杨恭
- 作品数：12 被引量：42H指数：5
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市21世纪青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 番茄花叶病毒弱毒疫苗N14致弱机理研究
- 该研究首先克隆了具有侵染性的烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-Cv)和N14(K)cDNA全长基因组;在序列测定和分析的基础上,用基因交换的方法,构建了重组的嵌合病毒,并进行了浸染性分析;之后分别构建了N14(K)的...
- 杨恭
- 关键词：烟草花叶病毒突变
- 文献传递
- 两株大蒜病毒外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：12
- 2001年
- 利用建立cDNA库的方法 ,通过RT PCR分别扩增和克隆了感染我国天津地区大蒜的大蒜花叶病毒 (GMVc)和大蒜潜隐病毒 (GLVc)的外壳蛋白 (CP)基因 ,并对其分别在原核细胞中进行了诱导表达和表达产物的分析。克隆基因的序列测定与分析表明 ,GMVc的CP基因全长 867个核苷酸 ,编码 2 89个氨基酸 ,与报道的一株GMV的核苷酸和氨基酸的同源性分别为 88 5%和 97 2 % ,属于马铃薯Y病毒属 (Potyvirus)的成员 ;GLVc的CP基因全长 885个核苷酸 ,编码 2 94个氨基酸 ,与报道的一株GLV的核苷酸和氨基酸同源率分别为 73 6%和 90 9% ,属于香石竹潜隐病毒属 (Carlavirus)的成员 ;克隆基因的表达产物经SDS PAGE分析表明 ,GM Vc和GLVc的外壳蛋白分别约 32kD和 34kD ,与预测的结果一致。本实验结果对感染我国大蒜的病毒进行分子水平的确切诊断、分类和调查奠定了基础 ,将对大蒜病毒病的防治与脱毒大蒜的生产具有重要的意义。
- 马筠杨恭徐绍华魏军亚邱并生
- 关键词：外壳蛋白基因克隆
- 复制酶与运动蛋白编码基因的突变对烟草花叶病毒的弱化效应被引量：1
- 2001年
- 番茄花叶病毒弱毒疫苗K(ToMV-K)的复制酶基因和运动蛋白基因分别具有乳石和赭石突变的特征. 为了对这一致弱特征进行扩展研究, 用PCR介导的定点突变技术, 对烟草花叶病毒普通株中国分离物(TMV-Cv)复制酶基因和运动蛋白基因分别进行乳石突变(UGA)和赭石突变(UAA), 构建了复制酶单突变体--TMV-Cvrase, 运动蛋白单突变体--TMV-Cvmp和复制酶与运动蛋白双突变体--TMV-Cvrase-mp. 烟草侵染试验发现, TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp能侵染枯斑(Xanthi NC)和系统(K326)寄主, 后者侵染普通烟K326仅出现少量轻微的花叶症状; 子代病毒的电子显微镜观察、重复接种试验及其核酸的RNA斑点杂交、RT-PCR扩增与测序结果表明, TMV-Cvmp和TMV-Cvrase-mp子代病毒与TMV-Cv的大小和形态基本一致, 具有完整和稳定的侵染、复制和繁殖能力, 且其基因组仍保持着突变, 而复制酶单突变体TMV-Cvrase不能侵染烟草. 以上结果表明, 复制酶与运动蛋白的乳石突变与赭石突变协同致弱TMV-Cv对烟草的侵染症状, 从而暗示ToMV-K基因组的这种突变模式也可以用于其他植物病毒的致弱研究.
- 杨恭邱并生魏军亚刘广超
- 关键词：烟草花叶病毒复制酶运动蛋白弱化效应基因突变体
- 乙肝表面抗原a表位粘膜疫苗的构建及免疫原性检测被引量：2
- 2001年
- 利用DNA重组技术 ,构建霍乱毒素B亚单位与乙肝病毒表面抗原a表位的融合基因 ,并在大肠杆菌表达体系pET 30a BL2 1 (DE3)中获得以包涵体形式的高效表达。免疫印迹表明表达产物具有免疫学活性 ,包涵体复性后 ,表达产物能够象CTB那样形成五体 ,以腹腔注射、灌胃。
- 刘相国杨恭邱并生田波
- 关键词：CTB融合蛋白ELISA
- 烟草花叶病毒及其弱毒疫苗-N14基因组cDNA克隆的构建与侵染性分析被引量：10
- 2000年
- 植物病毒弱毒疫苗在防治植物病毒病害中发挥着重要的作用,但对于其致弱的根本原因和机理仍不十分清楚。弱病毒能够在植物体内生存和繁殖,却不严重危害植物的生长、开花和种子生产,而对外来病毒具有杀灭和防治作用,这种共生和保护宿主的现象是大多数植物弱病毒所具有的共同...
