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高GC含量DNA模板的PCR扩增被引量：6: 2013年; 目的：探索高GC含量DNA的PCR扩增条件，为扩增达托霉素生物合成基因簇及拼接奠定基础。方法：在PCR扩增体系中，使用高保真的聚合酶及添加不同浓度的DMSO、7-deaza-dGTP等增强剂，并选择合适的PCR循环程序，优化富含GC的DNA的PCR扩增条件。结果：向反应体系中额外添加1%~4%的DMSO可以显著提高富含GC的DNA的PCR扩增产物量，但会降低其特异性；7-deaza-dGTP可以提高扩增产物的特异性及保真度，但产量会有所下降。应用touch down PCR并在体系中添加7-deaza-dGTP能够提高扩增产物的特异性和产率，增加扩增的保真度。结论：应用优化的PCR扩增条件将所有达托霉素生物合成基因簇分段扩增出来，并可扩增出长达6 kb的片段，且序列完全正确，可以进行后续拼接。; 邢玉华戴素琴刘体颜王微谭俊杰曲国龙刘刚陈惠鹏; 关键词：PCR

大肠杆菌-链霉菌穿梭型BAC载体的构建及功能验证: 2013年; 目的构建可由大肠杆菌接合转移至链霉菌并整合至其基因组的穿梭型BAC载体,以实现大片段基因簇在大肠杆菌中完成遗传操作后,转移至链霉菌中进行异源表达。方法从原始B载体pBeloBAC11出发,利用pKD46介导的Red同源重组技术,将一段包含接合转移元件oriT、定点整合元件attp-int和安普霉素抗性基因Am的DNA片段替换其上的氯霉素抗性基因,该DNA片段通过PCR扩增得到,两端为待替换氯霉素抗性基因上下游55 bp的同源臂,替换后的载体通过酶切连入链霉菌组成型启动子ermEP1P2和绿色荧光蛋白(GFP)基因以验证其接合和整合功能。结果原载体pBeloBAC11的氯霉素抗性基因被成功替换,得到载体pBTIBAC1,利用该载体可在变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)TK24和1326中表达GFP,在pBTIBAC1上插入新的多克隆位点(MCS)后得到载体pBTIBAC11。结论 pBTIB AC11载体可通过接合转移携带外源基因片段进入链霉菌并整合至其基因组中,同时保留了原有BAC载体的功能元件,为大片段在链霉菌中的异源表达奠定了基础。; 戴素琴周围邢玉华刘体颜谭俊杰曲国龙王微刘刚陈惠鹏张部昌; 关键词：大肠杆菌链霉菌属 RED同源重组

胰高血糖素样肽1或其类似物体外生物活性检测方法的建立被引量：4: 2015年; 目的:通过对不同活性检测方法的综合比较,筛选最适的胰高血糖素样肽1(GLP-1)或其类似物的体外活性检测方法,为GLP-1类似物的体外生物活性检测奠定基础。方法:以GLP-1作为阳性药物,用MTT方法检测其对RIN-m-5F、MIN6细胞增殖的影响;用ELISA方法检测其对INS-1、MIN6细胞胰岛素分泌量的影响;用ELISA方法检测其对BHK-GLP-1R细胞cAMP分泌水平的影响。通过对上述方法的综合比较,筛选出最适的活性检测方法。结果:GLP-1对细胞增殖的影响实验结果并不显著,对胰岛素分泌量影响的实验效果明显,对cAMP分泌水平的实验无明显效果。结论:ELISA检测GLP-1或其类似物对MIN6细胞胰岛素分泌量实验可用于GLP-1或其类似物的体外活性检测。; 邵妤赵威王微曲国龙阚乃鹏凌婧怡谭俊杰刘刚陈惠鹏; 关键词：2型糖尿病胰高血糖素样肽1 类似物活性检测

启动子3M1F及其应用: 本发明公开了启动子3M1F及其应用。本发明提供的启动子，命名为3M1F，为序列表的序列1自5’末端第7至93位核苷酸所示的DNA分子。本发明还保护一种DNA分子(融合基因)，自上游至下游依次包括序列表的序列1自5’末端第...; 刘刚谭俊杰阚乃鹏陈惠鹏王微凌静怡曲国龙; 文献传递

