王晓祺
- 作品数：8 被引量：42H指数：4
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：卫生部临床学科重点项目吉林省科技厅科研基金吉林省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 获得重构基因的简捷方法——重叠延伸PCR被引量：11
- 2004年
- 目的 :构建 IFN- β信号肽序列与白细胞介素 18(IL- 18)成熟肽的重组嵌合分子。方法 :从 BAL B/ c鼠基因组 DNA扩增 IFN- β信号肽序列 ;由小鼠 Pro- IL- 18真核表达质粒获得 IL- 18成熟肽序列 ;以非对称 PCR技术得到IFN- β信号肽编码区的反义链和 IL- 18成熟肽正链 ;采用重叠延伸 PCR(SOE- PCR)产生具有 IFN- β信号肽与 IL- 18成熟肽的嵌合编码序列 ;定向连方式构建嵌合 IL- 18的表达质粒并测序。结果 :连续胶 PAGE表明非对称 PCR可分别扩增出两个靶序列的特异性单链 ,大小符合预期。IFN- β信号肽对称 PCR产物与 IL- 18非对称 PCR产物混合作为模板 ,进行重叠延伸 ;电泳分析可见清晰的嵌合片段 ;测序显示重组质粒的表达框由两个设计的靶序列构成 ,且无移码。结论 :重叠延伸 PCR是一种获得重构基因的简捷方法。
- 刘玲丽谭岩刘力华张琨时阳许淑芬方艳秋段秀梅姜艳芳王晓祺
- 关键词：重叠延伸PCR
- 流式细胞术检测CIK的免疫表型和体外杀伤活性被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)的免疫表型和体外杀伤活性。方法:从健康人外周血分离淋巴细胞,经过IFNγ、CD3McAb、IL-2诱导并培养,获得大量的CIK。采用流式细胞术检测CIK的表型;以CFSE标记靶细胞来区分效应细胞,再以PI染色,用FACS检测靶细胞的死亡率。结果:CIK于第22天达到增殖高峰,并高度表达CD3、CD11a、CD54和HLA-DR;中度表达CD3/CD56、CD25、CD28、CD69和FasL;CD16表达不增加。CIK对肿瘤细胞K562、HL-60、Hela、SMMC7721和A375均表现出杀伤活性,其中对K562、HL-60、Hela 3种细胞的杀伤作用较强;而对SMMC7721、A375的作用不明显。结论:细胞因子IFNγ、CD3McAb和IL-2体外诱导的单个核细胞具有强大的增殖力和杀伤活性。
- 段秀梅谭岩宋燕王晓祺刘力华方艳秋许淑芬
- 关键词：免疫表型杀伤活性流式细胞术
- 流式细胞术检测细胞毒方法的建立被引量：17
- 2004年
- 目的 :建立一种用流式细胞仪测定细胞介导细胞毒活性的方法。方法 :用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记靶细胞 ,再用碘化丙碇 (PI)标记DNA筛选细胞膜已破坏的靶细胞。效靶比为 10 0∶1～ 6 2 5∶1,共孵育时间为 1～ 6小时 ,流式细胞仪收集 10 0 0个靶细胞并测定被杀细胞的百分率。结果 :CFSE是合适的标记靶细胞的荧光染料 ,18小时后也能很好地区分效靶细胞 ;靶细胞的自然死亡率低于 5 % ;杀伤百分率随着效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为5 0∶1～ 2 5∶1,共孵育时间为 2～ 4小时。结论 :CFSE PI双荧光染料标记的流式细胞分析检测细胞毒具有多个优点 :避免放射性试剂的应用 ,敏感性增强 ,单细胞水平的分析。
- 王晓祺谭岩段秀梅刘玲丽方艳秋姜艳芳许淑芬刘力华
- 关键词：靶细胞细胞毒CFSE流式细胞术百分率自然死亡
- 单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B基因疫苗的构建及其诱导小鼠细胞免疫应答
- 2007年
- 目的：构建、制备单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B DNA疫苗，检测其诱导机体产生的细胞免疫应答效果。方法：利用PCR技术从HSV-1 SM44毒株基因组中扩增出编码HSV-1 gB14-507氨基酸序列的一段基因。定向插入真核表达质粒pcDNA3载体中，构建出重组真核表达质粒pcDNA3-gBt，并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。于BALB/c鼠注射免疫3次，抗体分析CD4＋、CD8＋T细胞亚群的变化，羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）/碘化丙碇（PI）双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果：PCR及测序鉴定结果显示，插入的克隆基因与GenBank中HSV-1F株gB基因序列一致，证实了HSV-1 gBt核酸疫苗的构建；pcDNA3-gBt免疫组BALB/c鼠的CD4＋T细胞数较空质粒（pcDNA3）对照组和生理盐水对照组增加，CTL活性也较对照组明显增强，但是pcDNA3-gBt免疫组BALB/c鼠的CD8＋T细胞、CD4＋/CD8＋T细胞比值与对照组比较差异均无显著性（P〉0.05）。结论：HSV-1 gBt核酸疫苗诱导较强的细胞免疫应答。
