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金鱼生长激素Ⅱ基因在杆状病毒中的表达被引量：2: 1998年; 以ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３为转移载体，将编码金鱼生长激素Ⅱ的ｃＤＮＡ插入粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）基因组中，构建了重组病毒株ＴｎＮＰＶＳＸ＋ｇｆＧＨⅡ４６。该毒株能在草地贪夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）离体培养细胞及银纹夜蛾（Ａｇｙｒｏｇｒａｍｍａａｇｎａｔａ）幼虫中表达金鱼生长激素基因。蛋白免疫印迹表明，表达的生长激素蛋白分子量为２２．５ｋＤａ，与理论计算值相符，且表达的生长激素可分泌到感染细胞的培养基及虫体血淋巴中。ＲＩＡ结果表明，表达产物与天然的生长激素有相似的免疫特性，重组病毒在感染细胞９６ｈｐｉ所表达的生长激素达到最高水平，平均每１０５个细胞可在细胞培养基中检测到金鱼生长激素Ⅱ达８６．７４ｎｇ；平均每克干虫可产生金鱼生长激素Ⅱ２１４μｇ。; 林广云龙綮新黄安林黄安林庞义

利用杆状病毒表达系统表达金鱼生长激素I基因被引量：8: 1997年; 以不含起始密码ＡＴＧ的质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３为转移载体，将编码金鱼生长激素Ｉ的ｃＤＮＡ插入粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）基因组中，构建了形成多角体的重组病毒株ＴｎＮＰＶＳＸ＋ｇｆＧＨＩ２ｌａ。该毒株能利用合成多角体ＸＩＶ串联启动子，在重组病毒感染的草地贪夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ，Ｓｆ）昆虫细胞及银纹夜蛾幼虫中表达金鱼生长激素Ｉ基因。感染离体细胞及虫体后的蛋白ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳表明，所表达的蛋白分子量为２２５ｋＤａ，与理论计算值相符。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实。; 林广云龙綮新庞义庞义; 关键词：金鱼生长激素杆状病毒基因表达

化学诱变的BmNPV对家蚕细胞和虫体感染性的初步研究被引量：3: 2000年; 前文报道化学诱变剂对家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)多角体形态有明显的诱变作用 ,诱变的BmNPV基因组对某些限制性内切酶的酶切电泳谱发生变化。本文研究进一步表明 :诱变BmNPV感染家蚕Bm N细胞的病变特征与对照相比没有明显不同 ,但形成不定形超大多角体的空斑时间延迟2～ 3d;诱变BmNPV感染家蚕幼虫后 ,病蚕体内各组织病变损害的感染程度 (易感性 )与对照基本相同。研究结果提示 ,诱变的BmNPV对家蚕培养细胞。; 葛慈斌曹阳钟仰进肖巧学黄自然林广云龙綮新; 关键词：化学诱变多角体病毒感染性家蚕

昆虫杆状病毒基因表达的调控: 1997年; 综述了近１０年来杆状病毒基因的调控研究进展，包括６种与调控有关的基因及１１种晚期表达因子基因的功能．杆状病毒基因组中的同源区为其顺式作用元件（ｃｉｓ－ａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔ）或增强子，对基因的表达起正调作用，而病毒编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）则决定着病毒基因表达的调控以级联方式进行．; 林广云施先宗龙綮新; 关键词：顺式作用元件

AcMNPV大方形多角体突变株的特征研究被引量：2: 1999年; 对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株ＡｃＭＮＰＶＴＫｍｔ５１３的多角体及其感染细胞，做超薄切片及透射电镜观察，结果表明，在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内，而且多角体蛋白也不具有野生型病毒多角体蛋白那样的晶格结构。生物测定结果表明，经提纯后的突变多角体对虫体无感染力，而感染了突变株病毒的细胞只有弱的感染力。序列测定结果证实，其ｆｐ２５基因无突变发生，且ｆｐ２５基因在Ｓｆ９细胞中的转录也无异常，从而排除了突变与ｆｐ２５基因有关。比较了２６种ＮＰＶ及ＧＶ的多角体蛋白及颗粒体蛋白的氨基酸序列，发现第２５位的甘氨酸是绝对保守的。利用Ｐｒｏｓｉｓ电脑软件对突变株病毒的多角体蛋白进行了二级结构预测并与野生型病毒作了比较，发现突变株病毒多角体蛋白的二级结构与野生型的比较，α螺旋数上升，β折叠数下降，同时，亲水性及抗原性都发生了改变。两种病毒的多角体蛋白通过ＳＤＳＰＡＧＥ分析，其迁移率没有差别。; 林广云王珣章龙綮新龙綮新庞义邓日强; 关键词：ACMNPV 多角体蛋白

杆状病毒重组蛋白金鱼生长激素Ⅰ的纯化被引量：1: 1998年; 利用放射免疫分析（ＲＩＡ）证实了含金鱼生长激素ⅠｃＤＮＡ的重组病毒在感染细胞９６ｈ后所表达的生长激素达到最高水平，平均每１０５个细胞可分泌金鱼生长激素Ⅰ最高达２８８０７ｎｇ；平均每克干虫可产生金鱼生长激素Ⅰ９２５３μｇ。从感染重组病毒的无血清细胞培养基中纯化生长激素Ⅰ，平均每毫升培养基可纯化具免疫活性纯度９５％以上的金鱼生长激素Ⅰ达６６４２２４ｎｇ。纯化后蛋白的Ｎ末端首２０个氨基酸序列测定的结果表明其信号肽得到了准确的切割。从而保障了表达蛋白的生物活性。; 林广云龙綮新陈锦荣陈锦荣WendyKo黄安林余奇理; 关键词：杆状病毒基因

AcMNPV大立方形多角体突变株突变位点的证实: 1998年; 纯化了３株在共转染后形成正常多角体的病毒株，提取其病毒ＤＮＡ，并对其做了ＥｃｏＲⅠ、ＢｇｌⅡ酶切分析；克隆含多角体蛋白基因的ＥｃｏＲⅠＩ片段并进行序列测定，证实了此病毒株为回复突变株．; 林广云施先宗龙綮新余奇理; 关键词：多角体蛋白回复突变突变位点 ACMNPV

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究被引量：5: 1997年; 利用空斑技术，从既能形成多角体又含ＴＫ酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫ中，纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３。用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＢｇｌⅡ及ＫｐｎⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析，并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果，发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变，导致了第２５位的氨基酸密码子由ＧＧＴ变为ＧＡＴ，该位氨基酸由甘氨酸（Ｇｌｙ）变为天冬氨酸（Ａｓｐｑ）还利用ＰＣＲ技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段，并将它克隆入转移载体质粒ｐＥＶ５５，与不形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＨＢｓＤ４ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞，结果产生同样的大立方形多角体病毒。; 林广云龙綮新何代芬曲士芮庞义; 关键词：昆虫病毒核型多角体病毒多角体

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林广云