林平
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
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- 黑胸败血芽孢杆菌穿孔毒素蛋白及其重组表达载体和应用
- 本发明公开了黑胸败血芽孢杆菌穿孔毒素蛋白及其重组表达载体和应用，黑胸败血芽孢杆菌穿孔毒素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，家蚕幼虫添食黑胸败血芽孢杆菌穿孔毒素蛋白后导致家蚕存活率降低，表明该基因是一个可导致鳞...
- 程廷才林平金盛凯常怀谱夏庆友
- 文献传递
- 家蚕中肠特异启动子BmAPN的克隆及活性分析被引量：7
- 2012年
- 【目的】克隆和鉴定1个家蚕中肠特异启动子,为研究家蚕的免疫应答和应用研究提供新的工具。【方法】从家蚕品种大造中提取基因组总DNA,用PCR方法克隆家蚕中肠特异表达基因BmAPN(GenBank登录号:BAA33715.1)的上游调控序列。利用此序列构建以EGFP为报告基因的转基因表达载体pBac[BmAPN-EGFP-SV40,3×P3-DsRed],通过显微注射获得转基因家蚕,在个体水平上检测启动子的活性。【结果】所克隆的BmAPN启动子长度为1 598 bp,其驱动的EGFP仅在转基因家蚕中肠特异表达,与内源基因BmAPN的表达特征一致。该启动子在家蚕幼虫时期活性相对较高,且在起蚕期的活性要明显高于眠蚕期,推测该启动子中的特异元件受激素调控。【结论】经克隆获得的BmAPN启动子为有活性的启动子,且为家蚕中肠特异启动子。
- 陆改程廷才蒋亮金盛凯林平胡翠美夏庆友
- 关键词：家蚕启动子
- 黑胸败血芽孢杆菌穿孔毒素蛋白及其重组表达载体和应用
- 本发明公开了黑胸败血芽孢杆菌穿孔毒素蛋白及其重组表达载体和应用，黑胸败血芽孢杆菌穿孔毒素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，家蚕幼虫添食黑胸败血芽孢杆菌穿孔毒素蛋白后导致家蚕存活率降低，表明该基因是一个可导致鳞...
- 程廷才林平金盛凯常怀谱夏庆友
- 文献传递
- 家蚕黑胸败血芽孢杆菌基因组测序及结构分析和功能注释被引量：2
- 2014年
- 黑胸败血芽孢杆菌(Bacillus bombyseptieus)是家蚕细菌性败血病的常见病原之一。在获得黑胸败血芽孢杆菌基因组完成图的基础上,对该菌株的基因组测序、基因组序列结构特征以及基因功能注释等信息进行分析。该菌株的基因组测序数据量达到2.1 Gb,基因组覆盖度超过360倍,基因组组装大小为5.87 Mb,包含2个复制子——1个核基因组(5 295.783 kb)和1个质粒基因组(577.809 kb);基因组重复序列比率为1.179 2%,包含136个非编码RNA和5 298个编码基因。测序得到的基因组数据通过KEGG和COG数据库进行功能注释,主要与物质转运、氨基酸代谢、碳水化合物代谢等相关。基因组共线性分析表明黑胸败血芽孢杆菌与芽孢杆菌属细菌的亲缘关系较近。该研究结果将为鉴定黑胸败血芽孢杆菌的毒力因子以及研究其致病机制和与宿主的相互作用提供重要数据支撑。
- 程廷才林平金盛凯付博华龙仁文夏庆友
- 关键词：家蚕细菌病基因组功能注释共线性
- 家蚕脂肪酶1(Bmlipase-1)的原核表达和抗体制备及在转基因增量表达系统中的检测被引量：2
- 2012年
- 家蚕肠液中的脂肪酶1(Bmlipase-1)对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)具有明显抑制作用,建立的增量表达Bmlipase-1的转基因家蚕品系(LI-A)对BmNPV的抵抗力得到显著增强。为了分析LI-A品系幼虫肠液中Bmlipase-1的含量变化,通过原核表达、纯化Bmlipase-1蛋白,并免疫家兔制备Bmlipase-1的多克隆抗体,对LI-A品系和正常家蚕品种大造4龄、5龄起蚕肠液中的Bmlipase-1含量进行Western blotting检测。结果显示Bmlipase-1在LI-A品系幼虫肠液中的含量明显高于正常家蚕品种大造,证明LI-A品系对BmNPV的抵抗力提高是因为肠液中Bmlipase-1的含量增加。
- 金盛凯蒋亮林平孙薇程廷才夏庆友
- 关键词：家蚕核型多角体病毒原核表达转基因家蚕
- 黑胸败血芽孢杆菌伴孢晶体毒素蛋白、截短片段及其重组表达载体和应用
- 本发明公开了黑胸败血芽孢杆菌伴孢晶体毒素蛋白（Bb toxin）、截短片段及其重组表达载体和应用，黑胸败血芽孢杆菌伴孢晶体毒素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，其截短片段如SEQ ID NO.8所示，家蚕幼虫...
