移HBSAGCCCDNA
- 乙型肝炎病毒全长基因的扩增及克隆
- 2008年
- 目的建立血清标本经聚合酶链反应(PCR)扩增乙型肝炎病毒(HBV)全长基因的新方法,并初步进行克隆分析,从而为HBV分子生物学及致病机理研究奠定基础。方法针对位于整个HBV基因序列中的两个缺口区设计含酶切位点的引物,扩增3.2 kb HBV全长DNA,经酶切及连接后克隆入PUC18载体。结果用PCR方法成功获得了3.2 kb HBV DNA,经SalⅠ酶切克隆入PUC18载体,获得重组质粒PUC18/HBV3.2,酶切鉴定和PCR扩增证实重组质粒中含有3.2 kb HBV全长DNA,成功构建了HBV全基因克隆。结论成功建立了从患者血清中克隆HBV全基因组的方法,为从全基因水平深入研究乙型肝炎病毒变异与致病机理的关系奠定了基础。
- 李红周陶友尹华张媛媛孙辉陈杨唐红
- 关键词：乙型肝炎病毒聚合酶链反应
