王琪
- 作品数：12 被引量：21H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Smad4静默对K-ras突变小鼠胰腺PanIN细胞增殖及转移能力的影响
- 2013年
- 背景与目的:由己建立的小鼠基因打靶模型证实,K-ras突变启动了胰腺癌前病变—胰腺上皮内瘤变(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN),p53、p16失活均可单独促进小鼠PanIN发展为浸润性胰腺癌。作为人胰腺癌中另一失活频率高发的抑癌基因Smad4,本课题组前期研究提示,应用RNA干扰技术沉默PanIN细胞株中内源性Smad4表达,促使PanIN细胞恶性转化。基于此目的,本研究进一步探讨siRNA干扰Smad 4基因对PanIN细胞体内外增殖及转移能力的影响,从而有助于阐明PanIN恶性转化的新机制。方法:构建和筛选能特异性静默PanIN细胞中Smad4表达的最佳siRNA稳定表达质粒,稳定转染最佳siRNA表达质粒进入PanIN细胞,用Zeocin筛选稳定转染克隆,挑选阳性克隆、扩增,稳定转染后细胞命名为PanIN-S。本研究运用细胞计数、克隆形成实验等分别比较两组在活细胞率和体外增殖能力的影响,同时为进一步验证Smad 4基因静默对PanIN细胞体外迁移、侵袭能力的影响,本研究采用Transwell和Mitigel assay检测其干扰前后体外运动、侵袭能力。动物实验中,建立PanIN及PanIN-S细胞组裸鼠移植瘤模型,并应用免疫组化方法检测并比较两组PCNA、VEGF和MMP-9的表达及其差异。结果:成功构建了Smad4基因siRNA体系;体外实验中与PanIN组相比,PanIN-S组细胞增殖、侵袭能力明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);动物模型免疫组化结果显示,与PanIN组相比,PanIN-S组PCNA、VEGF和MMP-9表达显著增高(P<0.05)。结论:K-ras突变基础上小鼠PanIN细胞Smad4基因静默促使PanIN细胞的恶性转化;PanIN基础上Smad4静默促使小鼠PanIN细胞体内外增殖及转移能力的增强,其增殖及转移可能与PCNA、VEGF和MMP-9高表达有关。
- 齐晓光胡毅汪进良谈文龙王琪王立夫Tuveson DA
- 关键词：SIRNA干扰SMAD4基因细胞增殖
- 小鼠胰腺肿瘤模型的研究进展被引量：1
- 2010年
- 近年来胰腺癌的发病率呈上升趋势．其中80％～90％为起源于胰腺导管上皮的胰腺导管腺癌（Dancreaticductaladenoma．PDA）。胰腺癌起病隐匿．缺乏特异性临床表现，且容易转移．恶性程度高．导致其早期诊断困难，确诊时大多已处于晚期而无法施行根治手术。胰腺癌现有治疗方案大致包括联合化学治疗（化疗）、新辅助放射治疗、分子靶向治疗，但治疗效果不十分理想，胰腺癌的5年生存率不足4％，是目前预后最差的恶性肿瘤之一。
- 王琪王立夫
- 关键词：小鼠模型胰腺肿瘤胰腺上皮内瘤变基因打靶
- EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响被引量：11
- 2010年
- 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴(CoCl2)建立低氧模型,实验设空白对照组(常氧组)、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组。分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的表达。结果低氧条件下,低浓度EGCG短时间内(24 h)对SGC7901细胞生长无明显抑制作用(P>0.05);但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖(P<0.01),100μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达(76.3±2.9)%。流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间—剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达(P<0.05或P<0.01),并下调VEGF-A mRNA表达(P<0.05或P<0.01),但对HIF-1αmRNA的转录无明显影响(P>0.05)。结论低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关。
- 姚静静王琪齐晓光蒋荷林晓琳王立夫
