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乙酰肝素酶信号肽对其活性功能的影响研究被引量：1: 2008年; 目的:乙酰肝素酶在肿瘤转移过程中起关键作用,其信号肽在该酶翻译后处理过程中起重要作用。本研究旨在探索乙酰肝素酶在哺乳动物细胞中的表达特性及其信号肽对此酶功能活性的影响。方法:从人胎盘cDNA文库中扩增乙酰肝素酶全长编码基因,克隆入pGEM-T载体中,测序鉴定序列完全正确后,将此基因的全长和不含信号肽基因序列分别克隆入真核表达载体pcDNA4.1/Myc-His中构建pcDNA4.1/Myc-His full HPA和pcDNA4.1/Myc-His part HPA,转化COS-7细胞进行瞬时表达,分析这两种乙酰肝素酶蛋白的表达特性及功能活性。结果:在转染了乙酰肝素酶全基因的COS-7细胞裂解液中检测到该酶的功能活性及大小约53×103(Mr)的目的蛋白免疫印迹表达带,为切割激活后乙酰肝素酶羧基端大亚基与标签蛋白的融合体。在转染了敲除信号肽的乙酰肝素酶基因的COS-7细胞裂解液中测到未被切割激活的大小约65×103(Mr)的目的蛋白免疫印迹表达带,未能检测到该酶的功能活性。结论:在COS-7细胞中表达的完整的乙酰肝素酶蛋白和不含信号肽的乙酰肝素酶蛋白均位于细胞内,没有或很少被分泌到细胞外,提示该酶在正常状态下主要分布在细胞内。含信号肽的酶蛋白在翻译后处理过程中被细胞内的蛋白酶切割成2个亚基而被激活,具有功能活性。而不含信号肽的酶蛋白没有被切割而成为有活性的酶,提示乙酰肝素酶的信号肽对其翻译后加工、激活过程有重要的影响。; 李燕杰马远方李吉学汤国营彭清忠朱厚础; 关键词：乙酰肝素酶信号肽 COS-7细胞

大豆低聚肽分子质量分布的测定及体外消化实验被引量：16: 2006年; 为验证国产化大豆低聚肽产品分子质量分布和产品在体内经消化道后的稳定性,对该产品进行了分子质量分布测定及体外消化实验,目的是为以大豆低聚肽为原料开发功能性保健系列产品提供产品稳定性的理论依据。研究结果显示,国产大豆低聚肽分子质量均低于1 000 Da;经胃蛋白酶处理后,该大豆低聚肽95%以上未被消化,经胰蛋白酶处理后,约90%未被消化,说明该产品具有良好的稳定性,在体内大部分将以多肽的形式被直接吸收。同时应用该大豆低聚肽产品开发功能性食品时,其本身所具有的各项生理功能将不会发生改变。; 汤国营戴军蔡木易易维学谷瑞增; 关键词：大豆低聚肽分子质量分布体外消化试验胰蛋白酶胃蛋白酶稳定性

一种新的FRET体系的构建和检测: 荧光共振能量转移(FRET)是一个非辐射的、偶极-偶极耦合的过程,在这个过程中电子激发能从供体荧光分子向极近距离(典型距离是10nm)的受体荧光分子转移。这样,供体分子激发后可诱导受体分子受激发射。如果没有FRET存在,...; 刘刚戴红梅汤国营陈惠鹏; 文献传递

重组人脑源性神经营养因子在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化被引量：2: 2005年; 按照人脑源性神经营养因子(hBDNF)基因成熟肽编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出360bp的片段,插入到改构载体pTIG-trx上,获得了pTIG-trx-BDNF原核表达重组质粒,限制性酶切分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为hBDNF基因成熟肽编码序列。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21穴DE3雪,经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得了高效可溶表达,并对表达产物进行了分离纯化,得到纯度大于83%的样品,Western杂交证实该蛋白具有hBDNF抗原活性。; 林艳丽彭清忠汤国营戴红梅朱厚础; 关键词：可溶性表达大肠杆菌纯化中枢神经系统退行性疾病