- 程廷才林平金盛凯常怀谱夏庆友
- 文献传递
- 家蚕氨肽酶和类钙粘蛋白与苏云金芽孢杆菌Cry1Ac毒素相互作用（英文）被引量：3
- 2018年
- 苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis生产的晶体毒素被广泛用作农林害虫的杀虫剂。鳞翅目昆虫受体蛋白是阐明其与晶体毒素相互作用的重要模式。文中纯化了苏云金芽孢杆菌的晶体毒素蛋白,质谱鉴定为Cry1Ac毒素,然后重组表达家蚕氨肽酶N (BmAPN6)和类钙粘蛋白(CaLP)结合结构域。利用免疫共沉淀、Far-Western印迹和酶联免疫吸附试验,证明Cry1Ac毒素蛋白和BmAPN6之间的相互作用。在Sf9细胞中,对Cry1Ac毒素的细胞毒活性分析,表明BmAPN6参与Cry1Ac毒素诱导的细胞形态异常和裂解死亡。文中也利用相同的方法,对钙粘蛋白的3个结合位点CR7、CR11和CR12进行相互作用分析,结果表明3个重复结构域是CaLP的Cry1Ac结合位点。上述结果表明,BmAPN6和CaLP可作为Cry1Ac毒素致病的功能性受体,为进一步揭示晶体毒素的致病机制和基因编辑增强家蚕抗病性提供了研究靶标。
- 林平程廷才冯铁山龚娇刘春夏庆友
- 关键词：氨肽酶钙粘蛋白家蚕
- 家蚕类钙粘蛋白BtR-175基因敲除突变体创制和抗性检测
- 2016年
- 家蚕类钙粘蛋白BtR-175不仅是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)晶体毒素蛋白的受体蛋白,也是黑胸败血芽孢杆菌(Bacillus bombysepticus)晶体毒素蛋白的受体分子。为建立对黑胸败血芽孢杆菌具有抵抗能力的家蚕品系,采用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术,设计引导RNA(gRNA)对家蚕BtR-175基因进行精确定点编辑,对蚕卵显微注射重组质粒pU C57-hA 4-Cas9和T-U6-BtR-175后,筛选获得2个碱基插入导致蛋白质翻译提前终止的BtR-175基因敲除突变体,命名为ΔBtR-175。4龄起蚕经口添食黑胸败血芽孢杆菌,结果ΔBtR-175突变体家蚕的死亡率为34.4%±5.8%,野生型家蚕的死亡率为57.8%±8.4%,表明ΔBtR-175对黑胸败血芽孢杆菌的侵染抵抗性显著提高。饲养试验显示ΔBtR-175突变体和野生型家蚕的茧层量没有显著性差异。该突变体有望进一步培育为家蚕抗性育种素材。
- 程廷才林平付剑锋蒋亮马三垣夏庆友
- 关键词：抗性家蚕
- 家蚕氨肽酶(BmAPN5)与黑胸败血芽孢杆菌伴孢晶体(PC)毒素相互作用被引量：1
- 2017年
- 氨肽酶N(APN)属于锌金属肽酶M1(Peptidase_M1)家族的成员,不仅参与蛋白水解过程,而且也作为毒素受体参与病原微生物的致病过程。家蚕氨肽酶家族含有16个成员,其中BmAPN4结合黑胸败血芽孢杆菌产生的伴孢晶体(PC)毒素,为研究该基因家族其他成员是否与PC毒素结合,参与其致病过程。本文克隆家蚕中肠特异表达的氨肽酶家族成员BmAPN5基因,全长3 313 bp,编码953个氨基酸,含有1个锌金属肽酶M1和ERAP1_C结构域。构建原核表达载体,表达和纯化获得可溶性GST-BmAPN5重组蛋白。Far-Western blotting、免疫共沉淀和ELISA等实验结果表明BmAPN5和活化的PC毒素相互结合。通过构建BmAPN5细胞转染载体,转染Sf9细胞系,与PC毒素共孵育,导致细胞形态改变和裂解死亡;同时,乳酸脱氢酶含量测定结果 (LDH)表明BmAPN5参与PC毒素致病过程,导致细胞裂解死亡,使细胞培养基中的乳酸脱氢酶升高。上述结果表明BmAPN5作为一种功能性受体,PC毒素与其相互作用,参与了病原物的致病过程,为进一步揭示病原微生物黑胸败血芽孢杆菌与宿主相互作用的致病机制研究奠定了基础。
- 付剑锋林平冯铁山程冬张权夏庆友程廷才
- 关键词：家蚕氨肽酶相互作用
- 黑胸败血芽孢杆菌伴孢晶体毒素蛋白、截短片段及其重组表达载体和应用
- 本发明公开了黑胸败血芽孢杆菌伴孢晶体毒素蛋白（Bb toxin）、截短片段及其重组表达载体和应用，黑胸败血芽孢杆菌伴孢晶体毒素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，其截短片段如SEQ ID NO.8所示，家蚕幼虫...
- 程廷才林平金盛凯常怀谱夏庆友
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