王慧敏
- 作品数：5 被引量：106H指数：4
- 供职机构：湖南农业大学生物安全科技学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家林业局重点科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 用于分子生态学研究的土壤微生物DNA提取方法被引量：44
- 2005年
- 利用SDS高盐法和变性剂加SDS高盐法对土壤微生物总DNA进行了提取,然后通过电泳加树脂柱回收和连续2次树脂柱回收方法进行了纯化.结果表明,变性剂加SDS高盐法的DNA提取效率明显高于前者,电泳加树脂柱法的纯化效果更好.通过PCR扩增表明,经过纯化后的DNA,都可以进行16SrDNA扩增和nirK、nosZ、nifH等功能基因的扩增.因此,变性剂加SDS高盐法是一种更为高效、可靠且适合于环境微生物分子生态学研究的DNA提取方法.
- 张于光李迪强王慧敏肖启明
- 关键词：分子生态学土壤微生物DNA提取
- 三江源高寒草甸土固氮基因(nifH)的多样性和系统发育研究被引量：24
- 2005年
- 首次利用PCR_RFLP和测序分析对位于青藏高原腹地的青海三江源保护区高寒草甸土壤微生物固氮基因(nifH)的多样性和系统发育进行了探讨。在 2个样地中 ,共得到 14 3个阳性克隆 ,用限制性内切酶MspⅠ和RsaⅠ进行RFLP分析后得到 35个不同的RFLP谱带型 ,多样性为 2 4 . 5 % ,其中ZD样品中获得 82个阳性克隆和 2 1个不同的RFLP谱带型 ,多样性为 2 5 6 % ,而YS样品中获得 6 1个阳性克隆和 19个不同的RFLP谱带型 ,多样性为 31 1% ,2个样地中有 5个相同的RFLP谱带型。在各样地都发现一个明显的优势种群 ,ZD样地的明显优势种群占克隆数的2 9 3% ,YS的优势种群占克隆数的 32 .8%。对 2 1个克隆进行了部分序列的测定 ,序列的相似性在 71%～ 98%之间 ,在GenBank数据库中没有发现完全匹配的序列 ,因此这些序列可能代表着新的固氮生物株系。最后利用ClustalW与Mega软件和已有序列构建了系统发育树 ,结果发现 ,2 1个序列分为 4个不同的簇 ,大部分的克隆与Proteobac teria的 3个系统发育亚簇 (α、β和γ)具有较高的相似性 ,其中主要的序列都落在第一和第二簇内。YS样地中的优势种群与α_Proteobacteria中的Rhodobactersphaeroides具有较高的相似性 ,而ZD样地中的优势种群则与 β_Proteobac
- 张于光王慧敏李迪强肖启明刘学端
- 关键词：高寒草甸固氮基因多样性系统发育
- 三江源地区不同植被土壤固氮微生物的群落结构研究被引量：36
- 2005年
- 利用PCR_RFLP和测序分析法对位于青藏高原腹地三江源自然保护区的高寒草甸、高寒草原和高山森林等不同植被类型的土壤固氮微生物的群落组成进行了探讨。经过PCR_RFLP分析固氮基因nifH ,在3个样品中共得到2 33个克隆和99个可操作分类单元(OTUs) ,NQ_1样地具有最多的克隆数和OTUs,多样性为4 9 74 % ,在所有样品中分别具有1～2个明显的优势种群(占总克隆数>15 % ) ,并且具有4个共同的OTUs。选取了2 6个克隆进行基因测序分析,通过DNAMAN比较表明,这些序列间具有6 6 %～98%的相似性,并且在GenBank数据库中没有发现完全匹配的序列,因此这些序列可能代表着新的固氮生物株系。最后利用ClustalW与Mega软件构建了系统发育树,结果发现,这些序列被分为4个不同的簇,部分序列与属于蛋白细菌(Proteobacteria)的已知细菌具有近的亲缘关系,但是更多的序列与已知细菌具有较远的亲缘关系。
- 张于光王慧敏李迪强肖启明刘学端
- 关键词：NIFH基因植被类型群落PCR-RFLP分析
- 青藏高原三江源地区高寒草甸土反硝化细菌多样性的初步研究被引量：8
- 2006年
- 应用PCR—RFLP和测序分析首次对青藏高原腹地三江源自然保护区高寒草甸土壤反硝化细菌基因（nirK和nosZ）的多样性和系统发育进行了探讨．研究选用了4个海拔在4600m以上的高寒草甸样地，主成分分析表明样地间具有不同的理化性状．经过PCR，RFLP分析，在4个样品中分别获得253个nirK基因克隆和283个nosZ基因克隆，其中nirK基因具有78个可操作分类单元（OTUs），nosZ基因具有120个OTUs．环境因子分析表明，海拔高度和土壤C／N比可能是影响土壤反硝化细菌的重要因素．本研究还选取了36个nirK克隆和17个nosZ克隆进行部分基因测序分析，DNAMAN比较表明，nirK和nosZ基因序列间分别具有69％-98％和57％-97％的相似性．在系统发育树中，序列都可以分为4个不同的簇，部分测定的基因序列与属于Proteobacteria的3个系统发育亚簇（α，β和γ）的已知反硝化细菌具有一定的亲缘关系，另外一些序列与非培养细菌具有较近的亲缘关系．
- 张于光李迪强王慧敏肖启明刘学端
- 关键词：高寒草甸反硝化细菌NIRKNOSZ多样性
- 基因芯片及在环境微生物研究中的应用
- 基因芯片(Microarray)技术于1991年首次在Science杂志上被提出,是生物芯片(Biochip)的一种.与传统的核酸检测技术相比,基因芯片技术用于环境微生物研究具有更多优势:DNA或寡核苷酸为基础的基因芯片...
- 张于光王慧敏李迪强肖启明
- 关键词：基因芯片基因表达比较基因组微生物生态学
- 文献传递