重组人表皮生长因子的纯化及体内活性检定: 1996年; 人表皮生长因子(Human Epidermal Growth Fac-tor,hEGF)是一个由53个氨基酸残基所组成的单链多聚肽,分子量为6200D左右,等电点为pH4.6。它具有多种生物学功能,是发现较早并且具有广泛的潜在应用价值的细胞因子之一。hEGF存在于多种体液中,由于它的含量很低,对于它的研究及应用起了限制作用。本实验室利用含有hEGF基因质粒的重组大肠杆菌,经过发酵得到了大量高效分泌表达的rhEGF,在此基础上,我们对它进行了分离纯化的研究,得到了纯度大于95％具有明显活性的rhEGF,为EGF的进一步研究与应用打下了基础。; 王勇波胥照平孙澎戴红梅汤国营孟庆东朱厚础马清钧; 关键词：重组人表皮生长因子体内活性 RHEGF 重组大肠杆菌新生小鼠 3T3细胞

肿瘤转移关键酶:人乙酰肝素酶氨基端亚基的表达纯化及鉴定被引量：1: 2005年; 目的:乙酰肝素酶在肿瘤转移的过程中起重要作用,其氨基端小亚基蛋白(Mr为8×103)对其功能活性是不可缺少的。得到此蛋白将有助于深入研究乙酰肝素酶的功能活性。方法:我们从人胎盘cDNA文库中分离乙酰肝素酶蛋白全长编码基因,将乙酰肝素酶氨基端小亚基的基因克隆入pGE-X2TK,转化大肠杆菌进行融合表达。经发酵,纯化,复性得到乙酰肝素酶的氨基端亚基蛋白。结果:得到6.9g纯度>90%的氨基端小亚基融合蛋白。GSTpull-down实验表明,此融合蛋白可与乙酰肝素酶羧基端大亚基蛋白结合。复性后的融合蛋白可被激酶切割为GST蛋白和乙酰肝素酶氨基端亚基蛋白。结论:所得的乙酰肝素酶的氨基端小亚基蛋白为进一步研究该亚基蛋白在细胞内的免疫亚定位及功能奠定了基础。; 李燕杰李吉学凌焱汤国营宋子博林艳丽朱厚础; 关键词：乙酰肝素酶纯化肿瘤转移

人乙酰肝素酶的小分子多肽抑制剂: 本发明公开了一种人乙酰肝素酶小分子多肽抑制剂的氨基酸序列及一组具有人乙酰肝素酶小亚基(8kD)结合活性的小肽，属于生物医学领域。抑制人乙酰肝素酶活性的小肽，其氨基酸序列从N末端到C末端为序列表SEQ ID NO.1。在表...; 刘刚程慧君陈惠鹏汤国营戴红梅; 文献传递

野生革耳（Panus rudis）漆酶的异源表达和酶学性质改良: ＜正＞漆酶是一类含铜的多酚氧化酶,它的合成分泌存在有一系列翻译后加工过程（如糖基化等）,异源表达比较困难,产量和活性都不高。此外,漆酶的某些性质,如氧化还原电位较低、高温易失活等,也都阻碍了它在造纸、环保等产业中的实际应...; 杨建强刘刚汤国营戴红梅朱厚础; 关键词：漆酶异源表达酶学性质; 文献传递

Scytovirin在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1: 2008年; 目的:获得Scytovirin(SVN)蛋白及其多克隆抗体。方法:按照NCBI上公布的SVN基因序列设计合成引物,合成SVN基因,构建pET32c-SVN原核表达重组质粒,经限制性酶切分析、DNA序列测定插入片段正确;将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达;用离子交换层析法及金属亲合层析法纯化蛋白,采用Tris-Tricine系统分析;以经过纯化的蛋白为抗原免疫白兔,制备SVN多克隆抗体。结果:对表达产物进行了分离纯化,SVN纯度达到91%;用纯化的样品制备了多克隆抗体,抗血清效价为1∶102400。结论:SVN在大肠杆菌表达系统中获得了高效可溶表达,并制备了其多克隆抗体,为进一步深入研究SVN提供了材料。; 冯欣刘刚戴红梅汤国营游松; 关键词：可溶性表达多克隆抗体

重组人表皮生长因子的中试工艺研究: 1994年; 人表皮生长因子(hEGF)是最早发现最早应用于临床的多肽生长因子之一,由53个氨基酸组成,分子量约为6200Da。它具有多种生物学功能,能促进表皮和上皮细胞的增殖,刺激多种培养细胞的生长,增强蛋白质及DNA合成等。在临床上主要用于创烧伤救治。; 朱厚础汤国营王勇波胥照平戴红梅孙澎马清钧; 关键词：中试工艺烧伤救治人表皮生长因子多肽生长因子

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