曹瑜
- 作品数：18 被引量：49H指数：4
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：四川省自然科学基金国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学环境科学与工程更多>>
- 大肠杆菌植酸酶的原核表达及酶学性质被引量：6
- 2009年
- 将大肠杆菌植酸酶appA基因重组于表达载体pET32a中,导入大肠杆菌Origami(DE3)构建工程菌Origami(DE3)-pET32a-appA.对表达的appA重组植酸酶经Ni柱亲和纯化、SDS-PAGE分析表明,纯化后条带单一,酶的纯度较高.对其酶学性质的研究表明,该酶反应的比活力为3.36×106U/mg;最适pH为4.5;最适温度为60℃;在80℃和85℃的耐干热能力超过耐湿热能力;在37℃下,Mg2+﹑Ca2+﹑Mn2+对酶活性有促进作用,Co2+﹑Cu2+﹑K+对酶活性有不同程度的抑制作用,而Fe3+和Zn2+对酶活性有强烈的抑制作用;此外,该酶还具有非常好的抗胃蛋白酶水解的能力和部分抗胰蛋白酶水解的能力.
- 黄敏徐辉曹瑜朱俊张飞伟尤芳芳乔代蓉曹毅
- 关键词：原核表达酶学性质
- 一株杀扑磷高效降解菌的分离、鉴定及降解条件的响应面法优化被引量：3
- 2016年
- 有机磷杀虫剂杀扑磷对防治蚧壳虫有特效,常用于柑橘类果树防治但其残留有毒有害,自然界降解速度比较缓慢.本研究分离并分类鉴定了能高效降解杀扑磷的菌株,进一步采用Box-Benhnken法设计3因素3水平的响应面试验优化降解条件.结果显示,从富集培养基中分离到了一株杀扑磷高效降解细菌MS1-2,经鉴定为膝形假单胞菌(Pseudomonas geniculata);单因素选择温度、NaCl浓度和pH,通过检测杀扑磷残留量对杀扑磷降解条件进行响应面优化,转速设置为100 r/min,接种量为0.4%时,温度和Na Cl浓度为主要影响因素,pH为次要因素,最佳降解条件为温度29.74℃,pH 6.48,Na Cl浓度0.63%.在此条件下培养24 h,杀扑磷从100 mg/L降解到57.73 mg/L,降解率为42.27%,比优化前提高了6个百分点.因此菌株MS1-2能有效降解杀扑磷,优化降解条件后降解率有所提高.
- 王川冯灵玉曹瑜吴茜张玮佳付佳琪曹毅乔代蓉
- 关键词：杀扑磷降解响应面优化
- 盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶不同结构域蛋白的表达纯化及其抗体的制备与分析被引量：6
- 2009年
- 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是迄今为止世界上发现的最耐盐的真核光合生物,而甘油是盐藻用于调节细胞内外渗透压变化的关键调渗物质.3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是盐生杜氏藻甘油合成途径中的关键酶.与已经报道的其它物种的GPDH基因不同,盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶(Ds.GPDH)基因具有两个独立的功能结构域,即丝氨酸磷酸化酶结构域(SGPP domain)和3-磷酸甘油脱氢酶结构域(GPD domain).本实验在已克隆的Ds.GPDH2基因的基础上,以含GPDH2全基因序列的T质粒载体(pMD18-T-GPDH2)为模板,PCR扩增分别得到两个单结构域片段(SGPP与GPD),以及双结构域片段(GPDH),构建了pET32a-SGPP、pET32a-GPD和pET32a-GPDH三种原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达.纯化蛋白制备抗原,制备出3个多克隆抗体.WesternBlot和交叉反应分析显示通过重组蛋白制备的多克隆抗体具有很高的特异性.