- 关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯低氧凋亡低氧诱导因子-1Α血管内皮生长因子-A
- 花姜酮对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响及机制的研究
- 2013年
- 目的:探讨花姜酮(zerumbone)对人胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1迁移和侵袭的影响及其相关基因的表达。方法:以BxPC-3和Panc-1为研究对象,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)实验选择毒性较小的花姜酮浓度,用细胞划痕实验、Transwell小室迁移和侵袭实验检测药物对细胞迁移和侵袭能力的影响,蛋白质印迹(Western blot)检测各细胞组CXC族趋化因子受体4(CXCR4)、促分裂原活化蛋白酶激酶1/2(MEK1/2)、磷酸化MEK 1/2(p-MEK1/2)、细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达变化。结果:花姜酮对BxPC-3和Panc-1细胞的生长均有抑制作用,且随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强(P<0.05)。低浓度药物作用后BxPC-3和Panc-1的划痕迁移率都低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,Transwell迁移和侵袭实验中BxPC-3和Panc-1用药组的平均穿膜细胞数均减少(P<0.05)。蛋白质印迹检测结果表明:花姜酮抑制CXCR4、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达。结论:花姜酮具有抑制胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1迁移和侵袭的作用,可能与下调CXCR4、p-MEK1/2、p-ERK1/2表达水平有关,为肿瘤的靶向治疗提供新的依据。
- 刘婷婷王琪舒时珍蒋荷姚静静王立夫
- 关键词：胰腺癌细胞
- Tp53突变抑制Siah1介导的WISP1泛素化降解在胰腺癌发生中的机制
- 背景与目的:胰腺癌是死亡率最高的恶性肿瘤之一,临床预后差。WISP1在胰腺癌中的生物学作用、机制以及与经典抑癌基因的关联目前仍不明了。本研究旨在通过对小鼠胰腺上皮内瘤变细胞与胰腺癌细胞的基因表达进行研究,确定WISP1在...
- 吴巍魏璐敏李彤臧毅钱雨婷白婷婷朱颖王琪王立夫
- 关键词：胰腺癌胰腺上皮内瘤变TP53
- 文献传递
- 高通量技术检测抑癌基因Pitx2静默后PanIN细胞中下游基因改变
- 2020年
- 目的:运用小鼠基因转录本的全基因表达谱芯片,研究Pitx2基因静默前后胰腺上皮内瘤变(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN)细胞下游基因表达谱的变化。方法:应用小鼠全基因芯片检测Pitx2基因静默前后PanIN细胞基因表达谱的变化,并运用实时荧光定量多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对部分芯片结果进行验证。结果:根据基因芯片筛选出差异倍数3倍以上的差异表达基因共97条。其中上调58条,涉及细胞增殖的基因包括Rac1、Ccr1、Fut9、PPP3CA、Sox5、Bmp7、Chtf18、Btg4、Flt4、Dscaml1和Pftk1;涉及细胞转移的基因包括Sesn1、Rpl7a、PPP3CA、Sox5、Bmp7、PIK3C2G、Cxcl12、Btg4和Kcnj14。下调39条,涉及细胞增殖的基因包括PPP2R2A、Nav1、PPP2R3C、Katnb1、Gpbp1、Nat3、Tgm5和PRKRA;涉及细胞转移的基因包括PPP2R2A、Lce1c、Hcn1、PPP2R3C、Tbxas1、Chrna1、Frmd5和Cdh7。其余基因涉及细胞周期、细胞死亡调控、细胞黏附、细胞转录活性、细胞转移酶活性。通过实时定量PCR对部分基因进行验证,显示基因芯片的结果与实时定量PCR验证结果基本一致。结论:通过基因芯片技术筛选出Pitx2基因静默前后PanIN细胞下游差异表达基因,为后续体内、外实验奠定了良好的基础。
- 钱雨婷王琪许斌
- 关键词：基因表达谱胰腺上皮内瘤变
- 一种治疗溃疡性结肠炎的药物组合物
- 本发明公开了一种治疗溃疡性结肠炎的药物组合物，所述组合物包括生理盐水，甲硝唑，淀粉，烟酸和地塞米松。本发明的优点在于，将几种临床常用的治疗其他疾病或者溃疡性结肠炎的常用药物组合成配方，采用保留灌肠局部治疗，可以给对传统口...
