朱哲
- 作品数：10 被引量：33H指数：5
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 内皮祖细胞复合血管无细胞基质替代输尿管的可行性被引量：1
- 2010年
- 背景:临床治疗输尿管缺损,缺乏有效的输尿管替代物,而无细胞基质在体内单独作为支架,常引起替代段输尿管狭窄,但内皮祖细胞移植能改善缺血组织,参与血管新生。目的:初步探讨内皮祖细胞复合的血管无细胞基质替代输尿管的可行性。方法:将自体猪来源的内皮祖细胞以及平滑肌细胞一起种植在同种异体的颈动脉来源的血管无细胞基质中,体外孵育后进行猪长段输尿管的替代。结果与结论:移植后4周,无细胞基质替代物已经开始与输尿管融合,替代物内可以明显见到上皮细胞层,肌细胞层以及新生的血管。但在移除输尿管支架管后,也就是在移植后12周的替代物标本中,发现移植物的萎缩和管腔的明显狭窄,移植物周围出现严重的纤维化炎症反应。替代段上方输尿管明显扩张积水,同侧肾脏明显萎缩,而且已经失去功能。
- 沈海波朱哲潘俊陈方
- 关键词：内皮祖细胞血管无细胞基质输尿管
- 新西兰白兔阴茎海绵体无细胞基质制备的实验研究
- 目的：探讨阴茎海绵体无细胞基质的制备方法。方法：取成年雄性新西兰白兔的阴茎海绵体,以 Triton-X 100与 NH3H2O 联合提取法进行脱细胞处理。获得的细胞外基质采用 HE 染色,评价去细胞效果。结果：脱细胞处理...
- 陈俊陈方潘骏朱哲杜玉峰齐隽
- 文献传递
- 羊水来源胎儿间充质干细胞向成骨细胞的诱导分化被引量：1
- 2009年
- 背景:羊水细胞已广泛应用于与基因突变有关疾病的产前诊断,但目前关于羊水来源胎儿间充质干细胞的分离培养、细胞表面特征鉴定、细胞分化及其应用前景的文献并不多见。目的:体外诱导孕中期羊水来源的胎儿间质干细胞向成骨细胞方向分化。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-08/2006-05在新华医院实验中心完成。材料:10例羊水标本取自孕18~22周行产前诊断或流产的孕妇,取前均征得孕妇本人同意。方法:采用机械手段挑取孕中期羊水细胞培养体系中的胎儿间充质干细胞集落,体外培养扩增。取第3代胎儿间充质干细胞,以100nmol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸和50mg/L维生素C持续诱导14d。主要观察指标:免疫组化染色检测碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原的表达,Western Blot蛋白印记法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达,Von Kossa染色法检测钙结节形成能力,激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白形成。结果:分离出的胎儿间充质干细胞为CD44和HLA-ABC阳性,CD34、CD45、HLA-DR阴性,符合间充质干细胞特点。成骨诱导14d后,细胞碱性磷酸酶染色阳性率达91%,Ⅰ型胶原阳性率达87%;表达Ⅰ型胶原蛋白;随诱导时间的延长钙结节逐渐增多、增大;镜下可见细胞胞质中的微丝呈绿色荧光,细胞周围的微丝形成致密的周围束。结论:羊水来源的胎儿间充质干细胞可以分化为成骨细胞,且与典型的成骨细胞具有相似的形态学和生物学特征。
- 沈海波朱哲潘骏陈方
- 关键词：间充质干细胞羊水成骨细胞