- 黄秦曹瑜吴鹏史岩张书乔代蓉曹毅
- 关键词：盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶结构域纯化WESTERNBLOT
- 酸性环境中木聚糖酶高产菌株的筛选及鉴定
- 2009年
- 从pH 5.0的酸性土壤中筛选出一株木聚糖酶高产茵株A4,菌体固态发酵产酶条件优化表明,最佳发酵培养基配方为:麸皮37.79%,玉米芯9.10%,NH_4NO_3 0.51%,MnSO_41.60%,水50%,接种量2.0%,最适发酵温度28～32℃,发酵培养48～52h,木聚糖酶活力最高达到750 U/g(碳源)。该菌株所产木聚糖酶的最适pH为4.8,比野生黑曲霉的pH值低。通过生长形态和分子生物学方法相结合的鉴定该菌株为黄曲霉。
- 韩锐吴鹏曹瑜马根马小珍马志鹰许悟曹毅乔代蓉
- 关键词：木聚糖酶菌种鉴定发酵优化酶学性质
- 一种高持水性蛋液及其制备方法
- 一种高持水性蛋液及其制备方法，按重量份计包括下述组分：蛋液100份，食盐0.5-2份，白砂糖2-6份，CMC为0.02-0.1份，复合磷酸盐0.3-1份；机械剪切条件：剪切速率为500-2000rpm，剪切时间5-20m...
- 刘福权赵志峰谢王俊曹瑜
- 一种高起泡性蛋液及其制备方法
- 本发明公开了一种高起泡性蛋液的制备方法，包括以下步骤：将蛋液与白砂糖或盐在机械剪切下混合均匀，静置消泡后过 80～100目筛；于‑18～‑20℃条件下冷冻，即得。本发明中的蛋液只添加了白砂糖或食盐作为辅料，并通过冷冻时间...
- 赵志峰刘福权廖梓羽曹瑜何强
- 文献传递
- 植物中3-磷酸甘油脱氢酶基因家族的物种特异性进化分析
- 2016年
- 3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是一种在磷酸甘油酯的代谢过程中起重要调节作用的关键酶,研究植物中3-磷酸甘油脱氢酶基因家族的进化历史及其多样性对进一步探索其作用机制具有重要意义.以20个已报道的GPDH基因作为查询序列,与19种代表性的植物物种的基因组分别进行BLASTP和t BLASTN比对以及隐马尔科夫模型搜索,获得基因家族新成员,构建系统发育树,并对其进行基因结构、蛋白模体、功能差异性以及适应性进化分析.预测得到了75个新的GPDH基因家族成员,系统发育分析表明,植物中的GPDH基因属于3个单系类群(命名为族群I、族群II和族群III),并且在进化过程中主要分为两个进化枝,说明GPDH基因家族源自两个GPDH祖先基因;功能差异性分析表明,氨基酸特异性位点的选择性约束作用于不同族群的GPDH基因上,并且导致了不同族群多样化之后的特异性进化,同时,在族群I/III和族群II/III中也发现了Type-II功能差异性,表明氨基酸的理化性质也发生了本质的改变;适应性进化分析以及ka/ks比值分析表明,GPDH基因家族在物种特异性复制之后的进化过程中受到了纯化选择作用.因此,GPDH基因家族在其进化过程中受到不同的选择压力而出现了不同的进化方向,形成了多样化的族群.此外,对该基因家族进行的系统的分子进化探索为植物中GPDH基因家族的进一步生物化学和遗传方面的研究以及基因组分析提供了数据基础,在GPDH基因家族分析中的结果与发现也为研究其他基因家族提供了有力的帮助.