- 杨恭邱并生
- 关键词：克隆
- 过碘酸盐氧化法制备固相载体除抗非目的蛋白抗体
- 2001年
- Sephacryl凝胶经过碘酸盐氧化将产生醛基 ,非目的蛋白通过氨基与醛基反应结合到凝胶上制备固相载体。装柱后 ,抗体经过长时间循环上样 ,抗非目的蛋白的抗体被吸收 ,抗体得到了纯化。用经本法处理过的抗体做免疫印迹 。
- 刘相国杨恭邱并生
- 关键词：抗体免疫印迹抗血清
- 番茄花叶病毒弱毒疫苗K基因组的两个致弱突变及用途
- 本发明涉及植物病毒基因工程领域。通过点突变的方式把分离和克隆的番茄花叶病毒强株基因组改造为弱毒疫苗K基因组，其编码复制酶和运动蛋白的核苷酸序列具有乳石突变和赭石突变，可以做为模式进行植物病毒基因组的改造，制备基因工程疫苗...
- 邱并生杨恭田波
- 文献传递
- 番茄花叶病毒弱毒疫苗K基因组全序列
- 本发明涉及植物病毒基因工程领域。通过点突变的方式把分离和克隆的番茄花叶病毒强株基因组改造为弱毒疫苗K基因组,其编码复制酶和运动蛋白的核苷酸序列具有乳石突变和赭石突变,可以做为模式进行植物病毒基因组的改造,制备基因工程疫苗...
- 邱并生杨恭田波
- 文献传递
- 烟草花叶病毒及番茄花叶病毒弱毒疫苗N14基因组重组体的构建与侵染性分析被引量：5
- 2000年
- 用基因交换的方法将烟草花叶病毒普通株（中国分离物，ＴＭＶ－Ｃｖ和番茄花叶病毒弱毒疫苗Ｎ１４基因组的运动蛋白（ＭＰ）、外壳蛋白（ＣＰ）基因编码区和３＇非编码区嵌合于Ｎ１４和ＴＭＶ－ＣＶ ５＇非编码区和复制酶基因的下游，构建重组病毒克隆ｐＴＮ和ｐＮＴ，并进行体外转录和烟草侵染试验结果 ｐＴＮ和 ｐＮＴ体外转录物对烟草均具侵染性：前者感染枯斑三生烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ．Ｓａｍｓｕｎ ＮＮ），等量感染的枯斑形成数比 ＰＴＭＶ－Ｃｖ少；感染普通烟（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔｏｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｈｕａｎｇｍ－ｉａｏｙｕ，黄苗榆品种），出现典型系统症状，但叶片畸形率较低．后者感染枯斑三生烟，等量感染的枯斑形成数比ｐＮ１４多；感染普通烟仍不出现系统症状．结果表明：重组病毒ＴＮ和ＮＴ仍能在试验用烟草中增殖，前者在普通烟上基本表现为ＴＭＶ－Ｃｖ的强病毒性状，后者在普通烟上表现为Ｎ１４的弱病毒性状； ＴＭＶ－ＣＶ和 Ｎ１４的复制酶与 ＭＰ， ＣＰ和 ３＇非编码区之间为非严紧型连接，两者在类似的各亚基因组之间可进行功能互补．初步推测，Ｎ１４复制酶编码基因的突变区对Ｎ１４的致弱起主要作用；
- 杨恭刘相国邱并生
- 关键词：花叶病毒番茄基因组侵染性
- 棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因5′端截短片段的表达及增效活性测定被引量：11
- 2001年
- 将带有棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白 (HaGVenhancin)基因的重组表达载体 pET 30a En分别用BalⅠ和DraⅠ酶切后连接 ,构建重组表达载体pET 30a Ben和 pET 30a Den ,其外源基因的开放阅读框分别为HaGV增效蛋白基因 5′端的 1 7kb和 2 2kb。IPTG诱导表达产生 66 7kD和 85 1kD的多肽并命名为Ben和Den。初步纯化的Ben和Den显示了对棉铃虫核多角体病毒 (HaNPV)及Bt的增效活性。Ben可对棉铃虫核多角体病毒增效 1 0 5%～2 6 5% ,LT50 缩短 0 9d ,Den增效 1 0 2 %～ 33 0 % ,LT50 缩短 1 2d～ 1 9d。重组增效蛋白可对Bt(1∶2 50 0稀释 )增效 2 0 7%～ 35 4% ,Den增效 1 6 7%～ 31 5% ,Ben增效 1 1 7%～2 7 4%。
- 刘相国杨恭邱并生张克勤田波
- 关键词：颗粒体病毒增效蛋白HANPVBT昆虫病毒