- 羊水来源胎儿间充质干细胞定向诱导为脂肪细胞的研究被引量：5
- 2007年
- 目的:研究体外诱导孕中期羊水来源胎儿间质干细胞(M SCs)分化为脂肪细胞。方法:机械手段挑取孕中期羊水细胞培养体系中的胎儿M SCs集落,培养扩增后,通过流式细胞仪检测表面抗原表达进行鉴定。取第3代胎儿M SCs,IBM X、胰岛素、氢化考的松等诱导其向脂肪细胞分化。倒置相差显微镜观察诱导后细胞形态的变化。诱导20 d后,油红O染色检测胞内中性脂肪并计算阳性细胞率,W estern Blot蛋白印记法检测PPA Rγ的表达。结果:机械手段分离出的胎儿M SCs为CD 44阳性,CD 34、CD 45、H LA-D R阴性,符合M SCs特点。诱导72 h后,细胞内有脂滴出现,随着时间延长,脂滴逐渐增加并融合为脂泡,细胞由梭形转变为圆形或多角性。20 d后85%以上胎儿M SCs变为油红O染色阳性,W estern Blot显示诱导20 d后,诱导组细胞PPA Rγ的表达量明显高于未诱导组。结论:经上述方法诱导20 d后,羊水来源胎儿M SCs可以分化为脂肪细胞。
- 潘骏李现铎朱哲耿红全谢华陈方
- 关键词：羊水细胞间充质干细胞脂肪细胞
- 羊水来源胎儿干细胞的研究进展
- 2007年
- 一、前言
羊水细胞的研究最早开展于上世纪初期，当时羊水细胞在体外的培养成功率较低，同时在临床诊断和治疗中发挥的作用也甚少。随着培养条件和理论的逐渐成熟，1971年有报道证实羊水细胞的培养成功率达97％。随之羊水细胞在先天性疾病的产前诊断中发挥越来越重要的作用，包括各种基因突变导致的染色体病、遗传病和先天性代谢异常等。近年来国外有学者在研究中发现羊水中存在胎儿脱落的间充质干细胞和Oct-4（octamer-binding protein4）阳性干细胞，这些羊水来源的胎儿干细胞能否作为组织工程学种子细胞的探讨成为干细胞研究领域的又一热点。
- 朱哲陈方
- 关键词：间充质干细胞羊水细胞胎儿先天性代谢异常先天性疾病
- 孕中期羊水来源胎儿间充质干细胞的分离与培养及其生物学特性研究被引量：16
- 2006年
- 李现铎耿红全朱哲潘骏谢华陈方
- 关键词：间充质干细胞胎儿组织生物学特性研究孕中期组织工程学研究羊水
- Matrigel对羊水间充质干细胞成组织能力的影响
- 2008年
- 目的研究Matrigel对羊水间充质干细胞在裸鼠皮下成组织能力的影响。方法将羊水间充质干细胞与Matrigel混合,注入裸鼠皮下,14d后观察新生物的形态外观和组织结构。并以不混合Matrigel的羊水间充质干细胞注入裸鼠皮下作为阴性对照,单纯Matrigel注入裸鼠皮下作为空白对照。结果实验组和阴性对照组在裸鼠皮下均形成一长圆形瘤样组织,其形态外观基本一致,但组织结构有明显差异,在实验组组织血供丰富,主要为腺样结构,部分含管腔,向平滑肌细胞,上皮细胞和幼稚神经细胞分化。在阴性对照组血供较少,细胞呈单一平铺排列,未观察到明显组织结构,细胞未分化。空白对照组无新生组织形成。结论Matrigel能促使羊水间充质干细胞在裸鼠皮下向成熟的组织细胞分化并形成简单的腺样组织结构。
- 杜玉峰耿红全潘骏朱哲齐隽康健谢华陈方
- 关键词：MATRIGEL细胞外基质
- 孕中期羊水来源胎儿间充质干细胞体外诱导为平滑肌细胞的研究被引量：7
- 2006年