- 李光源贺冰冯非孟祥俊宋忆淑王晓祺
- 单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B基因疫苗的构建及细胞免疫学研究被引量：5
- 2005年
- 目的:构建、制备单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)糖蛋白BDNA疫苗,检测其诱导机体产生的细胞免疫应答。方法:PCR扩增编码HSVⅠgB去除N端部分信号肽序列(39bp)的基因片段(2673bp),定向插入pcDNA3载体中,构建pcDNA3gB基因疫苗并对其进行PCR、酶切及测序鉴定。于BALBc小鼠注射免疫3次,观察小鼠CD4+、CD8+T细胞亚群的变化,CFSEPI双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果:双酶切分析结果为目的基因(2.7kb)和线性质粒pcDNA3(5.4kb);PCR扩增结果为特异产物(2.7kb);测序结果与GenBankgB基因序列同源性达99.5%;CTL活性增强;BALBc小鼠脾CD4+T细胞增加。结论:经鉴定证实了HSVⅠgB基因疫苗的构建;HSVⅠgB基因疫苗可以诱导较强的细胞免疫应答,应用于预防HSVⅠ的感染具有良好的前景。
- 李光源贺冰冯非孟祥俊宋忆淑王晓祺
- 关键词：单纯疱疹病毒DNA疫苗流式细胞术CFSE
- CFDA-SE标记细胞的实验研究及流式细胞术检测细胞毒方法的建立
- 细胞介导的细胞毒是对抗细胞内病原体和肿瘤免疫排斥的主要途径,是维持免疫系统内环境稳定的重要机制。这个过程可以通过不同类型的细胞介导,诱导靶细胞的死亡。NK 细胞在机体抗肿瘤,抗感染及免疫调节中起着重要作用,并参与自身免疫...
- 王晓祺
- 关键词：CFSE流式细胞术细胞毒
- 文献传递
- ErbB2 T798I介导乳腺癌细胞对lapatinib的耐药性与PHLDA1/2基因抗乳腺癌和肺癌机制的研究
- 研究目的： ErbB2是细胞膜表面结合的受体酪氨酸激酶，参与信号转导通路，导致细胞生长和增殖。ErbB2基因在10-20%的乳腺癌患者中发生基因扩增、表达增高，导致更恶性的基因表型。ErbB2的过度表达、基因扩增和一些激...
- 王晓祺
- 关键词：乳腺癌肺癌ERBB2AKTLAPATINIB
- 文献传递
- 羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记肿瘤细胞及其在细胞毒检测中的价值被引量：3
- 2006年
- 目的探讨化学染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA-SE）标记肿瘤细胞的最佳条件及其在细胞毒检测中的价值。方法用不同浓度的CFDA-SE标记K562（人红白血病细胞）、YAC-1（小鼠淋巴瘤细胞）、A375（人乳腺癌细胞）、MCF-7（人黑色素瘤细胞）不同肿瘤细胞系，并检测其0—24h的荧光强度，观察荧光强度变化的时间动力学，选择CFDA-SE标记细胞的最佳浓度；CFDA-SE标记细胞后孵育时间为1—6h，再用DNA染料碘化丙啶（PI）标记，流式细胞仪分析CFDA-SE和PI双标记细胞，并计算细胞死亡率，研究CFDA-SE对细胞的毒性。CFDA-SE标记时间分别为5、6、7、8、10、15min，测定标记不同时间的荧光强度和细胞的死亡率，选择最佳标记时间；用CFSE在最佳条件下标记靶细胞进行细胞毒检测实验。结果对于不同肿瘤细胞系，CFDA-SE标记的最佳浓度不同；CFDA-SE对细胞没有毒性，死亡率低于5％；最佳标记时间为8min。人外周血单个核细胞和BALB／c鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞K562、YAC-1均表现出杀伤活性，杀伤百分率随效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为50：1—25：1，共孵育时间为2—4h。结论CFDA-SE具有标记细胞稳定，能用于细胞培养时间较长的研究，不影响细胞功能，适用于流式细胞仪检测细胞毒实验的优点，是一种很好的标记细胞的荧光素染料。
- 段秀梅谭岩方艳秋杨广民王晓祺刘晓琳刘力华许淑芬
- 关键词：流式细胞术细胞毒