- 郎小强魏从翀秦世尚曹瑜徐辉乔代蓉曹毅
- 关键词：3-磷酸甘油脱氢酶系统发育分析
- Fe_3O_4@SiO_2-CHO共价固定脂肪酶条件的响应面优化及固定化酶催化生产生物柴油被引量：4
- 2017年
- 生物柴油是一种可再生且环保的化石燃料的替代品,研究固定化酶生产生物柴油对解决石化燃料耗尽和环境保护具有重要意义.将制备的纳米材料Fe_3O_4@SiO_2-CHO与伯克霍尔德氏菌脂肪酶以共价交联的方式固定,通过响应面法(RSM)优化其固定化的条件,然后以固定化酶催化橄榄油生产生物柴油,并对影响生物柴油制备的因素进行优化,最后通过GC-MS检测转酯产物的成分.结果表明:在加酶量30.22 m L、戊二醛浓度2%、固定化温度40℃、固定化时间4 h时得到最大的固定化脂肪酶酶活和固定化效率,分别为10 038 U/g和96.9%.然后以此最佳条件制得的固定化酶催化制备生物柴油,得到最优条件为加酶量1.5 g、醇油比4:1、反应温度30℃、反应时间4 h.最后用GC-MS分析所得产物,得到最大转酯效率为98.84%,且固定化酶重复转酯10次后,转酯效率仍可达90%.本研究获得的Fe_3O_4@SiO_2-CHO固定化酶不仅能在短时间内催化得到很高的生物柴油产量,且易回收、可重复使用、生产成本大大降低,是工业化生产生物柴油的一种高效环保的生物酶催化剂.
- 马晓瑞秦家亮吴海珍许毅曹瑜乔代蓉曹毅
- 关键词：生物柴油
- 播娘蒿转录因子DsCBF与CRT/DRE元件的相互作用被引量：2
- 2010年
- CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的一种调控转录激活因子,CBF蛋白AP2结合domain可与COR基因启动子CBT/DRE元件特异性地结合,启动耐寒基因COR的表达.为研究播娘蒿DsCBF的功能,构建pET32a-DsCBF原核表达载体,通过冻融法转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核表达,并通过镍亲和层析纯化CBF蛋白.利用EMSA(Electrophoretic mobility shift assay)分析DsCBF蛋白与播娘蒿DsCOR基因的启动子上CRT/DRE元件的相互作用.EMSA结果显示,DsCBF蛋白与含有CCGAC核心序列及TATA-box和AT-TA回文结构的50bp探针结合有滞后现象,表明与DsCOR启动子上的CRT/DRE元件有特异性结合;而与仅有CCGAC的CRT/DRE核心序列的40bp探针结合则无滞后现象,表明DsCBF与蛋白结合的识别可能与TATA-box和AT-TA回文结构有关.
- 王乐李晶曹瑜张玲巨艳乔代蓉曹毅
- 关键词：播娘蒿CBFEMSA银染
- 紫外诱变选育高产丁二酮乳酸菌株及其低成本发酵优化被引量：1
- 2017年
- 2,3-丁二酮是一种常用的安全食品添加剂,为了提高微生物发酵中菌株的丁二酮产量,从泡菜水样品中分离筛选出一株野生型高产丁二酮菌株,并进行紫外诱变选育以及发酵条件优化.筛选获得高产丁二酮野生型乳酸菌株(1)-2,产量为67.02 mg/L,经16S r DNA分子鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).紫外诱变获得高产丁二酮突变株U13,产量为127.88 mg/L.对突变前后菌株几种丁二酮代谢相关酶酶活变化的比较结果显示,突变株丁二酮产量的提高是因为乳酸脱氢酶减少及乙酰乳酸合成酶增加.正交实验优化突变株U13的最佳丁二酮发酵条件为接种量3%,初始pH 6.6,葡萄糖30 g/L,组合氮源(蛋白胨:酵母粉:牛肉膏=2:1:2)20 g/L,柠檬酸氢二铵3 g/L,乙酸钠2 g/L,吐温-80 1 m L/L,K_2HPO_4 2 g/L,Mg^(2+)2 mmol/L,Mn^(2+)0.7 mmol/L,Cu^(2+)2 mmol/L,温度为37℃.利用廉价碳氮源淀粉及小麦麸皮替代原有碳氮源,淀粉替代率不超过20%、小麦麸皮替代率不超过40%时,丁二酮产量降幅比较低.本研究通过诱变选育和发酵条件优化,提高了菌株丁二酮产量,并通过廉价碳氮源替换降低了成本,可为丁二酮的微生物工业发酵提供参考.
- 张白梅徐辉曹瑜刘博胡超李宪玲史红霞曹毅乔代蓉
- 关键词：植物乳杆菌紫外诱变发酵优化小麦麸皮