- 目的探讨孕中期羊水来源的胎儿间充质干细胞(MSC)体外诱导为平滑肌细胞的可能性。方法通过超声引导下羊膜腔穿刺获取人孕18～22周羊水,分离细胞,体外培养传代,机械方法挑取MSC克隆,体外扩增,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达,以0．01 ng/ml、0．1 ng/ml、1 ng/ml和10ng/ml浓度的转录生长因子β(TGF-β)分别诱导第3代MSC 28 d,免疫组化染色检测各浓度TCF-β诱导后a-Actin在细胞内表达情况,透射电镜观察1 ng/mlTGF-β诱导28 d后细胞内肌丝含量,激光共聚焦显微镜测定该浓度组细胞在乙酰胆碱刺激下细胞内液钙离子浓度的变化。结果羊水来源的胎儿MSC在体外培养体系中增殖迅速,流式细胞仪检测结果显示CD44表达阳性,CD34、CD45和HLA-DR阴性。经1 ng/ml TGF-β诱导28 d后,细胞形态呈长梭形平滑肌样,融合后细胞分布形成特征性的“峰”和“谷”状,同时表达平滑肌细胞特异性蛋白标志a-Actin,细胞内出现黑色棒状肌丝,激光共聚焦显微镜显示该浓度TGF-β诱导后细胞内液钙离子基础值明显高于未诱导的细胞。在乙酰胆碱刺激下,细胞内液钙离子呈波峰样释放。结论羊水来源的胎儿MSC在体外可以定向分化为平滑肌细胞。
- 朱哲潘骏李现铎耿红全陈方
- 关键词：羊水干细胞平滑肌细胞
- 羊水作为间充质干细胞来源的可行性研究被引量：7
- 2006年
- 目的探讨孕中期羊水作为胎儿间充质干细胞（MSCs）来源的可行性。方法采用机械手段挑取孕中期羊水培养体系中类成纤维细胞的MSCs集落，体外培养扩增，观察细胞生长特性，流式细胞仪检测MSCs表面抗原表达及细胞周期，RT-PCR检测Oct-4、SCF、M-CSF、FL细胞因子的表达。结果用机械手段挑取出的细胞接种1～2d后贴壁，形态呈梭形，7～8d融合呈成纤维细胞状。体外扩增原代可获得（4～6）×10^6个细胞，10代可获得（1～5）×10^12个细胞，10代后细胞增殖能力下降。流式细胞仪检测结果显示：CD44表达阳性，CD34、CD45、HLA—DR不表达。RT-PCR检测结果显示：胎儿MSCs表达Oct-4、SCF、M-CSF、FL细胞因子。结论采用机械手段可从孕中期羊水培养体系中挑取出胎儿MSCs，与其他来源的MSCs特点相符。孕中期羊水可以作为一种新的胎儿间充质干细胞（MSCs）来源。
- 李现铎耿红全朱哲潘骏谢华陈方
- 关键词：羊水胎儿干细胞
- 免疫磁珠分离羊水来源OCT-4阳性胎儿干细胞的实验研究被引量：5
- 2007年
- 目的探讨免疫磁珠分离羊水来源OCT-4阳性胎儿干细胞的可行性。方法采用免疫磁珠细胞分选法去除羊水细胞中CD44和SSEA4阳性细胞，使OCT-4阳性胎儿干细胞间接得到分离，体外培养扩增后，观察细胞生长特性，免疫荧光染色计算OCT-4阳性胎儿干细胞得率，Real—TimePCR比较分离前后OCT-4表达量的差异，免疫组化检测NANOG、AKP、MAP-2、NGFR和Myosin等细胞因子的表达。结果经免疫磁珠分离的细胞接种12h内贴壁生长，形态呈梭形，部分呈多角形．融合后形成辐射状排列。免疫荧光染色OCT-4阳性细胞得率为（90．15±8．25）％，Real—TimePCR检测结果显示分离后细胞OCT-4的表达量较未分离细胞和M义有显著性差异（P〈0．01）。原代培养可获得（1～2）×10^7个细胞，3代可获得（2～4）×10^8个细胞．传至10代以后细胞的增殖能力下降。免疫组化结果显示OCT-4阳性胎儿干细胞表达NANOG、AKP、MAP-2和NGFR等细胞因子。结论免疫磁珠细胞分选法可以从羊水中分离出OCT-4阳性的胎儿干细胞，分离后的细胞保持干细胞原有特性及生物学特征，可作为组织工程种子细胞。
- 朱哲潘骏张亮耿红全谢华陈方
- 关键词：羊水