- 王立夫余鹰李娟娟王琪
- 文献传递
- Smad4静默前后PanIN细胞基因芯片检测及表达谱的研究被引量：1
- 2011年
- 背景与目的:由己建立的小鼠基因打靶模型证实,K-ras突变启动了胰腺癌前病变即胰腺导管上皮内瘤变(pancreatic intraepithelial neoplasia,PanIN),Smad4基因失活可促使PanIN细胞恶性转化。PanIN细胞中Smad4基因静默后其下游基因表达将如何改变及促使PanIN细胞恶性转化,目前尚不清楚。基于此目的,我们在己成功分离建立K-ras突变启动的PanIN细胞,并应用siRNA干扰技术静默PanIN细胞株中内源性Smad4表达的基础上,应用全基因表达谱芯片研究Smad4基因静默前PanIN细胞与其静默后PanIN-S细胞基因表达谱的变化。方法:应用包含41 174个小鼠基因转录本Agilent小鼠4×44K全基因芯片检测Smad4基因静默前后PanIN细胞基因表达谱变化,分析差异表达基因,并选择其中有差异表达的部分基因进行实时荧光定量多聚酶链反应(Real-time PCR)验证。结果:基因芯片筛选出差异倍数2倍以上的差异表达基因,如Fut9、CXCR4、MMP2、PIK3C2G、Cplx4、Lemd1、TIMP4、Reln和PITX2等。Real-time PCR验证差异表达基因CXCR4、MMP2、PIK3C2G、TIMP4、PITX2与基因芯片结果一致。结论:Smad4基因静默前后PanIN细胞中CXCR4、MMP2、PIK3C2G、TIMP4、PITX2基因表达存在显著差异,其中CXCR4、PIK3C2G基因可能与胰腺肿瘤新生血管形成相关,MMP2、TIMP4基因可能与胰腺肿瘤细胞黏附、浸润、迁移相关,PITX2表达高低可能与胰腺肿瘤预后相关。
- 王琪姚静静蒋荷朱兰程时丹王立夫
- 关键词：基因芯片SMAD4
- 消化性溃疡致十二指肠结肠瘘1例被引量：1
- 2010年
- 病例：患者男,29岁,因＂反复腹泻4年＂于2009年10月24日以＂腹泻原因待查＂收入我院消化内科.患者4年前无明显诱因经常出现上腹部隐痛,饥饿时明显,历时数月,每天4～5次腹泻,稀便,无脓血便,无里急后重.腹泻多发生于饭后1～2 h,有时伴脐周隐痛和腹胀.
- 蒋荷林晓琳王琪姚静静
- 关键词：十二指肠结肠肠瘘消化性溃疡
- Smad4基因沉默对胰腺上皮内瘤变细胞基因表达谱影响的初步研究
- 2011年
- 背景:抑癌基因Smad4失活可使由Kras基因突变启动的胰腺上皮内瘤变(PanIN)细胞发生恶性转化,但其具体机制尚未阐明。目的:探讨Smad4基因沉默的PanIN细胞(PanIN-S细胞)基因表达谱的变化,分析Smad4基因沉默致PanIN细胞增殖和恶性转化的可能分子机制。方法:通过RNA干扰沉默PanIN细胞的内源性Smad4基因表达以构建PanIN-S细胞,小鼠全基因表达谱芯片筛查PanIN细胞与PanIN-S细胞的基因表达谱差异,实时荧光定量RT-PCR验证基因芯片筛选出的细胞周期相关差异表达基因。结果:基因芯片共筛选出237个差异表达基因,其中148个基因在PanIN-S细胞中表达上调,89个表达下调。差异表达基因主要涉及细胞周期、增殖、凋亡、黏附、转录活性等。实时荧光定量RT-PCR验证示细胞周期相关基因p27、p19、细胞周期蛋白(cyclin)D1表达在PanIN细胞与PanIN-S细胞间存在显著差异,与基因芯片筛选结果一致。结论:PanIN-S细胞p27、p19和cyclin D1基因表达发生明显改变,可能参与了PanIN-S细胞的增殖和恶性转化。
- 朱兰柳茂森杨纯英王琪蒋荷姚静静王立夫
- 关键词：基因芯片胰腺肿瘤