启动子17M11D及其应用: 本发明公开了启动子17M11D及其应用。本发明提供的启动子，命名为17M11D，为序列表的序列1自5’末端第7至94核苷酸所示的DNA分子。本发明还保护一种DNA分子(融合基因)，自上游至下游依次包括序列表的序列1自5’...; 刘刚谭俊杰阚乃鹏陈惠鹏王微凌静怡曲国龙; 文献传递

可用于TNT检测的新的生物传感元件topAp4的发现被引量：1: 2015年; 目的在大肠杆菌基因组中筛选可用于TNT检测的基因传感元件。方法利用随机酶切方法不完全酶切大肠杆菌K-12 MG1655基因组,构建基因组启动子文库,通过多轮筛选法获得可感应TNT的文库元件。通过数据库分析,并在灵敏度、特异性、起效时间各方面对新的传感元件在TNT诱导下的启动活性进行考察,进一步确证了文库元件中发挥作用的功能序列。结果和结论成功构建了大肠杆菌K-12 MG1655基因组启动子文库,并从中筛选得到了一个可感应TNT的文库元件,经过进一步分析确证了其发挥功能的序列top Ap4,并在灵敏度、特异性、起效时间上都表现出较好的启动活性。上述研究工作发现了top Ap4对TNT的感应作用,并验证了其具有较好的启动活性,为TNT检测生物传感器的构建打下了良好的基础。; 阚乃鹏谭俊杰王微凌婧怡曲国龙邵妤金晶刘刚陈惠鹏; 关键词：合成生物学启动子三硝基甲苯

利用BglBrick方法进行HSA/Exendin-4长效融合蛋白的快速组装: 2014年; 目的:通过合成生物学的BglBrick方法快速构建不同种类HSA/Exendin-4长效融合蛋白,为进行各HSA/Exendin-4融合蛋白生物学活性的筛选比较奠定基础。方法:选用酵母表达载体pPICZαA质粒,构建pPICZαA-E4和pPICZαA-HSA两种基础Brick表达载体,运用BglBrick方法,实现了不同数目Exendin-4分子在HSA的不同末端的快速组装。将构建出的10种HSA/Exendin-4融合蛋白,转入毕赤酵母菌KM71H中,用甲醇诱导目的蛋白的表达。结果:用BglBrick方法构建的HSA/Exendin-4融合蛋白在毕赤酵母中都成功诱导表达出相应的目的蛋白。结论:利用BglBrick方法能够实现HSA长效融合蛋白的快速组装。; 邵妤曲国龙金晶王微谭俊杰阚乃鹏李玉霞刘刚陈惠鹏; 关键词：EXENDIN-4 合成生物学

启动子32M6A及其应用: 本发明公开了启动子32M6A及其应用。本发明提供的启动子，命名为32M6A，为序列表的序列1自5’末端第7至94位核苷酸所示的DNA分子。本发明还保护一种DNA分子(融合基因)，自上游至下游依次包括序列表的序列1自5’末...; 刘刚谭俊杰阚乃鹏陈惠鹏王微凌静怡曲国龙; 文献传递

启动子recEA4及其应用: 本发明公开了启动子recEA4及其应用。本发明提供的启动子，来源于大肠杆菌K-12 MG1655，命名为recEA4启动子，为序列表的序列1所示的DNA分子。本发明还保护一种DNA分子(融合DNA)，自上游至下游依次包括...; 刘刚谭俊杰阚乃鹏陈惠鹏王微凌静怡曲国龙; 文献传递

启动子7M4D及其应用: 本发明公开了启动子7M4D及其应用。本发明提供的启动子，命名为7M4D，为序列表的序列1自5’末端第7至93位核苷酸所示的DNA分子。本发明还保护一种DNA分子(融合基因)，自上游至下游依次包括序列表的序列1自5’末端第...; 刘刚谭俊杰阚乃鹏陈惠鹏王微凌静怡曲国龙; 文献传递

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曲国龙