潘龙
- 作品数：25 被引量：59H指数：4
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 鸡TOLL样受体3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备
- 目的:研究鸡TOLL样受体3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备。方法:采用Trizol法提取DF-1细胞总RNA,反转录成cDNA,根据GenBank上公布的chTLR3基因序列设计特异性引物,克隆chTLR3胞外区...
- 张瑞莉王杲强孟巍于群潘龙杨桂君
- 关键词：TOLL样受体基因克隆抗体制备
- 文献传递
- 鸡白细胞介素15真核表达质粒构建及其体外表达被引量：5
- 2009年
- 应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从ConA刺激20h的白莱航鸡脾脏T淋巴细胞中扩增出鸡白细胞介素15(ChIL-15)全基因片段。将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-T-ChIL-15。阳性克隆质粒经鉴定正确后将ChIL-15亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-ChIL-15。阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测到了ChIL-15蛋白在293T细胞中的表达。
- 马德星潘龙杨静红盖仁华李广兴
- 关键词：转染IFA
- 鸡传染性支气管炎病毒HH06分离株的鉴定及其S1基因的分子特征被引量：2
- 2007年
- 从黑龙江省哈尔滨市某鸡场疑似鸡传染性支气管炎的发病蛋鸡肾组织病料中分离到1株病毒,命名为HH06。该分离毒株经SPF鸡胚传代、血凝试验、负染电镜检查以及动物回归试验,证实为IBV。用RT-PCR扩增得到了HH06株S1基因片段,经测序,并与国内外IBV参考毒株的相应基因进行序列比较分析。结果表明,HH06株S1基因由1 620个核苷酸组成,推导的多肽由540个氨基酸残基组成,推导的氨基酸裂解位点序列为5个连续碱性氨基酸HRRRR。HH06株S1基因序列与除LX4外的其他参考株相应基因的核苷酸及氨基酸序列同源性均较低,亲缘关系均较远。初步证实HH06株为不同于IBV疫苗株的一个新毒株。
- 马德星潘龙任晓峰王金侠李广兴
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1基因分子特征
- 鸡白细胞介素15真核表达质粒构建及其体外表达
- 本研究从ConA刺激培养的SPF白来航鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素15(ChIL-15)全基因片段，将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中。应用磷酸钙转染法体外将含有目的基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+...
- 马德星潘龙李广兴杨静红
- 关键词：真核表达体外表达间接免疫荧光试验
- 文献传递
- 鸡堆型艾美尔球虫3-1E抗原表位的生物信息学预测被引量：4
- 2015年
- 应用生物信息学分析和预测鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白二级结构和抗原表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效表位疫苗奠定基础。以克隆获得的鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白氨基酸一级结构为基础,采用DNAStar软件和生物信息学在线分析程序Prot Param、SOSUI、IEDB、SYFPEITHI等预测3-1E蛋白理化性质和二级结构,并分析其序列跨膜区、可溶性、亲水性、可及性、柔韧性参数以及抗原指数,预测B细胞表位和T细胞表位的可能区域。3-1E蛋白由170个氨基酸组成,分子式C818H1257N213O272S3,分子质量18.5234 ku,理论等电点为4.25,半衰期为10 h;无跨膜区均为膜外区,是一种可溶性蛋白。其二级结构中α螺旋占31.76%,β转角为12.35%。B细胞表位预测区域:44-49、65-67、86-87、111-116;分值较高的T细胞表位区域:52-60、94-102、97-105、154-162、157-165。运用生物信息学方法确定3-1E存在多个抗原表位,对进一步研究3-1E的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要意义。
- 李广兴丛培君潘龙马玲冯俪黄艺华任玉东黄小丹
- 关键词：抗原表位生物信息学
- 鸡氨肽酶N噬菌体高亲和配体筛选及其抑制IBV感染研究
- 研究目的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)为鸡传染性支气管炎(IB)的病原,属冠状病毒科冠状病毒属。氨肽酶N(APN)是细胞表面的一种金属糖蛋白,是大多数I型和II型冠状病毒的细胞受体。在之前的研究中,我们发现IBV可以与天...
- 孙晓琦李兰兰潘龙李伟群陈慧杰黄小丹张瑞莉李广兴
- 关键词：IBV噬菌体亲和配体氨肽酶
- 文献传递
- 鸡堆型艾美耳球虫3-1E基因的原核表达及多克隆抗体制备
- 鸡球虫病是危害养鸡业最严重的疾病之一,由球虫病造成的死亡和生产能力下降,给养鸡业带来巨大损失。目前,鸡球虫病的控制主要依赖于药物预防和治疗,由于球虫抗药性而导致的药物研发和使用费用巨大,以及在治疗过程中产生的药残等问题,...
- 潘龙
- 关键词：堆型艾美耳球虫克隆多克隆抗体
- 文献传递
- 鸡传染性支气管炎病毒HH06株膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能研究被引量：4
- 2014年
- 文章通过RT-PCR方法扩增传染性支气管炎病毒(IBV)HH06株M全长基因,经抗原性和亲水性分析,将M部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-M转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,诱导表达获得20 ku重组M蛋白。Western blot检测表明,重组蛋白能够与IBV参考阳性血清反应。以纯化重组M蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,其ELISA效价达到1:218;Western blot结果证实,其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验表明,抗M蛋白多克隆抗体可检测到PVAX-M1转染BHK-21细胞表达的M蛋白,与IBV HH06毒株具有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明,多抗血清对IBV Beaudette株的抑制率可达到25.9%。为IBV检测及M蛋白功能的研究奠定基础。
- 李广兴杜威威韩溪潘龙王新白妍洪琴马玲任晓峰杨贵君
- 关键词：膜蛋白多克隆抗体间接免疫荧光试验免疫印迹试验
- 鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究
- 2015年
- 试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p ET-g APN并转化E.coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化g APN重组蛋白为免疫原制备兔抗g APN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然g APN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pc DNA-g APN转染HELA细胞所表达的g APN蛋白。上述结果可为g APN蛋白的深入研究奠定基础。
- 李广兴李兰兰潘龙洪琴张恒杨巍黄小丹马德星张瑞莉杨贵君
- 关键词：多克隆抗体间接免疫荧光
- 鸡堆型艾美耳球虫3-1E基因真核表达质粒的构建及其体外表达
- 2010年
- 为了构建鸡堆型艾美耳球虫(E.acervulina)3-1E基因真核表达质粒,试验应用RT-PCR技术从E.acervulina子孢子中扩增出3-1E基因片段,将其连接到克隆载体pMD18-T中得到重组克隆质粒pMD18-3-1E,阳性克隆质粒经鉴定正确后将3-1E基因片段亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(+)中,得到重组阳性表达质粒pcDNA3.1(+)-3-1E。结果表明:阳性表达质粒经鉴定正确后应用磷酸钙法体外转染293T细胞,通过间接免疫荧光法和免疫组织化学技术检测到了3-1E蛋白在293T细胞中的表达,说明E.acervulina3-1E基因真核表达质粒构建成功。
- 马德星潘龙杨静红李广兴
- 关键词：转染体外表达
